Файл: ГФ 11-2.pdf

расплавления, фильтруют через ватно - марлевый фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе 

насыщенным паром под давлением при температуре 121 град. С в течение 15 мин. 

Требования к ростовым свойствам питательных сред. Используемые питательные среды 

должны обеспечивать рост соответствующих тест - штаммов бактерий и грибов, указанных в табл. 17, 

при посеве их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для сред N 1, 3, 6 - 10 не позднее 48 ч 

инкубации при температуре от 30 до 35 град. С и для среды N 2 - не позднее 72 ч инкубации при 

температуре от 20 до 25 град. С. 

Растворы, реактивы

Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (1/15 мол): 

          рН                                      7,0

          калия фосфата однозамещенного           3,56 г

          натрия фосфата двузамещенного           7,23 >>

          натрия хлорида                          4,3  >>

          пептона ферментативного сухого          1,0  >>

          воды дистиллированной              до 1000   мл

Стерилизуют в паровом стерилизаторе насыщенным паром под давлением при температуре 121 

град. С в течение 15 мин. Раствор хранят при температуре от 4 до 10 град. С. 

Феноловый красный - 1% раствор: 

        фенолового красного                         1,0 г

        раствора едкого натра 0,1 (моль/л)         28,2 мл

        воды дистиллированной                  до 100   мл

Навеску индикатора растирают в ступке, прибавляя небольшими порциями едкий натр. 

Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора 

водой до метки. Хранят во флаконе нейтрального светозащитного стекла при температуре от 4 до 10 

град. С. 

Малахитовый зеленый - 0,5% раствор: 

         малахитового зеленого                      0,5 г

         воды дистиллированной                 до 100 мл

Навеску красителя переносят в стеклянный флакон, прибавляют стерильную горячую воду, 

помещают на сутки в термостат, периодически встряхивая. 

Реактив Грисса. Раствор N 1: 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 30 мл ледяной 

уксусной кислоты, прибавляют 100 мл воды, фильтруют. Раствор годен в течение месяца. 

Раствор N 2: 0,1 г 1-нафтиламина растворяют в 100 мл кипящей воды, охлаждают, прибавляют 

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

30 мл ледяной уксусной кислоты, фильтруют. Раствор годен в течение 7 сут. 

Перед употреблением смешивают равные объемы растворов N 1 и N 2. 

Реактив на цитохромоксидазу. Раствор N 1: 1% спиртовой раствор нафтола-1. 

Раствор N 2: 1% раствор N, N - диметил - р - фенилендиамина дигидрохлорида. 

Перед употреблением смешивают растворы N 1 и N 2 в соотношении 2:3. 

Растворы годны в течение 14 сут при хранении при температуре от 4 до 10 град. С во флаконах 

нейтрального светозащитного стекла. 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ

АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР

Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать 

рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной 

среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест - микробов, образующихся при испытании 

растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца <*> и испытуемого 

препарата. 

--------------------------------

<*> Далее "стандартный образец" следует читать "Государственный стандартный образец". 

Антимикробная активность антибиотиков выражается в единицах действия - ЕД или "мгк". Для 

большинства антибиотиков 1 ЕД или "мкг" соответствуют 1 мкг активного вещества (кислоты или 

основания); для антибиотиков, имеющих иное количественное выражение единицы, 

соответствующие указания даются в частных статьях. 

При определении антимикробной активности антибиотиков используют стандартные образцы, 

активность которых, как правило, устанавливают в соответствии с Международными 

биологическими стандартами. При отсутствии последних для указанных целей могут быть 

использованы международные химические стандарты, антимикробную активность которых 

рассчитывают на основании показателей качества, установленных физико - химическими методами. 

Антимикробную активность стандартных образцов антибиотиков, не имеющих аналогов в 

международной коллекции стандартов, рассчитывают также на основании показателей качества, 

установленных физико - химическими методами. 

Стандартные образцы антибиотиков утверждаются и рассылаются Государственным научно - 

исследовательским институтом по стандартизации и контролю лекарственных средств Минздрава 

СССР, хранятся и используются в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке 

стандартного образца. 

Метод определения. Тест - микробы, растворители, буферные растворы, питательные среды и 

прочие условия проведения испытания указаны в табл. 18. 

