Файл: Отчет по практике по получению первичных профессиональных умений и навыков, в том числе первичных умений и навыков научноисследовательской деятельности студентки 190 группы 1 курса очной формы обучения.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 22.11.2023
Просмотров: 32
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
К оборудованию микробиологической лаборатории относятся приборы оптические (микроскопы, лупы), приборы термические (термостаты, автоклавы, аппараты Коха, сушильные шкафы, холодильники, микробиологические (бактериологические иглы, петли, шпатели) и хирургические инструменты (скальпели, пинцеты, держатели, ножницы), а также пробирки, чашки Петри, покровные и предметные стекла, стеклянные трубочки, капельницы с красителями. В лаборатории необходимо наличие питательных сред (сухой питательный агар, среда Кесслер, среда Эндо), агар-агара, желатина, аналиновых красителей (фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий, метиленовый голубой), различные кислоты, щелочи, сода.
Для изучения микроорганизмов используется несколько специфических методов. Основными видами микробиологических исследований являются:
- бактериоскопическое (микроскопическое) - изучение с помощью микроскопа формы и строения микроорганизмов;
- бактериологическое - изучение культур микроорганизмов путем культивирования, т.е. выращивания на искусственных питательных средах;
- экспериментальное - определение микроорганизмов и их ядов путем заражений ими подопытных животных (мышей, белых крыс, морских свинок). Чаще всего используется для идентификации возбудителя пищевых отравлений;
- серологическое - определение микроорганизмов при помощи сыворотки крови, содержащей антитела. Этот метод широко используется в медицинской микробиологии.
| РАЗДЕЛ 3. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХИМИЧЕСКИХ, ФИЗИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ |
Температуры, значительно превышающие максимальные, вызывают гибель микроорганизмов. В воде большинство вегетативных форм бактерий при нагревании до 60°С погибают за час; до 70°С – за 10-15 минут, до 100°С – за несколько секунд. В воздухе гибель микроорганизмов наступает при значительно более высокой температуре – до 170°С и выше в течение 1-2 часов. Споровые формы бактерий значительно устойчивее к нагреванию, они могут выдерживать кипячение в течение 4-5 часов. Методы пастеризации и стерилизации основаны на свойстве микробов погибать под действием высоких температур. Пастеризация – осуществляется при температуре 60-90°С, при этом погибают вегетативные формы клеток, а споровые остаются жизнеспособными. Поэтому пастеризованные продукты следует быстро охлаждать и хранить в условиях охлаждения. Стерилизация – это полное уничтожение всех форм микроорганизмов, включая споровые. Стерилизацию осуществляют при температуре 110-120°С и повышенном давлении. Однако споры не погибают мгновенно. Даже при 120°С гибель их наступает через 20-30 минут. Стерилизуют пищевые консервы, некоторые медицинские материалы, субстраты, на которых выращивают микроорганизмы в лабораториях. Эффект стерилизации зависит от количественного и качественного состава микрофлоры объекта стерилизации, его химического состава, консистенции, объема, массы и др. Бактериальные организмы могут существовать и развиваться в весьма широких температурных границах. Различают три экологические группы бактерий по их отношению к температуре окружающей среды: психрофилы, мезофилы, термофилы. К психрофилам относятся формы, развивающиеся при сравнительно низкой температуре. Оптимум развития у этих бактерий лежит при 20–25 °C, а минимум может лежать даже ниже нуля, если эти бактерии развиваются в растворе, замерзающем при температуре ниже нуля. К мезофильным бактериям относится огромное большинство бактерий. Оптимум развития мезофилов лежит при 25–35 °C, максимум – при 45–50 °C и минимум – около 10 °C. Из приведенных для мезофилов температурных границ видно, что эта группа микроорганизмов наиболее соответствует температурам, наблюдающимся в природе в летнее время, и поэтому не удивительно весьма широкое распространение мезофилов в почве, воде и других субстратах. К термофильным микроорганизмам относятся бактерии и близкие к ним актиномицеты, а также некоторые водоросли, по преимуществу сине-зеленые. Все они характеризуются тем, что развиваются при высоких температурах (40–75 °C). Водоросли и ряд представителей животного мира (моллюски и др.), живущие в горячих источниках и гейзерах, развиваются при несколько более низких температурах, чем бактерии и актиномицеты. Из микроорганизмов к термофилам обычно относятся бациллярные формы, образующие споры, а также группа актиномицетов. В состоянии спор термофилы хорошо переносят температуры ниже 30°C, при которых они в вегетирующем состоянии быстро гибнут. Особенностью термофилов является их очень интенсивный обмен, благодаря чему они гораздо энергичнее размножаются и значительно быстрее заканчивают осуществляемые ими микробиологические процессы. Клетки термофилов делятся быстрее, чем у мезофилов, и быстрее стареют и отмирают. |
-
Влияние химических веществ
Многие химические вещества действуют губительно на микроорганизмы. Такие вещества называют антисептиками. Их действие зависит от концентрации и продолжительности воздействия, а также от рН среды и температуры.
