Файл: Отчет по практике по получению первичных профессиональных умений и навыков, в том числе первичных умений и навыков научноисследовательской деятельности студентки 190 группы 1 курса очной формы обучения.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 22.11.2023
Просмотров: 33
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
, например, антимикробных препаратов. Процедура окрашивания:
1. Препарат высушивают, фиксируют над пламенем горелки несколько секунд. На фиксированный препарат наносят 1% водный раствор кристаллического (или генцианового) фиолетового на 1 мин.
2. На стекло наносят раствор Люголя примерно на 30 сек.
3. Препарат обесцвечивают 96% спиртом до тех пор, пока наиболее тонкие участки препарата не станут бледно-серыми, а стекающая с препарата жидкость не станет бесцветной, что занимает, примерно, 15–30 сек. в зависимости от плотности мазка. Нужно избегать излишнего обесцвечивания, так как это может повлиять на дифференциацию бактерий по цвету.
4. Препарат промывают проточной водой
5. Дополнительно окрашивают препарат фуксином в течение 3 мин. Допускается докрашивание 1% раствором нейтрального красного или сафранина.
6. Краситель сливают со стекла, препарат промывают проточной водой, снимают влагу фильтровальной бумагой и досушивают на воздухе.
Микроскопическое исследование начинают с малого увеличения (объектив х10), затем переходят на большое увеличение (объектив х40), далее используют 19 иммерсионный объектив (объектив х100 иммерсионный), окуляры х7 или х10. При правильной окраске по Граму клетки крови – нейтрофилы, мононуклеары, эпителий и другие клетки имеют розовый цвет. Высокое качество окраски по Граму обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания мазков. При недообесцвечивании грамотрицательные бактерии могут сохранять фиолетовую окраску, а в переобесцвеченных мазках грамположительные микробы приобретают розовый цвет.
Жизнедеятельность дрожжей определяется степенью их приспособленности к внешним условиям. Существенное влияние оказывает температурный режим, содержание кислорода, а также наличие ростовых веществ в производственном субстрате.
Для осуществления дрожжами энергетического обмена питательная среда должна быть полноценна по своему составу. В процессе жизнедеятельности дрожжи непрерывно подвергаются разнообразным превращениям. При этом происходит энергичный рост клетки, увеличение ее массы, формирование клеточной структуры и, наконец, размножение. Истинные дрожжи семейства сахаромицетов размножаются почкованием. В процессе размножения ядро делится на два, одно из них вместе с частью цитоплазмы и другими клеточными элементами переходит в молодую, вновь образующуюся дочернюю клетку. При почковании клетки происходит также деление митохондрий, имеющих вид либо небольших гранул, палочек или нитей, либо цепочек из отдельных зерен. Митохондрии распадаются на отдельные части, причем в каждую клетку (дочернюю и материнскую) обязательно попадает одинаковая часть отделившихся митохондрий. Почкующиеся материнские и дочерние клетки обладают гомогенной плазмой и тонкой оболочкой. Эти молодые клетки содержат большой запас резервных углеводов и мелкие вакуоли.
Для нормального роста, развития и размножения дрожжам необходима энергия, которую они получают в процессе дыхания и брожения. В анаэробных условиях брожение идет интенсивно, однако рост и размножение их заторможены. При этом процессы синтеза в дрожжевой клетке протекают значительно медленнее, чем при дыхании, так как на 1 моль потребленной глюкозы образуется лишь 2 моля аденазинтрифосфата (АТФ), тогда как при дыхании - 38 молей. Таким образом, брожение является значительно менее совершенным способом получения энергии, чем дыхание, и сопровождается большой тратой питательных веществ. При наличии в среде кислорода активность брожения значительно ослабевает, а дыхание возрастает. Повышение активности дыхания способствует ускорению роста и размножения дрожжей.
Начало изучения влияния кислорода на спиртовое брожение было положено Л. Пастером в 1857 г., который впервые установил явление, позднее названное Варбургом "эффектом Пастера". Оно выражается прежде всего в угнетении анаэробного брожения дыханием, в значительном снижении потребления субстрата - глюкозы и уменьшении образования этанола. Это явление послужило в дальнейшем основой для развития учения об эффекте Пастера как об одном из важнейших регуляторных механизмов энергетического обмена дрожжевой клетки.
Механизм действия кислорода на дрожжи очень сложен. Он охватывает все функции клеток. При изучении процесса дыхания было установлено, что дрожжи обладают характерным спектром цитохромов. При изменении условий культивирования (аэрации) отмечены большие колебания системы ферментов дыхания дрожжей. В процессе аэробиоза в клетках происходит образование митохондрий, увеличение активности ферментов электроннотранспортной цепи, цикла Крепса, а также усиление синтеза АТФ.
