Добавлен: 03.12.2023
Просмотров: 85
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Свободные ионы железа могут образовываться в клетке при переносе между трансферрином и низкомолекулярными хелаторами, ферритином и хелаторами, хелаторами и митохондриями, при деградации ферритина в лизосомах, при избыточном накоплении гемосидерина. Несвязанное железо вместе с супероксид-радикалом, который восстанавливает Fe(III), и перекисью водорода, образующейся в ходе реакции Фентона, поставляют высоко реакционноспособные гидроксильные радикалы. Суммой этих двух реакций является так называемая реакция Габера-Вейса. Fe(III), получающееся при реакции Фентона, также может быть восстановлено аскорбатом, что ведет к дальнейшей продукции радикалов. Обладающий высочайшей активностью гидроксильный радикал вызывает перекисное окисление липидов, разрывы нитей ДНК и деградацию других биомолекул.
Таким образом, ионы железа постоянно находятся в связанной форме. Главные органы, выполняющие функцию хранения железа, - это печень, которая содержит около 700 мг железа, селезенка и костный мозг. Мышцы также важны из-за их большой массы, хотя реальная концентрация хранимого в них железа низкая - 40 мг/кг.
Рис. 2 Транспорт и депонирование железа в организме здорового человека.
Материалы и методы исследования
1)Определение уровня железа сыворотки крови, общей железосвязывающей способности и степени насыщения трансферрина, уровня ферритина сыворотки крови и растворимого sTfR рецептора к трасферрину.
Из многочисленных методов количественной оценки содержания железа в сыворотке крови наибольшее распространение получили методы определения железа по цветной реакции с батофенантролином. В основе этих методов лежит свойство двухвалентного восстановленного железа (Fe2+) образовывать яркоокрашенный комплекс с батофенантролином. Интенсивность окраски комплекса, соответствующую концентрации Fe2+ в сыворотке, определяют фотометрически. Предварительно белки сыворотки крови осаждают трихлоруксусной кислотой и восстанавливают сывороточное железо в двухвалентную его форму (Fe3+ в Fe 2+) с помощью гидразина или тиогликолевой кислоты.
В норме у мужчин в сыворотке крови содержится 13-30 мкмоль/л негеминового железа, у женщин - примерно на 10-15% меньше.
Общая железосвязывающая способность сыворотки (ОЖСС) отражает резервную «незаполненную» железом емкость транспортного белка - трансферрина. При ЖДА всегда наблюдается повышение ОЖСС в отличие других типов гипохромных анемий.
Рецептор sTfR трансферрина - альтернативный параметр, указывающий на функциональный недостаток железа. Транспорт железа в клетку происходит при взаимодействии комплекса железо-Tf со специфичным для Tf рецептором плазматической мембраны.
Структура рецептора: две одинаковые пептидные цепи, проходящие сквозь мембрану клетки, связаны несколькими дисульфидными мостиками. Молекула Tf, несущая два атома железа, «причаливает» на внешний конец рецептора, после чего поглощается клеткой путем эндоцитоза (Рис.3).
Рис.3 Работа растворимого sTfR рецептора к трансферрину.
Белковая часть Tf, освободившись от железа, вместе с рецептором выходит на поверхность клетки, где апо-трансферрин отделяется и весь цикл повторяется.
При повышенной потребности в железе, цикл рецептора Tf ускоряется и все больше рецепторов располагается на поверхности клетки. При этом все чаще внеклеточная часть рецептора подвергается воздействию протеаз, в результате чего от рецептора отделяется и попадает в кровь довольно стабильный фрагмент - пептид с молекулярным весом 95 кД, называемый «растворимым» рецептором трансферрина (sTfR), концентрацию которого в сыворотке крови можно определить при помощи иммунологических методов.
Т.о., уровень sTfR в крови отражает «железное голодание» клетки. Рассматривая диагностическое значение sTfR, следует помнить, что 80% рецептора ТФ находится на мембране эритропоэтических клеток, присутствует он в клетках плаценты, лимфоцитах, некоторых раковых клетках.
Чем ниже содержание Fe в клетке, тем выше экспрессия рецепторов трансферрина
При высокой скорости синтеза рецепторов трансферрина происходит угнетение синтеза молекул ферритина
При проведении исследования особые требования предъявляются к технике взятия крови, поскольку неизбежное при этом разрушение эритроцитов и увеличение содержания в сыворотке свободного гемоглобина может оказать существенное влияние на результаты.
) Мазок крови
Для правильной интерпретации СОЭ необходимо исследование мазка периферической крови (рис. 4; 5) поскольку:(1) одновременное наличие клеток малого и большого объема создает представление о нормальном размере эритроцитов;
(2) включение в подсчет ретикулоцитов, имеющих большие размеры, чем зрелые эритроциты, ведет к завышению СОЭ
(3) эритроидные клетки аномальных размеров могут присутствовать в столь малом количестве, что не влияют на вычисляемый СОЭ.Эритроцитометрическая кривая используется для оценки анизоцитоза(вариабельности размеров эритроцитов) и полезна в дифференциальной диагностике анемий с близкими значениями СОЭ. Для железодефицитной анемии характерен низкий СОЭ. Исследование мазка периферической крови имеет решающее значение в диагностике анемий. При приготовлении мазков не должно возникать артефактов. Морфологию эритроцитов лучше изучать в той части мазка, где они расположены в один слой и лишь соприкасаются друг с другом. Важно выявить специфические нарушения морфологии эритроцитов (обсуждаемые при рассмотрении отдельных типов анемии), а также изменения структуры и количества лейкоцитов и тромбоцитов. Исследование мазка периферической крови нередко позволяет установить окончательный диагноз или значительно сузить выбор из возможных нозологических форм, для разграничения которых используют дополнительные исследования. Д. Дополнительные исследования, по возможности, проводят до гемотрансфузии.