Из неорганических соединений наиболее сильно действуют на микроорганизмы соли тяжелых металлов (золота, меди и особенно серебра). Например, ионы серебра адсорбируются на поверхности клетки, вызывая изменения свойств и функций цитоплазматической мембраны.
Бактерицидным действием обладают многие окислители (хлор, йод, перекись водорода, калий марганцево-кислый), минеральные соли (сернистая, борная, фтористо-водородная). Эти вещества вызывают активные окислительные процессы, не свойственные метаболизму клетки, а также разрушают ферменты.
Органические соединения (формалин, фенол, карболовая кислота, спирты, органические кислоты – салициловая, уксусная, бензойная, сорбиновая) также могут губительно воздействовать на микроорганизмы.
Органические соединения вызывают коагуляцию клеточных белков, растворяют липиды и т.д. Бактерицидным действием обладают также эфирные масла, дубильные вещества, многие красители (фуксин, метиленовая синь, бриллиантовая зелень).
Многие химические вещества используются в медицине, сельском хозяйстве, пищевой промышленности как дезинфицирующие вещества. Дезинфицирующие вещества вызывают быструю (в течение нескольких минут) гибель бактерий. Они более активны в средах, бедных органическими веществами. Уничтожают не только вегетативные клетки, но и споры. Они не вызывают появления устойчивых форм микроорганизмов. В пищевой промышленности в качестве дезинфицирующих веществ применяют вещества, содержащие активный хлор (хлорамин, хлорная известь и т.д.).
Применение антисептиков для консервирования пищевых продуктов ограничено, к использованию допущены немногие химические консерванты (бензойная, сорбиноваякислоты и их соли) в малых дозах (от сотых до десятых долей процента).
| РАЗДЕЛ 4. ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ И ТЕОРЕТИЧЕСКИХ ОСНОВ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ В КАЧЕСТВЕ БИООБЪЕКТОВ |
|
Биообъектом может быть целостный, сохранивший жизнеспособность, многоклеточный или одноклеточный организм. Им могут являться изолированные клетки многоклеточного организма, а также вирусы и выделенные из клеток мультиферментные комплексы, включенные в определенный метаболический процесс. Наконец, биообъектом может быть индивидуальный изолированный фермент.
Функция биообъекта – полный биосинтез целевого продукта, включающий обычно ряд этапов, то есть последовательных ферментативных реакций или, в крайнем случае, катализ лишь одной ферментативной реакции, которая имеет ключевое значение для получения целевого продукта.
Биообъект, осуществляющий полный биосинтез целевого продукта принято именовать продуцентом. Иммобилизированный биообъект, являющийся индивидуальным ферментом или выполняющий функцию одной ферментативной реакции используемой биотехнологом – именуют промышленным биокатализатором.
Таким образом, к биообъектам могут быть отнесены как макромолекулы, так микро- и макроорганизмы, то есть от вирусов до человека. В качестве макромолекул в промышленном производстве используются все известные классы ферментов, но наиболее часто - гидролазы и трансферазы.
Наиболее широко в качестве биообъектов используются микроорганизмы. Как биообъекты, микробные клетки прокариот и эукариот в современном биотехнологическом производстве являются продуцентами первичных метаболитов, используемых в качестве лекарственных средств: аминокислот, азотистых оснований, липидных структур, коферментов, моно- и дисахаров, ферментов медицинского назначения, применяемых в заместительной терапии и т.д.
