Файл: Практикум по нормальной физиологии для студентов ii курса лечебного и педиатрического факультетов.pdf

9
Высушенный мазок окрашивают краской Романовского из расчета 3 капли краски на 1 мл дистиллированной воды. Мазок покрывают тонким слоем краски и оставляют на 30 минут. Затем мазок промывают под проточной водой и сушат.
Смотрят под микроскопом при увеличении 90 с иммерсионным маслом.
Подсчитывают 100 форменных элементов белой крови и результат заносят в таблицу.
ДВИЖЕНИЕ МАЗКА
Результаты работы:
Вывод:
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ И ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА
ТРОМБОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
Тромбоциты – красные кровяные пластинки (бляшки Бицецеро); полиморфные бесцветные клетки, образующиеся из мегакариоцитов, диаметром 2-5

к, живут 8-11 дней. В норме 200-400•10
9
/л. У новорожденных концентрация тромбоцитов такая же, как у взрослых; к 7-9 дню снижается до 164-178•10 9
/л; к концу второй недели – как у взрослых. Увеличение количества – тромбоцитоз, уменьшение количества –
тромбоцитопения.
Цель работы:
Оснащение: смесь Никифорова, предметное и покровное стекла, марлевые салфетки, донорская кровь, капилляр, краска Романовского-Гимза, микроскоп,
иммерсионное масло, счетчик 11-клавишный.
Ход работы: Мазок готовится на обезжиренном стекле с помощью покровного или предметного стекла. Чистые стекла хранятся до употребления в смеси
Никифорова (эфир со спиртом в отношении 1:1) в банке с притертой пробкой. Перед взятием крови стекла вынимают пинцетом и тщательно протирают салфеткой. На палец, обработанный спиртом, наносится капля 14% р-ра МgSО
4
, через которую делается прокол скарификатором. Большим и средним пальцами левой руки берут предметное стекло за ребро и наносят каплю крови на край стекла. Правой рукой берут покровное стекло, ставят его узким краем рядом с каплей крови так, чтобы она растеклась в углу, образованном двумя стеклами. Покровным стеклом под углом 45° проводят по предметному стеклу, растягивая каплю тонким слоем (не толкать ее вперед, иначе кровь не ляжет ровным слоем). Хорошо сделанный мазок должен быть базофилы эозинофилы нейтрофилы лимфоциты моноциты юные п/я с/я до 1%
1-5%
0-1%
2-5%
45-70%
20-40%
2-10%

10 достаточно тонким, немного уже и короче предметного стекла, иметь желтоватый цвет и просвечивать. Высушивают мазок на воздухе, не подогревая. По середине высушенного мазка надписывают имя (фамилию) исследуемого. Мазок фиксируют в смеси Никифорова 10 минут, затем вынимают и сушат в вертикальном положении.
Высушенный мазок окрашивают краской Романовского (для подсчета тромбоцитов концентрация краски вдвое больше, чем для окраски мазка для подсчета лейкоцитарной формулы). Мазок покрывают тонким слоем краски и оставляют на 45 минут. Затем мазок промывают под проточной водой и сушат.
Смотрят под микроскопом при увеличении 90 с иммерсионным маслом, используя окошечко по Fonio. Подсчет количества тромбоцитов производится на
1000 эритроцитов.
Например: эритроцитов – 30, тромбоцитов – 2 и т.д. Подсчитывают на 1000 эритроцитов количество тромбоцитов и рассчитывают по правилу пропорции:
1000 эритроцитов –
5•10 12
эритроцитов –
А тромбоцитов
Х тромбоцитов

Х = 5•10 12
•А / 1000 где А – найденное количество тромбоцитов
ДВИЖЕНИЕ МАЗКА
Результаты работы:
Вывод:
Тема зачтена
___________________подпись преподавателя
Тема раздела:
«ФИЗИОЛОГИЯ КРОВИ»
дата
Занятие № 2: Основные константы крови и механизмы их саморегуляции.
Клинико-физиологические методы исследования крови. Виды и соединения
гемоглобина. Скорость оседания эритроцитов.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:Изучить роль крови как важнейшего компонента внутренней среды организма, характеристику, механизмы поддержания и методы определения важнейших констант крови. Научить студентов определять гемоглобин методом Сали, рассчитывать цветной показатель крови и другие индексы эритроцитов, скорость оседания эритроцитов по Панченкову.
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Плазма и сыворотка крови. Показатель гематокрита. Электролитный состав плазмы. Осмотическое давление крови. Функциональная система, обеспечивающая постоянство осмотического давления крови.