В чашки Петри (стеклянные или пластмассовые), установленные на столиках со строго 

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

горизонтальной поверхностью, разливают расплавленные питательные среды определенного состава 

в один или два слоя. Для нижнего слоя используют незасеянные среды, для верхнего или одного слоя 

- агаровую среду, предварительно засеянную соответствующим тест - микробом. Если культура 

представляет собой суспензию вегетативных клеток, то температура расплавленной среды, в которую 

вносят тест - микроб, должна быть (49 +/-1) град. С, при использовании суспензии спор - 65-70 град. 

С. К среде следует добавить такое количество суспензии вегетативных клеток или спор, которое 

обеспечивает оптимальный рост тест - микроба и четкость зон угнетения его роста. 

Таблица 18 

Характеристика культуральных свойств тест - микроба

-----------------T------------------------------T--------------------

--------T----------------------¬

¦

¦

    При росте на плотной      

¦

    При росте на

жидкой     

¦

¦

¦

    Название    

¦

     питательной среде        

¦

     питательной

среде      

¦

 При микроскопическом 

¦

¦

 тест - микроба 

+-----------T------------------+----------T---------

--------+

   изучении мазка     

¦

¦

¦

  условия  

¦

описание культуры 

¦

 условия  

¦

описание

культуры

¦

  агаровой культуры,  

¦

¦

¦

выращивания

¦

¦

выращива-

¦

¦

 окрашенной по Граму  

¦

¦

¦

¦

¦

   ния   

¦

¦

¦

+----------------+-----------+------------------+----------+---------

--------+----------------------+

¦

Staphylococcus  

¦

Среда  N 1,

¦

Гладкие с  ровными

¦

Мясо -   

¦

Равномерное   по-

¦

Однородные по величине

¦

¦

aureus 209 Р    

¦

Т     град.

¦

краями колонии,  с

¦

пептонный 

¦

мутнение 

бульона

¦

и расположению в виде 

¦

¦

¦

(36   +/-1)

¦

равномерной  золо-

¦

бульон,   

¦

без

пленки и сли-

¦

гроздьев кокки с хоро-

¦

¦

¦

град.    С,

¦

тистой   пигмента-

¦

рН 7,2-7,4

¦

зистого

осадка на

¦

шо выраженной  грампо-

¦

¦

¦

18 - 20  ч 

¦

цией              

¦

18-20 ч  

¦

дне              

¦

ложительной окраской  

¦

¦

¦

затем   при

¦

¦

¦

¦

¦

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд. 

¦

¦

комнатной  

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

температуре

¦

¦

¦

¦

¦

¦

Candida utilis  

¦

Среда  N 3,

¦

Круглые, кремового

¦

МПБ,      

¦

Рост в

виде  рав-

¦

Овальные, иногда с от-

¦

¦

ЛИА-01          

¦

Т     град.

¦

цвета  с   матовой

¦

рН 7,2-7,4

¦

номерной 

мути  и

¦

ростками клетки;  рас-

¦

¦

¦

(30   +/-1)

¦

поверхностью коло-

¦

с 1%      

¦

осадка на

дне    

¦

положены отдельно, це-

¦

¦

¦

град.    С,

¦

нии   с    ровными

¦

глюкозой,

¦

¦

почками или группами  

¦

¦

¦

48 ч,      

¦

краями            

¦

18-20 ч  

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

Bacillus subti -

¦

Среда  N 1,

¦

Колонии желтовато-

¦

МПБ,      

¦

Рост в

виде плен-

¦

Палочки с закругленны-

¦

¦

lis, var. Л2    

¦

Т     град.

¦

го цвета,  круглой

¦

рН 7,2-7,4

¦

ки с

осадком   на

¦

ми краями, располагаю-

¦

¦

¦

(36   +/-1)

¦

формы, влажно бле-

¦

18-20 ч  

¦

дне              

¦

щиеся отдельно и   це-

¦

¦

¦

град.    С,

¦

стящие с  шагрене-

¦

¦

¦

почками с хорошо выра-

¦

¦

¦

18 - 20  ч,

¦

вой  поверхностью,

¦

¦

¦

женной грамположитель-

¦

¦

¦

¦

слегка зазубренны-

¦

¦

¦

ной окраской          

¦

¦

¦

¦

ми краями  и  при-

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

поднятым центром  

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

¦

Bacillus subti -

¦

Среда  N 1,

¦

Мелкие   сероватые

¦

МПБ,      

¦

Рост в

Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей

Приладожья, Поморья и Прионежья –   

www.alppp.ru.

 Постоянно действующий третейский суд.