ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 26.10.2023
Просмотров: 85
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Антрагликозиды. В лекарственном сырье антрагликозиды можно обнаружить под микроскопом при помощи реакции с водным раствором (3—5%) едкой щелочи. Ткани, содержащие антрагликозиды, окрашиваются в вишнево-красный цвет. Реакцию можно проводить на срезах или с порошком.
Антрагликозиды в лекарственном сырье легко открываются также методом микросублимации. На предметное стекло берут порошок или грубый соскоб и помещают на асбестовую сетку; над стеклом на расстоянии 3 мм помещают другое предметное стекло. Подставляют под сетку горелку так, чтобы пламя не доходило до сетки на 4 см. Антрагликозиды возгоняются в виде паров желтого цвета и минут через 5 на верхнем (холодном) предметном стекле они осаждаются в виде мелких, желтых кристаллов, которые со щелочью дают кроваво-красное окрашивание. Реакцию микро-сублимации можно провести в пробирке, которая с небольшим количеством порошка или грубого соскоба нагревается в горизонтальном положении (нагревать следует только дно пробирки). На холодных стенках пробирки будут конденсироваться антрагликозиды.
Арбутин. Разбавленная азотная кислота окрашивает клетки, содержащие арбутин, от темно-оранжевого до темно-красно-бурого цвета. Окраска появляется сразу и быстро переходит в светло-желтую. Наличие хлорофилла в тканях маскирует окраску. Хорошие результаты дает также метод микросублимации. Сам арбутин плохо сублимируется, но его агликон — гидрохинон легко возгоняется. Исследуемое сырье измельчают, и порошок помещают на предметное стекло в каплю соляной кислоты (1: 10), хорошо перемешивают и оставляют в покое на несколько минут. Происходит гидролиз арбутина. Затем стекло переносят на асбестовую сотку и дальнейшую процедуру проводят так же, как при микросублимации антрагликозидов. Гидрохинон возгоняется и осаждается в виде кристаллов — мелких моноклинических листочков и призм, крестообразных сростков и в виде «елки». При действии слабого раствора хлорного железа кристаллы растворяются, образуя черную окраску. От аммиака они (сразу или в течение одного часа) дают красновато-бурую окраску.
Гесперидин. Путем осаждения абсолютным спиртом можно получить кристаллы гесперидина и наблюдать их непосредственно в клетках в виде иголочек или сферокристаллов.
Гесперидин можно обнаружить при действии аммиака
, разбавленных щелочей, в которых он легко растворяется с образованием желтого окрашивания.
Подобный результат получается при действии серной кислотой. Реакцию можно проводить на срезах, просматривая их в указанных реактивах.
Реакции на сапонины. Микрохимические реакции для обнаружения сапонинов в тканях растения не всегда достоверны. Срезы нагревают в смеси спирта и концентрированной серной кислоты (равные объемы), добавляют одну каплю концентрированного раствора железа закисного сульфата. В клетках, содержащих сапонины, образуется окрашивание вначале желтое, затем красное, переходящее в фиолетово-голубое (реакция Лафона). Из биологических методов используют метод, предложенный Деляторской, основанный на гемолитических свойствах сапонинов. Названный автором метод «кровяной желатины заключается в следующем: приготовляют 6—8% раствор желатина на физиологическом растворе хлорида натрия. К 2—3 мл этого раствора прибавляют 2—3 капли дефибринированной крови; желатин застывает, и его режут на кусочки. Из подготовленного сырья делают срез, на него кладут кусочек кровяной желатины, покрывают покровным стеклом, придавливают и оставляют на некоторое время. Если в растении есть сапонины, то содержащиеся в желатине эритроциты начнут растворяться и вокруг среза образуется круглая, прозрачная зона — «гемолитический дворик».
Реакции па дубильные вещества. Водные (2—5%) растворы солей окисного железа (хлорид, сульфат, железоаммонийные квасцы) являются очень хорошими реактивами на дубильные вещества и вполне применимы для микрохимических реакций. Ткани, содержащие дубильные вещества, окрашиваются от указанных реактивов в сине-черный или зеленовато-черный цвет. Оттенки окраски мало заметны, так как присутствующие в клетке растительные кислоты (например, лимонная) могут видоизменять окраску (синюю переводить в зеленую).
Довольно часто применяется реакция с бихроматом калия, позволяющая установить локализацию дубильных веществ в тканях. Для этого пользуются раствором бихромата калия 1: 10, помещая в него материал на несколько дней. В клетках, содержащих дубильные вещества, выпадает плотный серо- или красно-бурый хлопьевидный или зернистый осадок. Красно-бурый цвет появляется иногда лишь спустя некоторое время.