11 2. Белки плазмы крови, их характеристика и функциональное значение.
Онкотическое давление крови и его роль.
3. Изотонический, физиологический, гипо- и гипертонический растворы и их применение в медицине. Принципы составления кровозамещающих растворов. Классификация кровезамещающих растворов. Гемолиз крови, его виды. Осмотическая резистентность эритроцитов.
4. Реологические свойства крови (неньютоновские свойства крови, агрегация и деформируемость эритроцитов).
5. Понятие об эритроне. Нервная и гуморальная регуляция эритропоэза.
Эритропоэтины, ингибиторы эритропоэза.
6. Физиологические характеристики гемоглобина (строение, виды и соединения, функции, спектральный анализ, концентрация в крови человека). Значение исследования гемоглобина в клинике, а также в судебно-медицинской практике. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ), ее механизм и факторы, влияющие на нее. Значение определения СОЭ в клинической практике.
7. Функциональная система, поддерживающая в организме pH крови. Ацидоз и алкалоз (понятие, виды).
8. Внесосудистые жидкие среды организма, их роль в обеспечении жизнедеятельности организма. Лимфа, ее состав, количество, функции.
Транскапиллярный обмен жидкости.

12
ОФОРМИТЬ В ПРОТОКОЛЕ:
Функциональная система поддержания количества форменных элементов крови
Функциональная система поддержания рН крови

13
ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ:
1. Определение концентрации гемоглобина в крови методомСали.
2. Расчет индексов эритроцитов.
3. Расчет кислородной ѐмкости крови.
4. Определение скорости оседания эритроцитов.
5. Изучение осмотической резистентности эритроцитов.
6. Анализ различных видов гемолиза.
7. Решение ситуационных задач: анализ гемограмм.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА
В КРОВИ МЕТОДОМ САЛИ
Определение количества гемоглобина в крови производится колориметрическим методом Сали. Для этого имеется специальный прибор колориметр. Определить количество исследуемого вещества в колориметре можно в тех случаях, когда имеется параллельная зависимость между концентрацией данного вещества в растворе и интенсивностью окрашивания. Простейший тип колориметра – гемометр Сали, которым обычно пользуются для определения Нb в крови. Он состоит из трех пробирок одинакового диаметра. Одна из них пустая, а в других, запаянных с обоих концов, содержится стандартный раствор солянокислого гематина, соответствующий высшему пределу нормы Нb 166,7 г/л. Все три пробирки вставлены в небольшой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. К гемометру приложена пипетка ѐмкостью 0,02 мл (или 20 мм
3
).
Цель: определить абсолютное и относительное содержание гемоглобина.
Абсолютное содержание гемоглобина – количество гемоглобина в граммах в 1 л крови. В норме концентрация гемоглобина (абсолютное содержание) у мужчин – 130-
160 г/л, у женщин – 120-140 г/л. Относительное содержание гемоглобина – это процентное содержание гемоглобина от высшего предела нормы (166,7 г/л) и составляет для мужчин – 80-90%, а для женщин – 70-80%.
Оснащение: гемометр Сали, кровь, капилляр на 0,02 мл, 0,1 n р-р НСl, пипетка, дистиллированная вода.
Ход работы: в градуированную пробирку наливают 0,1 нормальный раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки, а затем при помощи скарификатора делают укол в мякоть пальца левой руки. Первую каплю крови осторожно снимают ватой, а из последующих набирают в пипетку 0,02 мл крови, тщательно обтирают кончик пипетки снаружи и опускают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слои соляной кислоты остался прозрачным. Промывают пипетку соляной кислотой, не вынимая из раствора, чтобы сохранить определенный объем взятой крови. После этого осторожно встряхивают содержимое и наблюдают за изменением окраски в течение 5 минут. За это время полностью происходит образование солянокислого гематина.
Небольшой пипеткой, приложенной к гемометру, набирают дистиллированную воду и добавляют в пробирку к исследуемой жидкости до тех пор, пока цвет раствора не сравняется с цветом стандартных пробирок. При этих условиях процент гематина, а, следовательно, гемоглобина будет одинаков в стандартной и исследуемой крови.
Результаты работы:
Вывод:

