Файл: Бактерии общая характеристика, положение в системе микроорганизмиов. Основные принципы классификации микроорганизмов.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 26.10.2023
Просмотров: 741
Скачиваний: 25
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Бактерии – общая характеристика, положение в системе микроорганизмиов. Основные принципы классификации микроорганизмов.
Известно около 2500 видов. Имеют клеточное строение, но не имеют ядра, отделенного мембраной от цитоплазмы. Бактерии по форме бывают: шаровидные (кокки), палочковидные (бациллы), изогнутые (вибрионы), спиральные (спириллы), в виде цепочки (стрептококки), в виде гроздей (стафилококки).
Большинство не содержит хлорофилла и питается готовыми органическими веществами – гетеротрофно, однако существуют и гомотрофы. По способу добычи пищи гетеротрофные делятся на три группы: паразиты, сапрофиты и симбионты.
Освоили все среды обитания. Живут практически везде: в почве, в пыли, в воздухе, в воде, на теле животных, внутри живых организмов.
Размножаются каждые 20–30 минут.
По новой системе различают три домена: «Bacteria» (эубактерии), «Archaea» (архебактерии) и «Еисагуа»(эукариоты). Домены включают типы, классы, порядки, семейства, роды, виды. Бактерии являются прокариотами (у прокариотической клетки ядро, называемое нуклеоидом, не имеет ядерной
оболочки, ядрышка и гистонов, а цитоплазма не содержит высокоорганизованных органелл). В старом Руководстве Берджи по систематической бактериологии бактерий делили по особенностям клеточной стенки бактерий на 4 отдела:
-
Gracilicutes — грациликуты - эубактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные; -
Firmicutes — эубактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные; -
Tenericutes — эубактерии c мягкой клеточной стенки; -
Mendosicutes — архебактерии с дефектной клеточной стенкой и особенным строением РНК.
Каждый отдел был разделен на секции, или группы, по окраске по Граму, форме клеток, потребности в кислороде, подвижности, особенностям метаболизма и питания.
Основными признаками для классификации бактерий являются:
-
Морфологические свойства (форма, строение КС, наличие жгутиков и тд.) -
Тинкториальные св-ва (способность окрашиваться анилиновыми красителями) -
Культуральные св-ва (Хар-р роста на различных средах) -
Подвижность -
Спорообразование -
Физиологические св-ва (Способ питания, дыхания и тд) -
Биохимические св-ва -
Чувствительность к бактериофагам -
Антигены -
Хим. Состав КС -
Степень гомологии ДНК: а) 60-100% - 1 и тот же вид; б) 40-60% - разн. Виды 1 семейства
2. Иммерсионный микроскоп, разрешающая способность, техника микроскопии. Иммерсионное масло, значение для микроскопии.
При микроскопии иммерсионным объективом х90 обязательным условием является его погружение в кедровое, персиковое или в вазелиновое масло, показатели преломления, света у которых близки предметному стеклу, на котором делают препараты. В этом случае падающий на препарат пучок света не рассеивается и, не меняя направления, попадает в иммерсионный объектив. Разрешающая способность иммерсионного микроскопа находится в пределах 0,2 мкм, а максимальное увеличение объекта достигает 1350.
Техника микроскпии:
При использовании иммерсионного объектива вначале центрируют оптическую часть микроскопа. Затем поднимают конденсор до уровня предметного столика, открывают диафрагму, устанавливают объектив малого увеличения и при помощи плоского зеркала освещают поле зрения. На предметное стекло с окрашенным препаратом наносят каплю масла, в которую под контролем глаза осторожно погружают объектив, затем, поднимая тубус, смотрят в окуляр и вначале макро–, а потом микровинтом устанавливают четкое изображение объекта. По окончании работы удаляют салфеткой масло с фронтальной линзы объектива.
Принцип
Масляная система за счет выравнивания показателей преломления света повышает уровень полезного увеличения микроскопа.
Разрешающая способность – 0,2 мкм.
Применение.
Изучение окрашенных объектов, размеры которых не превышают 0,2 мкм.
Иммерсионная система — оптическая система, в которой пространство между первой линзой и предметом заполнено жидкостью. Применяемая таким образом жидкость называется иммерсионной. Толщина слоя жидкости между объективом и препаратом может меняться, и за счет этого можно в некоторых пределах изменять компенсацию сферической аберрации.
В расчёте объективов микроскопа оптические параметры иммерсионной жидкости (показатель преломления и дисперсия) учитываются при коррекции аберраций оптической системы (исправление кривизны поля, сферических и хроматических аберраций).
Применяются:
Кедровое или минеральное масло (показатель преломления 1,515)
Водный раствор глицерина (1,434)
Физиологический раствор (1,3346)
Вода (1,3329)
Монобромнафталин (1,656)
Вазелиновое масло (1,503)
Йодистый метилен (1,741)
3. Техника приготовления мазка из культуры бактерий.
