Файл: ГФ 11-2.pdf

приготовления. 

Состав и приготовление питательных сред. Тиогликолевая среда индивидуального 

приготовления: 

    панкреатического гидролизата казеина      15,0  г

    дрожжевого экстракта (10%)                 5,0  >>

    натрия хлорида                             2,5  >>

    глюкозы                                    5,0  >>

    цистина (цистеина)                         0,75 >>

    тиогликолевой кислоты или                  0,3  мл

    тиогликолята натрия                        0,5  г

    раствора резазурина натрия 1:1000

    (свежеприготовленного) <*>                 1,0  мл

    агара                                      0,75 г

    воды дистиллированной                до 1000    мл

    рН после стерилизации                      7,0 +/- 0,2

--------------------------------

<*> Допускается приготовление среды без резазурина натрия. 

Тиогликолевую среду можно хранить в течение 14 сут со дня приготовления при температуре от 

10 до 25 град. С в защищенном от света месте. 

В случае, если при хранении среды, содержащей резазурин, верхний слой среды (более 1/3 

объема) окрасится в розовый цвет, среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной 

бане в течение 10-15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. 

В случае, если окраска не исчезает после нагревания, среду считают непригодной к употреблению. 

Регенерацию среды можно проводить только один раз. 

Среда Сабуро: 

               пептона ферментативного         10 г

               глюкозы                         40 >>

               воды дистиллированной      до 1000 мл

               рН после стерилизации            5,6 +/- 0,2

Обе среды стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/-0,02 МПа (1,1 +/- 

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

0,2 кгс/кв. см) и при температуре (121 +/-1) град. С в течение 15 мин. 

    Жидкость N 1:

               пептона ферментативного          1 г

               воды дистиллированной      до 1000 мл

               рН после стерилизации            7,1 +/-0,2

    Жидкость N 2:

               пептона  ферментативного         5 г

               твина-80                        10 г

               воды дистиллированной      до 1000 мл

               рН после стерилизации            7,1 +/-0,2

Жидкости разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют так же, как и питательные среды. 

Требования к ростовым свойствам питательных сред. Тиогликолевая среда и среда Сабуро 

должны обеспечивать визуально обнаруживаемый рост соответствующих тест - штаммов аэробных и 

анаэробных бактерий и грибов (предусмотренных НТД). 

Используемые питательные среды должны обеспечивать рост микроорганизмов при посеве их в 

количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для тиогликолевой среды - не позднее 48 ч инкубации 

при температуре от 30 до 35 град. С и для среды Сабуро - не позднее 72 ч инкубации при 

температуре от 20 до 25 град. С. 

ИСПЫТАНИЕ НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ ЧИСТОТУ

Лекарственные средства (таблетки, капсулы, гранулы, растворы, экстракты, сиропы, мази и др.), 

не стерилизуемые в процессе производства, могут быть контаминированы микроорганизмами и 

поэтому должны быть испытаны на микробиологическую чистоту. 

Таблица 13 

Тест - микроорганизмы, используемые для

определения антимикробного действия лекарственных

средств и ростовых свойств питательных сред

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

------------------T---------------------------------T------------¬

¦

 N по Каталогу   

¦

¦

¦

¦

    штаммов      

¦

¦

Питательная 

¦

¦

  Всесоюзного    

¦

          Тест - штаммы          

¦

   среда    

¦

¦

музея патогенных 

¦

¦

     N      

¦

¦

бактерий ГИСК им.

¦

¦

¦

¦

 Л.А.Тарасевича  

¦

¦

¦

+-----------------+---------------------------------+------------+

¦

     010011      

¦

Bacillus subtilis ATCC 6633      

¦

     1      

¦

¦

     010014      

¦

Bacillus cereus ATCC 10702       

¦

     1      

¦

¦

     240533      

¦

Escherichia coli ATCC 25922      

¦

     3      

¦

¦

¦

¦

     6      

¦

¦

¦

¦

     7      

¦

¦

     190155      

¦

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 

¦

     9      

¦

¦

     201108      

¦

Staphylococcus aureus ATCC 6538-P

¦

    10      

¦

¦

¦

¦

     8      

¦

+-----------------+---------------------------------+------------+

¦

N в коллекции    

¦

¦

¦

¦

патогенных       

¦

¦

¦

¦

грибов  НИО      

¦

¦

¦

¦

глубоких микозов 

¦

¦

¦

¦

Ленинградского   

¦

¦

¦

¦

ГИДУВ            

¦

¦

¦

+-----------------+---------------------------------+------------+

¦

      259        

¦

Candida albicans ATCC 885-653    

¦

     2      

¦

L-----------------+---------------------------------+-------------

Испытание на микробиологическую чистоту включает количественное определение 

жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, 

наличие которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах. 