14
ИНДЕКСЫ ЭРИТРОЦИТОВ
В клинической практике используют различные расчетные характеристики, отражающие физико-химические свойства эритроцитов. Наиболее широко применяют расчет цветового показателя.
WBS
10 9
/л
4-9 лейкоциты
GRA
%
47-72 гранулоциты (сегментоядер.)
LYM(LYC)
10 9
/л
%
2-5,5 19-37 лимфоциты
MON
10 9
/л
%
1,2-3,0 3-11 моноциты
RBC
10 12
/л
10/мм
3,9-5,0 0,1-0,6 эритроциты
HB г/дл(g/dl) г/л
11-16,0 110-160 гемоглобин
HT, Нrt
%
36-48 гематокрит
MCV мк(

3
)
75-95 сред.V эритроцита
MCH пиког(pg)
24-34 сред. содержание HB в эритроците
MCHC г/дл(g/dl)
30-38 сред. концентр. НВ в эритроците
RDW
%
11,5-14,5 распределение эритроцитов по V
(анизоцитоз)
PLT
10 9
/л
150-400 тромбоциты
MPV мк (

3
)
7,4-10,4 сред. V тромбоцита
PCT
%
0,15-0,4 тромбокрит
PDW
%
10-20 распределение тромбоцитов по V
1. Цветной показатель (ЦП) или (Fi) фарб-индекс (Farb – цвет, index – показатель) относительное содержание гемоглобина в эритроцитах, рассчитывается по формулам: Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов, позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином.
ЦП = (Hb / высшая норма Нb)
:
(Эр. / норма Эр).

Hb/Эр. • норма Эр./ высшая норма Нb

(Hb/Эр.) • (5
•
10 12
/ 166,7) или упрощенно ЦП = Нb•3 / Эр.
(три первые цифры)
В нормеЦП =0,8-1,05 (у новорожденных – 0,9-1,3; до 1 года – 0,75-0,8; после 1 года – как у взрослых).
По величине цветового показателя принято делить анемии на гипохромные
(
ЦП ниже нормы)
, нормохромные и гиперхромные (
ЦП выше нормы).
2. Среднее содержание гемоглобина в эритроците – СГЭ (MCH, Нb
Е
):
СГЭ =

Нb

/ Эр.
(три первые цифры)
где

Нb

– содержание гемоглобина в г/л
Расчет данного показателя можно произвести по номограмме (по Мазону) или с помощью современных автоматических гематологических анализаторов.
В норме
27-31 пг (10
-12
г), (у взрослых – 30 пг; у новорожденных – 33,3 пг; 5-6 мес. – 26,1 пг).
Показатель среднего содержания гемоглобина в эритроците важен для суждения о гипо- и гиперхромии эритроцитов. Гипохромия
–
истинный показатель

15 дефицита железа в организме. Гиперхромия зависит исключительно от толщины эритроцитов (макроциты, мегалоциты), а не от степени насыщения их гемоглобином.
3. Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах – КГЭ (MCHC, НbК
Е
)
–
отражает степень насыщения эритроцитов гемоглобином в % и вычисляется по номограмме или по формуле:
КГЭ =

Нb

/Нrt • 100% где

Нb

– содержание гемоглобина в г/л; Нrt – гематокрит
В норме 30-38%.
4. Средний объем эритроцита – ОЭ (MCV, DV
Е
) – является важным при диагностике различных форм анемий. Вычисляют по номограмме, с помощью гематологического счетчика или по формуле:
ОЭ= Нrt•10 /Эр.
(три первые цифры)
, где Нrt – гематокрит
В норме 75-95 мкм
3
(