Микроорганизмы образуют также огромное количество вторичных метаболитов, многие из которых также нашли применение в клинике. Например, гормоны, антибиотики, витамины и другие перспективные корректоры гомеостаза клеток млекопитающих.
| РАЗДЕЛ 5. МЕТОДЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В БИОТЕХНОЛОГИИ |
| 5.1. Микроскопический метод исследования |
Микроскопия – это классический универсальный метод исследования, позволяющий быстро и дешево поставить предварительный диагноз на первом приеме у врача и в присутствии пациента. Неотложно начатая терапия предупреждает дальнейшее развитие инфекции
, хронизацию процесса и уменьшает риск развития осложнений. Микроскопический метод может быть использован в качестве скринингового и экспрессметода лабораторной диагностики. Микроскопические методы позволяют не только обнаружить возбудителя, но и оценить ответную реакцию макроорганизма. При микроскопии могут оцениваться: клетки эпителия, сперматозоиды, наличие и относительное количество лейкоцитов как степень воспалительной реакции, морфология, количество и соотношение микроорганизмов, населяющих каждый биотоп. Качество микроскопической диагностики зависит от используемого микроскопа, соблюдения правил взятия материала, транспортировки, хранения биоматериала, приготовления препарата, уровня подготовки и опыта исследователя. Данные методические материалы содержат рекомендации по использованию и настройке микроскопа, а также описание современных методов микроскопической диагностикиПоследовательность микроскопического анализа может быть избрана самим исследователем.
1. Для исследования влажного препарата нужно поместить предметное стекло на столик микроскопа покровным стеклом вверх. Движением ирисовой диафрагмы конденсора необходимо выбрать положение, позволяющее получить контрастное изображение препарата. Если конденсор не оснащен диафрагмой, подобного эффекта можно достичь опусканием конденсора. После завершения микроскопии влажного препарата диафрагму надо открыть.
2. Микроскопию следует начинать с объектива наименьшего увеличения. Ошибка начинающих – приступать к микроскопическому исследованию с большого увеличения или пользоваться малым и средним увеличением лишь в течение короткого времени, что приводит к потере важной информации. Влажный влагалищный препарат покрывает большую поверхность предметного стекла по сравнению с уретральным или цервикальным препаратами, так что удобно начинать с микроскопии влажного влагалищного препарата, применяя малое увеличение (объектив х4). Если микроскоп не имеет этого объектива, нужно применить объектив х10. Уретральный и цервикальный влажные препараты занимают обычно меньшую поверхность стекла, поэтому можно начинать их микроскопию с объектива х10.
3. Под контролем глаза устанавливают наименьшее расстояние между предметным стеклом и объективом с помощью макрометрического винта. Затем, глядя в окуляр микроскопа, вращают этот винт в обратном направлении, наблюдают за появлением изображения и настраивают до получения четкого изображения.
4. Последовательный просмотр всего влажного препарата проводят с применением объектива х4. При отсутствии скоплений и равномерном распределении всех микроскопических объектов можно перейти к следующему увеличению микроскопа путем смены объектива. При большой плотности препарата следует подвинуть край скопления к центру поля зрения и затем изменить увеличение. Этот участок будет виден более отчетливо. При этом надо помнить, что более высокое увеличение сокращает поле зрения по сравнению с предыдущим и увеличивает видимость центральной части препарата.
5. При смене объективов во время просмотра окрашенных препаратов удобно изменять силу света. Маломощный объектив имеет большую апертуру, поэтому достаточно подавать меньше света, и, наоборот, для получения изображения высокомощным объективом требуется больше света.
6. Применяя объектив х10, следует изучить, по крайней мере, 10 полей зрения. При этом увеличении можно идентифицировать клетки эпителия и полиморфноядерные лейкоциты.
7. Весь клинический материал из одной анатомической области должен вначале рассматриваться при малом увеличении.
8. При замене объектива нет необходимости пользоваться макрометрическим винтом.
9. Помните, что применение иммерсионного масла необходимо только для объективов х90 или х100. При переходе от масляной иммерсии к более низкому увеличению необходимо опустить предметный столик для предохранения других объективов от загрязнения маслом
5.2 Окраска мазков по Граму
Окраска по методу Грама, кроме выявления морфологии бактерий, разделяет их на две группы. Бактерии в зависимости от содержания пептидогликана в клеточной стенке обладают способностью по-разному удерживать краситель кристаллический фиолетовый, т.е. обесцвечиваться или не обесцвечиваться спиртом. По результатам окрашивания одни бактерии выглядят при микроскопии фиолетовыми (грамположительные бактерии), другие – розовыми (грамотрицательные бактерии). Некоторые виды бактерий невозможно дифференцировать при окраске по методу Грамма. Это касается не имеющих клеточной стенки микоплазм, очень мелких размеров клеток хламидий, и других бактерий, требующих особых методов окраски (например, кислотоустойчивых микобактерий). Ряд микроорганизмов могут изменять тинкториальные свойства и окрашиваться грамвариабильно, в зависимости от возраста культуры и под действием повреждающих факторов