Для обнаружения дубильных веществ применяют также концентрированный раствор молибденовокислого аммония в концентрированном растворе хлорида аммония (реакция Гардинера или Висселинга), 25% раствор хлористого аммония— 1 часть, 50% раствор молибденовокислого аммония — 1 часть, вода — 1 часть. Под действием этого реактива в клетках, содержащих дубильные вещества, выпадает желтый осадок; с танином реактив дает красный осадок. Проникновение реактива в ткани ускоряется при подщелачивании раствора (добавлением аммиака). Реакция довольно чувствительная и эффективная, однако ее недостатком является легкая растворимость осадка в воде и разбавленных кислотах, а также слабая устойчивость реактива при хранении.
РЕАКТИВЫ И ХИМИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ АНАЛИЗЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ.
Для определения подлинности лекарственного сырья дополнительно к внешнему осмотру нередко проводят простейшие качественные химические реакции.
Реакции обычно проводят или с 10% водным извлечением из сырья (иногда используют и более слабые извлечения, например, на алкалоиды, дубильные вещества и др.) в пробирках, фарфоровых чашках, на часовых стеклах, или непосредственно с сухим сырьем, нанося каплю реактива на излом, грубый порошок или слегка счищенную скальпелем поверхность объекта (корень, кору и т. д.).
Реакции на алкалоиды
Для испытания на алкалоиды готовят извлечение из сырья в 1—2% соляной или уксусной кислоте (2 г сырья с 50 мл кислоты кипятят в течение 10 минут). Полученное извлечение фильтруют и разливают в пробирки по 1—2 мл. К 1 мл извлечения прибавляют по каплям (2—3 капли) соответствующие реактивы.
Реакции на алкалоиды бывают двух типов: реакции осаждения и реакции с окрашиванием.
Реактивы, осаждающие алкалоиды.
1. Кремневольфрамовая кислота (1% водный раствор).
2. Фосфорномолибдсновая кислота (1—3% водный раствор).
3. Фосфорновольфрамовая кислота (1—3% водный раствор).
4. Реактив Вагнера. 1,27 г йода, 2 г йодида калия и 100 мл воды.
5. Реактив Майера. К 1,358 г раствора сулемы в 60 мл воды приливают раствор 5 г йодида калия в 10 мл воды и разбавляют водой до 100 мл.
6. Реактив Драгендорфа. Раствор 1: 0,85 г нитрата висмута основного растворяют в 40 мл воды и 10 мл уксусной кислоты. Раствор 2: 8 г йодида калия растворяют в 20 мл воды; смешивают равные объемы раствора 1 и 2. К 10 мл полученной смеси добавляют 100 мл воды и 20 мл уксусной кислоты.
7. Бром-калия бромид. 20 г бромида калия растворяют в воде и разбавляют водой до 100 мл. Добавляют бром до появления осадка.
8. 10% раствор танина в воде.
9. Пикриновая кислота (водный раствор 1:10). Перечисленные реактивы образуют с извлечениями из сырья, содержащего алкалоиды, различной интенсивности осадки, мутные или опалесцирующие растворы, что зависит от количества алкалоидов в сырье и от чувствительности реактива.
Осадки обычно белые или окрашенные от реактива (желтоватые, желтовато-бурые при реактивах, содержащих йод).
Реактивы, окрашивающие алкалоиды.
1. Серная и азотная кислоты, чистые концентрированные (в определенных условиях разбавленные). Часто применяется такая пропись: 10 капель разбавленной азотной кислоты (10 капель 30% азотной кислоты на 100 мл воды) в 20 г концентрированной серной кислоты. Пользуются также смесью из 10 капель сильно разбавленной соляной кислоты и 20 мл концентрированной серной кислоты. Эти реактивы со многими алкалоидами образуют различное окрашивание, часто желтое, иди разные оттенки красного, голубого, фиолетового
или зеленого. Окраска получается более устойчивая с чистыми алкалоидами, с извлечением из сырья она менее устойчива.
2. Ванадин-серная кислота. Ванадат аммония 0,1 части, концентрированная серная кислота (чистая) 20 частей. Окрашивает стрихнин в сине-фиолетовый цвет, атропин — в желто-красный, аконитин — в светло-коричневый, бруцин — в кроваво-красный, колхицин и кониин — в зеленый, хинин — в сине-зеленый.
3. Молибден-серная кислота. Молибденовокислый натрий 0,01 г, концентрированная серная кислота 1 мл (реактив — свежеприготовленный). Дает специфические окрашивания с различными алкалоидами.
