Файл: Санитарномикробиологическое исследование мяса птицы.docx

Пробы: голени марок «Наша птичка», «Акашево», «Каждый день»

Питательные среды: мясопептонный агар, мясопептонный бульон, энтерококкагар (г. Махачкала, Россия), Salmonella-Shigella (г. Оболенск, Россия), ТТХ (г. Оболенск, Россия), Bacillus cereus (Индия), скошенный ГРМ агар (г. Оболенск, Россия), Оксфорд агар (Германия), среда Кесслера (г. Оболенск, Россия), среда Фрейзера (Индия), среда Эндо (г. Оболенск, Россия),магниевая среда(г. Оболенск, Россия), физраствор.

Для проведения окраски микроорганизмов применяли стандартный набор окраски по Граму.

Оборудование: холодильник, термостат, автоклав, сушильный шкаф, микроскоп.

Для проведения работ использовали стандартный набор лабораторного оборудования: весы, ножницы, скальпель, горелка, бакпетля, чашки петри, предметные стекла

2.1.2 Методы:

В процессе работы использовали методы определения ОМЧ, КМАФАнМ, посевы штрихом, методом Шукевича, окраска по Граму.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Отбор проб

Работа была выполнена на кафедре МВЭ и ВСЭ Ульяновского ГАУ в апреле 2023 года. Для исследования были взяты три пробы торговых марок, купленных в торговых сетях г. Ульяновска: «Наша птичка», «Каждый день», «Акашево» (рис. 1-3). Дата изготовления прдуктов:


Рисунок 1— проба №1 «Наша птичка»	Рисунок 2 — проба №2 «Каждый день»	Рисунок 3 — проба №3 «Акашево»

Пробы были отобраны стерильным инструментом и помещены в полиэтиленовый пакет, на котором была указана дата, номер и название пробы для исследования в лаборатории кафедры «Микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ» Ульяновского ГАУ.

Определение ОМЧ

Для определения общего микробного числа каждую пробу в объеме 1 грамм помещали в стерильные пробирки содержащих 9 мл изотонического раствора, и оставляли их отстоятся на 10 минут. Затем отбирали 1 мл каждой пробы для приготовления 10-кратных разведений 1:10, 1:100, 1:1000. С каждой пробирки с разведениями производили посев на дно стерильных чашек Петри по 1 мл и заливали 9 мл растопленным 1,5 % мясопептонным агаром, который был предварительно остужен до 45 градусов. После застывания засеянные чашки

, их убрали в термостат на 24 часа при температуре 37 ℃.

На следующий день был отмечен рост на чашках и подсчитано ОМЧ. При этом для подсчета колоний пользовались лупой. Количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 грамме свежего мяса (X) вычисляли по формуле: X = n 10^m,

Где n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;

m– число десятикратных разведений.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое подсчета трёх чашек с разными разведениями продукта. (рис. 4-12)


Рисунок 4 — проба №1 «Наша птичка» Разведение 1:10 n=54	Рисунок 5 — проба №1 «Наша птичка» Разведение 1:100 n=4	Рисунок 6 — проба №1 «Наша птичка» Разведение 1:1000 n=1

По результатам проведенных исследований (рис. 4-6) в пробе №1 торговой марки «Наша птичка» общее микробное число составляет X = 1,93 *10³.


Рисунок 7 — проба №2 «Каждый день» Разведение 1:10 n=144	Рисунок 8 — проба №2 «Каждый день» Разведение 1:100 n=64	Рисунок 9 — проба №2 «Каждый день» Разведение 1:1000 n=11

По результатам проведенных исследований (рис. 7-8) в пробе №2 торговой марки «Каждый день» общее микробное число составляет X = 1,9 *10⁴.


Рисунок 10 — проба №3 «Акашево» Разведение 1:10 n=0	Рисунок 11 — проба №3 «Акашево» Разведение 1:100 n=0	Рисунок 12 — проба №3 «Акашево» Разведение 1:1000 n=0

По результатам проведенных исследований (рис. 10-12) в пробе №3 торговой марки «Акашево» общее микробное число составляет Х=0.

Определение количества БГКП

Методом высева трех проб проводили выявление БГКП. С помощью бактериальной петли сделали посев с физраствора на ТТХ и параллельно в пробирки с 9 мл среды Кеслера затем добавляли 1 г мяса с последующим посевом на ТТХ агар с тергитолом. Чашки были инкубированы в термостат на сутки.

На следующий день в чашках с физраствором , засеянных с трёх проб,роста микроорганизмов не наблюдалось. После инкубации в термостате проб со средой Кесслера наблюдали помутнение и смену цвета на желтоватый, что свидетельствует о синтезе лактозы и наличии в мясе БГКП. (рис. 13)

Рисунок 13 – Штатив с пробирками:

Справа– магниевая среда

Посередине – среда Кесслера;

Слева –среда Фрейзера

Затем методом штриха произвели пересев со среды Кесслера на ТТХ агар. Через сутки инкубирования наблюдался активный рост колоний на всех чашках. (рис. 14). Колонии, выросшие на ТТХ агаре с тергитолом, желто-оранжевого цвета, выпуклые, также преобладали красные колонии. Среда ТТХ с зеленого сменилась на желтый (синтез лактозы)

Рисунок 14 –

Чашки с ТТХ агаром.