Испытание проводят в асептических условиях, применяя приведенные методы и питательные 

среды для контроля всех видов нестерильных лекарственных средств, а также сырья, используемого в 

их производстве. 

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

Лекарственные средства, обладающие антимикробным действием, и консерванты, входящие в 

состав некоторых нестерильных лекарственных средств, могут подавлять рост отдельных видов 

микроорганизмов в условиях проведения испытания. 

Во избежание неправильной оценки результатов испытания определяют действие 

лекарственного средства в отношении следующих тест - микроорганизмов: Bacillus subtilis (Bacillus 

cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans, указанных в табл. 

13. 

Определение антимикробного действия лекарственного средства. Пять образцов 

лекарственного средства по 1 г (мл) каждый разводят в соотношении 1:10 фосфатным буферным 

раствором рН 7,0 (два образца), средой N 3 (один образец) и средой N 8 (два образца). 

Культуры Bacillus subtilis (Bacillus cereus), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus 

aureus выращивают на жидкой среде N 1 при температуре от 30 до 35 град. С в течение 18-20 ч, 

культуру Candida albicans - на жидкой среде N 2 при температуре от 20 до 25 град. С в течение 48 ч. 

Культуры разводят 1:1000 стерильным 0,9% раствором натрия хлорида изотоническим, вносят по 1 

мл взвеси каждого тест - штамма (в отдельности) в приготовленные образцы лекарственного 

средства в буферном растворе (Bacillus subtilis, Candida albicans), в среде N 3 (Escherichia coli) и в среде N 

8 (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus). Для выявления микроорганизмов используют 

методы, приведенные в данной статье. В случае отсутствия роста тест - штаммов на 

соответствующих питательных средах отмечают антимикробное действие лекарственного средства. 

Для устранения антимикробного действия лекарственного средства используют различные 

методы: 1) увеличивают разведение лекарственного средства, взяв больший объем растворителя; 2) 

добавляют необходимое количество соответствующего специфического инактиватора, 

нейтрализующего антимикробное действие лекарственного средства, но не угнетающего рост 

микроорганизмов (например, пенициллиназу - для пенициллинов и цефалоспоринов, пара - 

аминобензойную кислоту - для сульфаниламидов); 3) комбинируют методы 1 и 2; 4) вводят 

неспецифические инактиваторы в питательные среды, нейтрализующие антимикробное действие 

лекарственного средства (например, 4% твина-80, 0,5% соевого лецитина); 5) если все 

вышеперечисленные методы неэффективны, а лекарственное средство растворимо, используют 

метод мембранной фильтрации; 6) если в связи с природой лекарственного средства нельзя 

использовать метод мембранной фильтрации, а все вышеперечисленные методы устранения его 

антимикробного действия в отношении данного тест - штамма неэффективны, этот вид испытания не 

проводят. 

Отбор и приготовление проб лекарственных средств для испытаний. От каждой серии 

лекарственного средства (независимо от ее объема) отбирают среднюю пробу не менее 50 г (мл), 

состоящую из равных разовых проб, взятых из минимум 10 разных упаковок. Для одного анализа 

лекарственного средства используют отдельные образцы по 10 г (мл) для каждого из описанных 

далее разделов исследования. Всего для проведения одного анализа используют 30 г (мл) 

лекарственного средства. В том случае, когда возникает необходимость подтвердить несомненность 

результатов, проводят повторное испытание только по данному разделу исследования, используя 

образец в количестве 10 г (мл). 

Для ряда лекарственных средств (антибиотиков, мягких лекарственных форм и др.) отбирают от 

каждой серии среднюю пробу не менее 15 г, состоящую из равных разовых проб, взятых из не менее 

чем 10 разных упаковок. Для одного анализа используют образцы по 3 г (мл) для каждого раздела 

исследования. Всего для проведения одного анализа используют по 9 г (мл) лекарственного средства. 

При повторении испытания по одному из разделов исследования используют образец в количестве 3 

г (мл). 

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд.