ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 26.10.2023
Просмотров: 82
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования
«СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
КУРС ФАРМАЦИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
к практическим занятиям по фармакогнозии
Макроскопический и микроскопический анализ лекарственного растительного сырья.
Идентификация примесей к лекарственному растительному сырью с помощью
фитохимического анализа.
Архангельск, 2006 г.
Автор: асс. курса фармации кафедры фармакологии Гавриленкова О. В.
Рецензент: профессор кафедры фармакологии, д.м.н. Буюклинская О.В.
ст. преподаватель, к.ф.н. Балцан Т.М.
Введение
Для заготовки качественного лекарственного растительного сырья необходимо не только знать внешний вид производящих растений, но и уметь отличать их от сходных растений – примесей, что является предметом макроскопического анализа лекарственного сырья, а затем и микроскопического. Основная задача макроскопического анализа – определение подлинности лекарственного сырья. Главной целью здесь является обнаружение в общей картине специфичных, особенных, присущих исследуемому объекту, отличающих его от других видов морфологических признаков. Для успешного проведения макроскопического анализа необходимо иметь достаточно глубокие знания морфологии растений.
Техника макроскопического анализа сводится к изучению невооруженным глазом внешнего вида лекарственного сырья, измерению его отдельных частей, органолептическим пробам (цвет, запах, вкус) и качественным химическим реакциям. Исследование лекарственного сырья проводится с использованием соответствующей НД.
Микроскопический анализ в фармакогнозии имеет целью установить подлинность или идентичность лекарственного сырья и заключается в том, чтобы в общей картине анатомического строения различных органов, всевозможных тканей
отыскать характерные диагностические элементы, по которым изучаемый объект отличается от других. Микроскопическому анализу лекарственного сырья часто сопутствует фитохимический анализ – для открытия различных групп БАВ, находящихся в сырье. Это в значительной степени помогает установить подлинность лекарственного сырья.
РЕАКТИВЫ, ПРИМЕНЯЮЩИЕСЯ ПРИ МИКРОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ
Реактивы, используемые при микроскопическом исследовании лекарственного сырья, можно разделить на две группы: 1) включающие и просветляющие жидкости; 2) реактивы для микрохимических реакций и красители.
Включающие и просветляющие жидкости
Характер среды, в которую помещается объект, имеет в микроскопической технике очень большое значение; важную роль играет просветление препаратов. Просветление препаратов имеет целью сделать более явственным исследуемый объект путем устранения ряда клеточных включений, мешающих наблюдению. Различные способы просветления, в зависимости от характера просветляющей жидкости, могут оказывать или химическое воздействие, приводящее к разрушению, растворению, обесцвечиванию всего «липшего» в исследуемом объекте, или достигается физическое просветление применением химически инертных, по оптически активных веществ, которые в результате создания благоприятных условий для прохождения света через препарат, способствуют хорошей видимости деталей наблюдаемого объекта. Объект бывает виден тем яснее, чем больше он отличается по преломляемости света от жидкости, в которую включен. Структура топких, прозрачных клеток в воде видна лучше, чем в глицерине. Если материал мало прозрачен, то необходимо использовать жидкость с большим показателем преломления; такой объект в глицерине будет более прозрачен, чем в воде.
В фармакогностической практике микроскопирования пользуются различными жидкостями для просветления препаратов, в зависимости от природы объекта, плотности тканей, структуры клеток. Эти жидкости обеспечивают видимость объекта и называются просветляющими.
Вода. К дистиллированной воде прибавляют кусочек камфары или кристаллик карболовой кислоты для предотвращения образования плесени. Вода как индифферентная жидкость не имеет значения для включения препаратов, так как в воде не меняется форма, величина клеток, структура и окраска тканей. Крахмальные зерна хорошо видны, алейроновые зерна распадаются, жирное масло группируется в крупные капли, слизь растворяется. Ткани остаются темными и неясно различимыми.