Проба №1 «Акашево»

Проба №2 «Наша птичка»

Проба №3 «Каждый день»

По характеру роста бактерий на данной среде, можно увидеть, что колонии лактозоферментирующих эшерихий оранжевого цвета с желтой зоной вокруг, а также небольшое количество лактозоотрицательных колоний темно-красного цвета, предположительно шигелл.

При покраске мазков были обнаружены короткие грамотрицательные палочки с закругленными концами. (рис. 15-17)


Рисунок 15 – Проба №1 «Акашево»	Рисунок 16 – Проба №2 «Наша птичка»	Рисунок 17 – Проба №3 «Каждый день»

Следовательно, во всех трёх пробах торговых марок преобладают бактерии рода Enterobacteriaceae, преимущественно E. Coli и незначительного количества бактерий рода Shigella.

Для выявления присутствия бактерий рода Salmonella использовали 9 мл магниевой среды, в которую добавляли 1 г мяса (рис. 13). Спустя сутки культивирования, бактериальной петлёй методом штриха с магниевой среды сеяли на Salmonella-Shigella агар для обнаружения бактерий рода Salmonella.

Колонии, выросшие на среде Salmonella-Shigella, проросли в пробе №1 и №2, в пробе №3 роста не наблюдалось (рис. 18). Колонии круглые, с ровным краем, черного цвета (результат синтеза сероводорода).

Рисунок 18 – Чашки с Salmonella-Shigella агаром.

Проба №1 «Каждый день»

Проба №2 «Наша птичка»

Проба №3 «Акашево»

Таким образом, по характеру роста бактерий на среде Salmonella-Shigella видим неферментирующие лактозу бесцветные колонии с черными центрами (Salmonella spp.).

При покраске мазков были обнаружены также грамотрицательные палочки (рис. 19-20).


Рисунок 19 – проба №1 «Каждый день»	Рисунок 20 – проба №3 «Наша птичка»

Таким образом, в пробах №1 и №2 торговых марок «Каждый день» и «Наша птичка» преобладают бактерии Salmonella spp.

Для выяыления бактерий рода Listeriaпроизводили посев 1 г мяса в 9 мл среды Фрейзера (рис.13). Через сутки, бактериальной петлей ,методом штриха, пересеяли в хромогенный оксфордский агар. Спустя 48 часов инкубирования в термостате наблюдали рост круглых выпуклых колоний с ровным краем, желтоватого цвета (рис. 21). Listeria monocytogenes гидролизует эскулин на эскулетин и глюкозу. Реагируя с цитратом железа, эскулетин образует коричнево-черный комплекс, что приводит к потемнению среды вокруг колоний. Такого роста обнаружено не было.

Рисунок 21 – Чашки с хромогенным агаром.

Проба №1 «Наша Птичка»

Проба №2 «Каждый день»

Проба №3 «Акашево»

По характеру роста бактерий проб №1 и №3, видим эскулинотрицательные колонии желтоватого цвета. В пробе №2 роста не наблюдается . Бактерий родаListeria обнаружено не было.

При окраске мазков были обнаружены грамположительные кокки, расположенные попарно и скоплениями (рис. 22-23)


Рисунок 22 – Проба №1 «Наша Птичка»	Рисунок 23 – Проба №3 «Акашево»

Таким образом, в пробе №1 и №3 преобладают бактерии рода Staphylococcus, судя по цвету колоний на чашке – S. Aureus.

Определение наличия патогенных бактерий

Для определения бактерий рода Proteus произвели посев в конденсационную воду свежескошенного МПА для определения роста. Посевы инкубировались в термостат на сутки.

Рисунок 24 – Штатив со скошенным агаром

Проба №1 – Каждый день

Проба №2 – Акашево

Проба №3 – Наша птичка
На следующий день рост по скошенному агару можно было наблюдать у проб №1 и №2 (рис. 24).

Для выявления бактерий рода Bacillus была использована среда bacillus cereus. Методом штриха с трех первых разведений на нее был выполнен посев.

Рисунок 25 – Чашки с Bacilluscereus агаром.

Проба №1 «Наша Птичка»

Проба №2 «Каждый день»

Проба №3 «Акашево»

В результате наблюдались белые мутные колонии в пробах №2 и №3 . Так же есть изменение цвета среды с розового на желтый (рис. 25).

Рисунок 26 – Рисунок 27 –

Проба №1 Проба №2

«Каждый день» «Акашево»
При покраске мазков были обнаружены граммотрицательные закругленные палочки (рис. 26-27), из чего можно предположить , что перед нами условно-патогенные бактерии семейства