Работами по изучению роста и размножения дрожжей в условиях периодического культивирования установлено, что дрожжи при этом очень короткое время находятся в фазе логарифмического роста и нередко переходят в угнетенное состояние. Кроме того, дрожжи каждой из последующих генераций по своим свойствам, как правило, отличаются от предыдущих. В результате этого получаемая масса дрожжей не является однородной. Клетки зрелых дрожжей отдельных разводок часто обладают различной физиологической активностью и не одинаково устойчивы к неблагоприятным воздействиям производственных факторов. Более того, длительное культивирование дрожжей при периодическом способе их воспроизводства при одной и той же необновляемой среде, обогащенной продуктами метаболизма, приводит в итоге к угнетению культуры и значительному ослаблению ее биологической активности.
В многочисленных работах по изучению поведения дрожжей при их культивировании, проведенных как в лабораторных, так и в производственных условиях, исследователи обычно суммарно учитывают процессы размножения и брожения всей популяции дрожжей в той или иной среде. В то же время для полноценного управления бродильными процессами, особенно при переводе их на непрерывные, несомненный интерес представляет более углубленное понимание поведения отдельных дрожжевых клеток и корреляции между процессами их размножения и брожения при жизнедеятельности культуры в производственных субстратах.
Промытые клубни картофеля, не очищая, нарезают кружочками. Поверхность их натирают мелом для нейтрализации среды и помещают в чашки Петри на двойной слой фильтровальной бумаги, смоченной водой. Чашки ставят в термостат с температурой 27–30 °С на трое- четверо суток. На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка культуры картофельной палочки. Окраска пленки может быть разной: беловато-серой, розоватой, желто-бурой, черной, – что зависит от разновидностей культуры, получивших преимущественное развитие.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в ходе прохождения практики я изучила основные организационные мероприятия практической работы, узнала о методах стерилизации и дезинфекции, увидела основные технические составляющие микробиологической лаборатории и т.д. Мною были освоены следующие задачи:
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Препарат высушивают, фиксируют над пламенем горелки несколько секунд. На фиксированный препарат наносят 1% водный раствор кристаллического (или генцианового) фиолетового на 1 мин.
2. На стекло наносят раствор Люголя примерно на 30 сек.
3. Препарат обесцвечивают 96% спиртом до тех пор, пока наиболее тонкие участки препарата не станут бледно-серыми, а стекающая с препарата жидкость не станет бесцветной, что занимает, примерно, 15–30 сек. в зависимости от плотности мазка. Нужно избегать излишнего обесцвечивания, так как это может повлиять на дифференциацию бактерий по цвету.
4. Препарат промывают проточной водой
5. Дополнительно окрашивают препарат фуксином в течение 3 мин. Допускается докрашивание 1% раствором нейтрального красного или сафранина.
6. Краситель сливают со стекла, препарат промывают проточной водой, снимают влагу фильтровальной бумагой и досушивают на воздухе.
Микроскопическое исследование начинают с малого увеличения (объектив х10), затем переходят на большое увеличение (объектив х40), далее используют 19 иммерсионный объектив (объектив х100 иммерсионный), окуляры х7 или х10. При правильной окраске по Граму клетки крови – нейтрофилы, мононуклеары, эпителий и другие клетки имеют розовый цвет. Высокое качество окраски по Граму обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания мазков. При недообесцвечивании грамотрицательные бактерии могут сохранять фиолетовую окраску, а в переобесцвеченных мазках грамположительные микробы приобретают розовый цвет.
| РАЗДЕЛ 6. ПРИНЦИПЫ ПЛАНИРОВАНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО И БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПЕРИМЕНТА |
|
Жизнедеятельность дрожжей определяется степенью их приспособленности к внешним условиям. Существенное влияние оказывает температурный режим, содержание кислорода, а также наличие ростовых веществ в производственном субстрате.
Для осуществления дрожжами энергетического обмена питательная среда должна быть полноценна по своему составу. В процессе жизнедеятельности дрожжи непрерывно подвергаются разнообразным превращениям. При этом происходит энергичный рост клетки, увеличение ее массы, формирование клеточной структуры и, наконец, размножение. Истинные дрожжи семейства сахаромицетов размножаются почкованием. В процессе размножения ядро делится на два, одно из них вместе с частью цитоплазмы и другими клеточными элементами переходит в молодую, вновь образующуюся дочернюю клетку. При почковании клетки происходит также деление митохондрий, имеющих вид либо небольших гранул, палочек или нитей, либо цепочек из отдельных зерен. Митохондрии распадаются на отдельные части, причем в каждую клетку (дочернюю и материнскую) обязательно попадает одинаковая часть отделившихся митохондрий. Почкующиеся материнские и дочерние клетки обладают гомогенной плазмой и тонкой оболочкой. Эти молодые клетки содержат большой запас резервных углеводов и мелкие вакуоли.
Для нормального роста, развития и размножения дрожжам необходима энергия, которую они получают в процессе дыхания и брожения. В анаэробных условиях брожение идет интенсивно, однако рост и размножение их заторможены. При этом процессы синтеза в дрожжевой клетке протекают значительно медленнее, чем при дыхании, так как на 1 моль потребленной глюкозы образуется лишь 2 моля аденазинтрифосфата (АТФ), тогда как при дыхании - 38 молей. Таким образом, брожение является значительно менее совершенным способом получения энергии, чем дыхание, и сопровождается большой тратой питательных веществ. При наличии в среде кислорода активность брожения значительно ослабевает, а дыхание возрастает. Повышение активности дыхания способствует ускорению роста и размножения дрожжей.