Глицерин. Обычно используют глицерин, разведенный водой (1: 2) с добавлением кусочка камфары или кристаллика карболовой кислоты; неразведенный глицерин отнимает от тканей воду, сморщивает и деформирует их. Только для растворимых в воде включений (например, слизь) пользуются неразведанным глицерином или смешивают его со спиртом в разных частях. Глицерин относится к индифферентным жидкостям, но перед водой имеет то преимущество, что ткани в нем долго не высыхают. Кроме того, глицерин обладает слабыми просветляющими свойствами: при продолжительном воздействии глицерина ткани становятся более прозрачными.
Раствор хлоралгидрата. Состав: 20 частей хлоралгидрата растворяют при нагревании в 5 частях воды и прибавляют 5 частей глицерина, чтобы хлоралгидрат не выкристаллизовывался. Хлоралгидрат является одним из лучших просветляющих средств. Он отличается способностью быстро проникать в ткани, при этом воздух вытесняется, крахмальные зерна разбухают и расплываются; жирные и эфирные масла сначала стекаются в более крупные капли, затем постепенно растворяются; белковые вещества, хлорофилл и другие включения, разрушаясь, растворяются; темно окрашенные ткани светлеют; кристаллы остаются без изменения. Препарат, помещенный в раствор хлоралгидрата, обычно подогревают, иногда дают слабо вскипеть; это усиливает и ускоряет просветляющее действие реактива. Большим недостатком хлоралгидрата является его деформирующее действие на ткани вследствие сильного разбухания оболочек.
Едкая щелочь. Применяют водные растворы едкого кали или едкого натра. Концентрация и продолжительность действия определяются свойствами объекта. Обычно используют 3—5% раствор, редко—10—15% (в зависимости от плотности тканей, толщины листовой пластинки и др.)- Раствор едкой щелочи является сильным просветляющим средством. Крахмальные зерна разбухают и превращаются в клейстер; при продолжительном действии щелочи или при нагревании препарата в этом реактиве жиры омыляются, растворяются белковые вещества, просветляются темно окрашенные ткани. В растворе щелочи клетки сильно набухают, легко разрываются при надавливании. Недостатком раствора едкой щелочи является то, что вследствие сильного разбухания клеток теряется представление об их истинных размерах; это, впрочем, не всегда бывает важно. Из щелочей, кроме указанных выше, используют также раствор аммиака (нашатырный спирт), который является хорошим просветляющим средством; при этом не происходит такого разбухания оболочек клеток, как от раствора едкой щелочи.
Раствор перекиси водорода. 3% раствор используется как просветляющее средство. Можно использовать и более высокие концентрации, они будут более действенными. Однако в таких случаях перекись водорода будет действовать и как мацерирующий реактив, т. е. отделять, изолировать различные элементы (проводящие, механические ткани и др.).
Гвоздичное масло. Прекрасное просветляющее средство: Срезы помещают после обезвоживания. Можно поместить срезы на часовое стекло в разведенное в спирте масло и подержать в эксикаторе до испарения спирта. При этом ткани полностью пропитываются маслом и хорошо просветляются.
Реактивы для микрохимических реакций и красители
Микрохимические реакции производят с целью установления подлинности лекарственного сырья. Они очень разнообразны. С помощью микрохимических реакций устанавливается наличие в лекарственном сырье действующих веществ и нередко их локализация в тканях (алкалоиды, гликозиды, дубильные вещества, жирные, эфирные масла, слизь и др.); с другой стороны, при помощи микрохимических реакций определяют различные части клетки, характер оболочки, содержимое клеточного сока, различные включения. Микрохимические реакции можно производить со срезами, порошком, мацерированным материалом на предметном или часовом стекле, иногда в закрытой чашечке, бюксе (если применяются концентрированные кислоты).
С целью установления природы клеточной оболочки часто используют реактивы па целлюлозу и на одревеснение.