3
)
5. Средний диаметр эритроцита (СДЭ) – вычисляют из результатов эритроцитометрии путем умножения каждого процента клеток на величину диаметра этих клеток, затем суммируют эти произведения и делят на 100.
Нормальные величины: 7,5-7,6 мкм
Примечание: G1 – «флаг» – говорит о возможном наличии юных и палочкоядерных форм лейкоцитов (рекомендуется «ручной» пересчет)
Результаты работы:
ЦП =
СГЭ =
КГЭ =
ОЭ =
СДЭ =
Вывод:
РАСЧЕТ КИСЛОРОДНОЙ ЁМКОСТИ КРОВИ
Кислородная емкость крови – максимальное количество кислорода, которое может содержаться в определенном объеме крови (1 л) при полном насыщении гемоглобина кислородом. В норме кислородная емкость крови 180-220 мл О
2
в 1 л крови.
Кислородная емкость крови рассчитывается по формуле:
Г
Hb
КЕ


,
Hb – концентрация гемоглобина, г/л;
Г – константа Гюфнера = 1,36 мл О
2
(количество мл О
2
, присоединяемых 1 г гемоглобина).
Результаты работы:
Вывод:

16
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СКОРОСТИ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) – показатель, характеризующий оседание эритроцитов крови при добавлении антикоагулянта. Главным фактором, от которого зависит
СОЭ, является соотношение белковых фракций плазмы. При увеличении содержания крупнодисперсных белков (фибриноген, глобулины) СОЭ увеличивается. Альбумины, имеющие самую мощную гидратную оболочку, уменьшают СОЭ. Зависит СОЭ от заряда самих эритроцитов, чем слабее заряжены эритроциты, тем выше их способность к агрегации и СОЭ. Определяется СОЭ также размерами эритроцитов, чем меньше диаметр эритроцитов, тем выше СОЭ. В норме у мужчин СОЭ – 3-9 мм/час, у женщин – 6-12 мм/час.
Цель работы:
Оснащение: штатив Панченкова, капилляры, кровь, 5% раствор цитрата натрия, часовое стекло, ватные шарики.
Ход работы: капилляр промывают 5% раствором цитрата натрия. Затем набирают
50мм цитрата натрия в капилляр до метки «Р» и выдувают на часовое стекло. В тот же капилляр дважды набирают кровь до метки «К». Обе порции крови выдувают на часовое стекло и тщательно смешивают с имеющимся там цитратом натрия. Полученную таким образом на часовом стекле смесь крови с цитратом натрия в соотношении 4:1 набирают в капилляр до метки «0» и ставят капилляр в штатив Панченкова. Через час оценивают высоту образовавшегося слоя плазмы в капилляре в миллиметрах.
Рекомендации к оформлению работы: зарисуйте капилляр и прибор Панченкова, определите СОЭ исследуемой крови, сделайте вывод о соответствии данного результата с нормой и клиническом значении данного показателя.
Результаты работы:
Вывод:
ИЗУЧЕНИЕ ОСМОТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ
Объем и нормальная функция эритроцитов определяется средой, в которой они находятся. Изотонические растворы (например, 0,9% NaCl; 5% глюкозы) имеют одинаковое с эритроцитами осмотическое давление. В них эритроциты сохраняют свою форму. Гипертонические растворы (например, 3% NaCl, 40% глюкозы) имеют большее, чем эритроциты осмотическое давление. Вода из эритроцитов уходит в окружающий раствор, они сморщиваются. Это явление называется ПЛАЗМОЛИЗ.
Гипотонические растворы (менее 0,9% NaCl) имеют меньшее, чем в эритроцитах осмотическое давление. Вода из окружающего раствора поступает в эритроциты, они набухают и разрушаются, гемоглобин выходит в окружающий раствор, наступает
ГЕМОЛИЗ.
Осмотическая резистентность эритроцитов – устойчивость эритроцитов к действию гипотонических растворов. Выраженные признаки гемолиза у здорового человека начинаются в 0,48% растворе NaCl, в 0,34% растворе разрушаются все эритроциты. В клинической практике определяют стойкость эритроцитов к гипотоническим растворам NaCl. В связи с тем, что различные эритроциты неодинаково устойчивы к одной и той же концентрации гипотонического раствора различают минимальную и максимальную стойкость.