Начало изучения влияния кислорода на спиртовое брожение было положено Л. Пастером в 1857 г., который впервые установил явление, позднее названное Варбургом "эффектом Пастера". Оно выражается прежде всего в угнетении анаэробного брожения дыханием, в значительном снижении потребления субстрата - глюкозы и уменьшении образования этанола. Это явление послужило в дальнейшем основой для развития учения об эффекте Пастера как об одном из важнейших регуляторных механизмов энергетического обмена дрожжевой клетки.
Механизм действия кислорода на дрожжи очень сложен. Он охватывает все функции клеток. При изучении процесса дыхания было установлено, что дрожжи обладают характерным спектром цитохромов. При изменении условий культивирования (аэрации) отмечены большие колебания системы ферментов дыхания дрожжей. В процессе аэробиоза в клетках происходит образование митохондрий, увеличение активности ферментов электроннотранспортной цепи, цикла Крепса, а также усиление синтеза АТФ.
Работами по изучению роста и размножения дрожжей в условиях периодического культивирования установлено, что дрожжи при этом очень короткое время находятся в фазе логарифмического роста и нередко переходят в угнетенное состояние. Кроме того, дрожжи каждой из последующих генераций по своим свойствам, как правило, отличаются от предыдущих. В результате этого получаемая масса дрожжей не является однородной. Клетки зрелых дрожжей отдельных разводок часто обладают различной физиологической активностью и не одинаково устойчивы к неблагоприятным воздействиям производственных факторов. Более того, длительное культивирование дрожжей при периодическом способе их воспроизводства при одной и той же необновляемой среде, обогащенной продуктами метаболизма, приводит в итоге к угнетению культуры и значительному ослаблению ее биологической активности.
В многочисленных работах по изучению поведения дрожжей при их культивировании, проведенных как в лабораторных, так и в производственных условиях, исследователи обычно суммарно учитывают процессы размножения и брожения всей популяции дрожжей в той или иной среде. В то же время для полноценного управления бродильными процессами, особенно при переводе их на непрерывные, несомненный интерес представляет более углубленное понимание поведения отдельных дрожжевых клеток и корреляции между процессами их размножения и брожения при жизнедеятельности культуры в производственных субстратах.
-
Культивирование картофельной палочки
Промытые клубни картофеля, не очищая, нарезают кружочками. Поверхность их натирают мелом для нейтрализации среды и помещают в чашки Петри на двойной слой фильтровальной бумаги, смоченной водой. Чашки ставят в термостат с температурой 27–30 °С на трое- четверо суток. На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка культуры картофельной палочки. Окраска пленки может быть разной: беловато-серой, розоватой, желто-бурой, черной, – что зависит от разновидностей культуры, получивших преимущественное развитие.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в ходе прохождения практики я изучила основные организационные мероприятия практической работы, узнала о методах стерилизации и дезинфекции, увидела основные технические составляющие микробиологической лаборатории и т.д. Мною были освоены следующие задачи:
-
Организация рабочего места для проведения лабораторных исследований. -
Подготовка лабораторной посуды, инструментария и оборудования для анализов. -
Приготовление растворов, реактивов, дезинфицирующих растворов. -
Проведение дезинфекции биоматериала, отработанной посуды, стерилизация -
Проведение примера, маркировки, регистрации и хранения поступившего биоматериала. -
Регистрация проведенных исследований. -
Ведение учетно-отчетной документации. -
Пользование приборами в лаборатории.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
-
Левинсон У. Медицинская микробиология и иммунология; учебное пособие / У. Левинсон – Москва: Лаборатория Знаний, 2020. – 1182с. -
Просеков А.Ю. общая биология и микробиология: учебное пособие / А.Ю. Просеков. – СПб: Проспект науки 2012 – 320с. -
Гусев М.В., Микробиология / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. – 9 изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2010. – 464с. -
Госманов Р.Г. Микробиология: учебное пособие / Р.Г. Госманов, А.К. Галиуллин и др. – СПб.: Лань, 2019 – 496с. -
Микробиология: учебник / под редакцией Зверева В.В. – М.: ГЭОТАР медиа, 2015. – 384с. -
Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований: руководство А.С. Лабинская. – М. Медицина, 2005. – 157с. -
Алишукина А.В. Медицинская микробиология: учебное пособие для вузов / Алишукина. – Ростов-на-Дону: Феникс, 2011. – 437с. -
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов – М.: Медицинское Инфермагенство, 2005. – 735с. -
Еремина И.А. микробиология учебное пособие / И.А. Еремина. – Кемеровский технический институт пищевой промышленности Кемерово 2007. – 112с. -
Виноградова Г.Н., Захаров В.В. Основы микроскопии. Часть 1 Учебное пособие / Г.Н. Виноградов, В.В. Захаров. – СПб.: университет ИТМО, 2018. – 133с.