Реактивы на целлюлозу. Xлор - цинк - иод. Очень эффективный и чувствительный реактив, однако, требует тщательного приготовления. Существует много модификаций и рецептов изготовления, дающих надежные результаты. Часто используется следующий рецепт: 20 г хлористого цинка растворяют в 8,5 мл воды, к раствору прибавляют по каплям раствор йода в йодиде калия (3 г KJ; 1,5 г ,J2; 60 мл воды) при постоянном взбалтывании, до появления осадка йода, т. е. до насыщения. Обыкновенно бывает достаточно прибавить 1,5 мл указанного раствора. Могут быть использованы и другие прописи. Хорошо приготовленный реактив можно использовать в точение нескольких лет, если хранить его в темной склянке с притертой пробкой, оберегая от действия света. При работе реактив достают из склянки посредством стеклянной палочки, не затрагивая осадка. Реактив окрашивает клетчатку в сине-фиолетовый цвет. Однако окрашивание часто маскируется частичным одревеснением оболочки, содержанием кутиноподобных веществ, пигментов и прочих веществ, часто присутствующих в клетке.
Йод с серной кислотой. Реактив окрашивает целлюлозу в синий цвет. Окраска яснее и интенсивнее, когда в клеточной оболочке больше целлюлозы и меньше других компонентов (лигнина, кутиноподобных веществ и др.). Производят окраску следующим образом. Препарат пропитывают 1 % раствором йода в йодиде калия, затем под покровным стеклом воздействуют серной кислотой (7 весовых частей 95% серной кислоты па 3 части воды). Или препарат сначала помещают в раствор йода (металлического йода 0,3 г, йодида калия 1,3 г, воды 100 мл) затем обрабатывают серной кислотой (серная кислоты 2 части, воды 1 часть) под покровным стеклом.
Раствор Люголя. Реактив готовят следующим образом: 0,5 г йода и 1 г йодида калия растворяют в небольшом количестве воды и разбавляют водой до 100 мл. Перед употреблением раствор разбавляют водой в отношении 1: 4. Сохраняют в защищенном от света месте. Реактив окрашивает клетчатку в желтый цвет.
Проба на растворение целлюлозы. Целлюлоза составляет основу клеточной оболочки. Она отличается высокой устойчивостью и нерастворимостью в самых разнообразных реактивах. Лишь свежеприготовленный раствор аммиачной окиси меди, так называемый реактив Швейцера, является единственным, известным для целлюлозы растворителем. Раствор готовят следующим образом: 2°/о раствор сернокислой меди обрабатывают соответственным количеством едкого натра или едкого кали. Выпавший осадок гидрата окиси меди отмывают насколько возможно от остатков соли; из него удаляют воду путем отжимания и затем растворяют в крепком водном растворе аммиака. Вместо едкого кали для осаждения можно использовать и 25 % раствор аммиака. Реактив Швейцера хранят в совершенно полной, герметически закупоренной склянке в темном месте. Реакцию можно проводить под покровным стеклом. Однако если в клетке имеется много опробковевших или кутинизированных слоев, то нужна более продолжительная обработка в закрытой чашечке. Клетчатка растворяется в реактиве после медленного разбухания, кутикула остается нерастворенной.
Реактивы на одревесневшие оболочки. Микрохимические реакции на одревеснение довольно многочисленны и разнообразны. Наиболее употребительны следующие.
Флороглюцин с соляной кислотой. Относится к наилучшим реактивам для установления одревеснения. Препарат пропитывают 5 — 10% спиртовым раствором флороглюцина, а затем добавляют 1—2 капли концентрированной соляной кислоты пли 25% раствор серной кислоты. Одревесневшие оболочки принимают яркую вишневую окраску, интенсивность которой зависит от степени одревеснения. Реакция очень чувствительна, однако не стойкая; от воды и нагревания исчезает. Срезы после окрашивания можно перенести в глицерин.