Эритроцит - безъядерная клетка, имеющая форму двояковогнутого диска с кольцеобразным утолщением по краям (Рис.4)
Морфология эритроцитов в мазке крови (Рис.5)
) Гематологический анализатор
Это прибор (комплекс оборудования), предназначенный для проведения количественных и качественных исследований крови в клинико-диагностических лабораториях. Бывают автоматические, полуавтоматические.
Число определяемых показателей. Этот параметр в зависимости от модели анализатора варьируется от 8 до 40. Кроме этого анализатор позволяет получать распределения клеток по объему - до 3 гистограмм и до 6 двумерных скэтограмм. Число определяемых показателей является очень важным параметром. Чем больше число определяемых показателей, тем больше диагностической информации получает врач и, следовательно, выше эффективность лечебно-диагностического процесса.
При работе в исследовании был использован автоматический гематологический анализатор CELLTAK F. Специально разработанный для клинических лабораторий и представляет собой полностью автоматизированный прибор. Гематологический анализатор способен обрабатывать десятки образцов в час, с соответствующей спецификации точностью и воспроизводимостью, а также хранить результаты тестов во встроенной памяти и, при необходимости, распечатывать их на встроенном термопринтере. Прибор имеет 22 определяемых показателя (некоторые из них представлены в Табл. 4)
Таблица 4 Гемограмма с гематологического анализатора
| Нормальные значения для взрослых: | Женщины | Мужчины |
| Лейкоциты (WBC) | 4,5-11,0*109/л | 4,5-11,0*109/л |
| Эритроциты(RBC) | 4,2-5,4*1012/л | 4,7-6,1*1012/л |
| Гемоглобин(HGB) | 12-16 г/дл | 14-18 г/дл |
| Гематокрит(HCT) | 37-47% | 42-52% |
| Средний объем эритроцита (MCV) | 81-99 фл | 80-94 фл |
| Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) | 27-31 пг | 27-31 пг |
| Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) | 33-37 г/дл | 33-37 г/дл |
| Показатель распределения эритроцитов по объему (RDW) | 11,5-14,5% | 11,5-14,5% |
| Тромбоциты (PLT) | 130-400*109/л | 130-400*109/л |
) Биохимический анализатор
Биохимический анализатор - прибор, использующийся для клинических и химических исследований различные механические и компьютерные технологии. С их помощью возможно определение наличия и концентрации электролитов, субстратов, ферментов, липидов, специфических белков, гормонов, лекарственных препаратов и наркотических веществ в практически любых видах биологического материала: сыворотка, плазма, спинномозговая жидкость, моча.
Биохимические анализаторы обеспечивают выполнение срочных и плановых, специальных и традиционных клинико-биохимических тестов и анализов.
Различают полностью автоматические и полуавтоматические биохимические анализаторы. Первые выполняют большинство операций: отбор материала и необходимых реагентов, их смешивание и нагрев, анализ и обработка полученных данных, их распечатка и промывание оборудования после завершение всех процедур с исследуемыми образцами автоматически. Полуавтоматические биохимические анализаторы требуют подготовки анализируемых реакционных смесей вручную и их использование больше подходит для небольших лабораторий с малым количеством исследуемых материалов.
Использование биохимических анализаторов в биохимических и клинико-диагностических лабораториях обеспечивает точность измерений, экономию реактивов, простоту управления, легкое документирование результатов и длительную безотказную работу.
) Лазерный нефелометр
Определяемые параметры: IgG (сыворотка, моча, ликвор), IgA (сыворотка), IgM (сыворотка), C3c (сыворотка), C4 (сыворотка), трансферрин (сыворотка, моча), альбумин (сыворотка, моча, ликвор), Ig/L Kappa (сыворотка, моча), Ig/L Lambda (сыворотка, моча), церулоплазмин (сыворотка), альфа-1-антитрипсин (сыворотка), СРБ (сыворотка), ревматоидный фактор (сыворотка), альфа-1-кислый липопротеин (сыворотка), APO A-1(сыворотка), APO-B (сыворотка), альфа-2-макроглобулин (сыворотка), гаптоглобин (сыворотка), фибриноген (плазма), бета-2-микроглобулин (сыворотка, моча), FREELITE™ HUMAN KAPPA FREE(I) (сыворотка), FREELITE™ HUMAN LAMBDA FREE(I) (сыворотка), человеческий IgG субкласс(I) (сыворотка), преальбумин (сыворотка), антитромбин (плазма), LP (a) (сыворотка), IgE (сыворотка), ферритин (сыворотка).
МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ: Нефелометрия - это измерение специфических белков крови, основанное на реакции преципитации комплекса «белок - высоко специфичная сыворотка». Для этого производятся измерения бокового рассеяния лазерного излучения на длине волны 840 нм. Многочисленные исследования по всему миру доказали точность результатов получаемых нефелометрическим методом. Эта точность основана на высокой чувствительности этого метода и на качестве реагентов, которое обуславливает высокую специфичность при определении концентраций белков.