17
Минимальная стойкость выражает стойкость самых слабых эритроцитов и определяется концентрацией NaCl, в которой они еще не разрушаются. Например: гемолиз отсутствует при 0,6%, 0,5% и 0,45% NaCl, а при концентрации 0,4% NaCl наступает гемолиз. Минимальная стойкость равняется в этом случае 0,45% NaCl.
Максимальная стойкость выражает резистентность наиболее устойчивых эритроцитов и определяется концентрацией NaCl в которой эти эритроциты не разрушены. Например: при 0,35% NaCl имеется неполный гемолиз (часть эритроцитов в осадке), полный гемолиз наступил при 0,3% NaCl. Максимальная стойкость в данном случае равняется 0,35% NaCl.
Границы нормальной стойкости эритроцитов человеческой крови по отношению к гипотоническим растворам NaCl: минимум – 0,48%, максимум –
0,32%.
Цель работы:
Оснащение: штатив с 14 пробирками, 1% р-р NaCl, дист. вода, пробирка с донорской кровью, 2 пипетки.
Ход работы: Гипотонические растворы готовятся согласно таблице (см. ниже).
Затем в каждую пробирку прибавляют одинаковое количество (по капле) дефибринированной крови (0,02 мл) при помощи капилляра от гемометра. При этом капилляр не опускают в раствор, а выдувают кровь из нее на стенку пробирки и взбалтывают кровь. При заполнении всех 14 пробирок их встряхивают и оставляют стоять в течение часа при комнатной температуре. После этого по цвету раствора и по полному гемолизу отмечают минимальную и максимальную осмотическую стойкость эритроцитов.
Рекомендации к оформлению работы: зарисуйте пробирки, укажите концентрацию раствора NaCl в каждой пробирке. Отметить в таблице: знаком «−» – если в осадке имеются эритроциты, а верхний слой не окрашен (отсутствие гемолиза); знаком «±» – если верхний слой окрашен, но еще сохраняется осадок (неполный гемолиз) и знаком «+» – прозрачная равномерно окрашенная жидкость «лаковая кровь» (полный гемолиз). Указать концентрации NaCl, соответствующие максимальной и минимальной резистентности исследуемой крови и сравнить данные с нормой.
Результаты работы:
Пробирки
1 2
3 4
5 6
7 8
9 10 11 12 13 14 1% р-р NaCl (в мл)
0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6 0,55 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2
Н
2
О (в мл)
0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 0,75 0,8
Концентрация полученного р- ра NaCl (в %)
0,85 0,8 0,75 0,7 0,65 0,6 0,55 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2
Результаты
Вывод:

18
АНАЛИЗ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ ГЕМОЛИЗА
Гемолиз – это разрушение эритроцитов, сопровождающееся выходом гемоглобина в раствор (окрашивается в красный цвет и становится прозрачной –
«лаковая кровь»). Виды гемолиза: осмотический, химический, биологический, температурный (холодовой, тепловой), механический.
Цель работы:
Оснащение: штатив с пятью пробирками, пипетки, физиологический раствор, дистиллированная вода, 0,1%-ный раствор HCl, 5%-ный раствор глюкозы, сапонин, исследуемая донорская кровь.
Ход работы: в штатив ставят 5 пробирок, в каждую из которых наливают по 3 мл соответственно физиологического раствора, дистиллированной воды, 0,1%-ного раствора HCl, 5%-ного раствора глюкозы, раствора сапонина. Во все 5 пробирок вносят пипеткой по 2 капли крови. Рассматривая содержимое всех 5 пробирок, сравнивают результаты.
Рекомендации к оформлению работы: Определите наличие или отсутствие гемолиза в каждой пробирке. Опишите механизм гемолиза в каждой пробирке.
Результаты работы:
Вывод:
Решение ситуационных задач
: анализ гемограмм.