Для приготовления мазка необходимо иметь:
• Чистое обезжиренное предметное стекло.
• Бактериологическую петлю
• Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.
• Спиртовку.
• Набор красителей.
1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.
Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры наносят петлей на предметное стекло.
Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал.
Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, округлой формы, размером 1,5-2 см.
2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре.
3. Фиксация мазка производится с целью:
• Убить микробные клетки.
• Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу.
• Облегчить дальнейшее окрашивание.
Фиксация мазка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пламени должно длиться 2 секунды.
Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших использующих химические фиксаторы:
• Метиловый спирт в течении 5-и минут.
• Этиловый спирт (96°) в течении 10-и минут.
• Смесь Никифорова — в течении 10-15 минут.
• Ацетон — в течении 5-и минут.
• Пары формалина — в течении нескольких секунд.
4. Окраска препаратов проводится:
• Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только один краситель;
• Сложными методам, когда определяются клеточные структуры.
После экспозиции мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
4.Простые и сложные методы окраски бактерий, их информативность, область применения.
Существуют простые и сложные способы окрашивания микробов.
Простой метод окраски является ориентировочным и позволяет определить наличие бактерий в препарате, их форму, размеры и взаиморасположение клеток. Для окраски этими методами обычно используют один краситель, позволяющий отличить частицы от неокрашенного фона (например, водный фуксин (красный) или метиленовый синий).
Сложные методы окраски предусматривают последовательное использование нескольких красителей различного химического состава. Кроме красящих веществ, при сложных методах окраски применяют различные обесцвечивающие в-ва : спирт, кислоты. Среди сложных методов окраски различают дифференциальные методы, позволяющие выявить хим. и структурные особенности бактериальной кл. и методы, предназначенные для выявления отдельных структур клетки. К дифференциальным методам относятся методы Грама и Циля-Нельсена, а для выявления структурных особенностей используют методы по Ожешко, Бури-Гинсу и тд.
Окрашивание:
-
Споры - Циль-Нильсон, Ожешко, Шефил-Фултон -
По Нейсеру – зерна волютина, идентификация коринебактерий -
По Бури-Гинсу – капсул -
По Морозову - выяв. Жгутиков, трепонем -
По Здрадовскому – выяв. Риккетсий, хламидий -
По Романовскому-Гинзе – спирохет, риккетсий, хламидий, простейших
5.Негативные способы окраски мазков, область применения.
Негативная окраска заключается в том, что на окрашенном фоне выделяются неокрашенные микроорганизмы. Этот способ применяют чаще для окраски извитых форм микроорганизмов — спирохет, трипаносом (рис. 6) Для негативной окраски используют черную тушь, кислый фуксин и нигрозин. К 2 %-ному водному раствору нигрозина для длительного сохранения добавляют 0,4 % хлороформа.
Негативный метод Бурри-Гинса используется для окраски капсульных бактерий и основан на том, что капсула не воспринимает красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бури. Для этого черную тушь смешивают в культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд. В результате на темном фоне хорошо видна бесцветная капсула и красные тела микробов.
6.Окраска бактерий по Грамму, химизм окраски.
Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.
Химизм окраски:
1) генцианфиолет (модификация Синева) – 2 мин
2) раствор Люголя (йодный препарат) – 1 мин
3) этиловый спирт – 30 сек (дифференцирующее вещество)
4) смыть водой (вымывается из стенки Грам-)
5) фуксин (для Грам-) – 1 мин
6) смыть водой
7) высушить
7. Микроскопический метод диагностики инфекций, его достоинства иинедостатки.
Микроскопические методы исследования основаны на обнаружении и исследовании возбудителя в биологическом материале. Используют светооптическую и электронную микроскопию.
Микроскопический метод широко применяют в диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, паразитарных и (реже) вирусных заболеваний.
Основные задачи микроскопии: выявление возбудителя в клиническом материале, ориентировочная идентификация на основе определения характерных морфологических и тинкториальных признаков микроорганизмов, а также изучение окрашенных мазков из колоний чистых культур. При некоторых инфекционных болезнях, для возбудителей которых характерна специфичность морфологии (протозойные болезни, гельминтозы, грибковые заболевания, спирохетозы), микроскопическое исследование — основной или один из основных методов диагностики.
Материалом для микроскопического исследования могут служить кровь, костный мозг, СМЖ, пунктаты лимфатических узлов, фекалии, дуоденальное содержимое и жёлчь, моча, мокрота, отделяемое мочеполовых путей, биоптаты тканей, мазки со слизистых оболочек (ротовой полости, нёбных миндалин, носа, влагалища и др.).