4. Формалин-серная кислота. 5 мл концентрированной серной кислоты, 1 капля формалина или 0,2 мг формалина растворяют в 10 мл концентрированной серной кислоты, Реактив используется при установлении наличия морфина и его производных, которые дают фиолетовое окрашивание.
5. Пергидроль-серная кислота. На 1 мл пергидроля 10 мл концентрированной серной кислоты. Реактив готовят при охлаждении. От этого реактива получается окраска: с хинином — лимонно-желтая, с эметином — оранжево-красная. Многочисленные специфические реакции на отдельные алкалоиды используются в научных исследованиях.
Реакции на гликозиды
Гликозиды — очень разнообразный по химической природе класс соединений. Общим для них является наличие сахарного компонента, который легко отщепляется под воздействием энзимов или при кипячении с разбавленными кислотами. После гидролиза можно обнаружить присутствие сахара.
Кислотное расщепление гликозидов. Готовят 2—4% водное извлечение из сырья. Обычно берут 2 г исследуемого сырья и 25 мл воды, кипятят в течение 2—3 минут; после охлаждения фильтруют. По 2—3 мл фильтрата наливают в две пробирки; в одну пробирку добавляют 1—-2 мл 10% соляной кислоты, в другую — воду и кипятят в течение 1— 2 минут. В каждую пробирку прибавляют раствор Фелинга (по 2,5 мл первого и второго) и нагревают до кипения. При наличии гликозидов происходит реакция восстановления меди: в пробирке с соляной кислотой появляется кирпично-красный осадок закиси меди.
Реактив Фелинга состоит из двух растворов, приготовленных отдельно.
1. 34,66 г перекристаллизованного сульфата меди растворяют в воде, подкисленной 2—3 каплями разведенной серной кислоты, и разбавляют водой до 500 мл.
2. 173 г сеньетовой соли (натрия — калия тартрат) и 50 г едкого натра растворяют в 400 мл воды, после охлаждения разбавляют водой до 500 мл. Реактивом служит смесь равных объемов двух растворов. Смесь готовят перед употреблением.
Проба «кислотное расщепление гликозидов» позволяет открыть гликозиды в лекарственном сырье. Она основана на освобождении полуацеталыюго гидроксила в сахарной части гликозида (после его гидролиза), за счет которого идет восстановление окиси меди до закиси.
Гликозиды дают осадки с баритовой водой (5 г гидрата окиси бария взбалтывают со 100 мл воды) и с уксуснокислым свинцом (состав реактива см. ниже). Однако с этими веществами подобно реагируют алкалоиды, дубильные вещества, поэтому реакции не являются специфичными для гликозидов.
Реакции на арбутин
Обычно готовят 5% водное извлечение из сырья. 0,5 г грубоизмельченного сырья или порошка кипятят с 10 мл воды в течение 5—10 минут, после охлаждения фильтруют.
1. К 1 мл охлажденного фильтрата добавляют маленький кристаллик сульфата закисного железа; при этом появляется красно-фиолетовое, затем фиолетовое окрашивание, переходящее в темно-фиолетовый осадок. Реакция позволяет открыть арбутин в присутствии дубильных веществ (толокнянка, брусника, бадан). 2. К 1 мл фильтрата добавляют 4 мл раствора аммиака
и 1 мл 10% раствора фосфорно-молибденово-кислого натрия в соляной кислоте, образуется синее окрашивание (обе пробы на арбутин проводят в фарфоровой чашке).
Реакции на антрагликозиды
1. Готовят 5_— 10 % водное извлечение из сырья путем кипячения в течение 3—5 минут, после охлаждения фильтруют. К 1—2 мл фильтрата прибавляют 3—5% раствор едкого натра или едкого кали; образуется вишнево-красное окрашивание.
2. 0,1 г порошка сырья кипятят в течение нескольких минут с 10 мл спиртового раствора едкого натра и фильтруют. По охлаждении фильтрат подкисляют разведенной соляной кислотой до слабокислой реакции и взбалтывают с 10 мл эфира: при этом эфир принимает желтое окрашивание. 5 мл отделенного эфирного извлечения взбалтывают с равным объемом раствора аммиака, последний принимает устойчивое вишнево-красное окрашивание (эмодины). Желтый цвет эфирного слоя при этом не изменяется (хризофанол). Реакции основаны на взаимодействии щелочи с гидроксилами производных антрахинона. Последняя реакция дает возможность дифференцировать отдельные производные антрахинона, что зависит от различной растворимости в органических растворителях и их отношения к раствору аммиака.