Файл: Офс 2 0001. 15 Биологические испытания инсулина.pdf

Испытание на депрессорные вещества ОФС.1.2.4.0008.18
•
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на определение веществ депрессорного действия in vivo в инъекционных препаратах для внутрисосудистого введения и фармацевтических субстанциях, из которых они получаются.
•
В опыт берут здоровых кошек любого пола массой не менее 2 кг. Самки не должны быть беременными или лактирующими. За 24 ч до опыта животное лишают корма, но оставляют свободный доступ к воде. В качестве наркоза можно использовать любое наркотизируещее средство, поддерживающее глубокий сон, и не оказывающее существенное влияние на величину артериального давления, например уретан.
•
Приготовление разведений стандартного и испытуемого образца
•
В качестве стандартного образца (СО) используют гистамина дигидрохлорид. Все разведения следует проводить в пересчёте на гистамин- основание (коэффициент пересчёта с гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038). Для разведения
СО используют тот же растворитель, что и для ИО, в основном, 0,9 % раствор натрия хлорида для инъекций. Концентрация рабочих разведений СО в пересчёте на гистамин- основание должна составлять
0,5 мкг/мл (разведение 1) и 1,0 мкг/мл (разведение 2).
Михайлова Ю.В.

•
Проведение опыта
•
Введение растворов на протяжении всего опыта проводят со скоростью 0,1 мл в секунду и интервалом между введениями не менее 5 мин.
•
В начале опыта проверяют чувствительность животного к гистамину. Для этого в вену последовательно вводят СО в разведении 1 и разведении 2 в объёме 0,2 мл на 1 кг массы тела кошки. Животных, у которых при введении СО в разведении 2 в дозе 0,2 мкг на 1 кг массы величина артериального давления снизится менее чем на 20 мм рт.ст., из опыта исключают. Раствор гистамина в разведении 1 вводят дважды, чтобы подтвердить стабильность реакции артериального давления кошки.
•
Затем кошке однократно вводят раствор ИО. Тест-доза препарата и растворитель должны быть указаны в фармакопейной статье.
•
При испытании на одном животном двух и более ИО, необходимо периодически проводить определение величины снижения артериального давления в ответ на введение СО в разведении 1. В случае значительного уменьшения реакции АД на введение ИП по сравнению со стандартной величиной, полученной в начале опыта, необходимо вновь проверить чувствительность животного к действию
СО в разведении 2. Если снижение ртериального давления составляет не менее
20 мм рт.ст., испытание препаратов продолжают в соответствии с указанными выше требованиями.
•
Результаты и интерпретация
•
Исследуемое лекарственное средство считают выдержавшим испытание, если в течение 60 сек после введения раствора ИО в исследуемой тест-дозе
Испытание на депрессорные вещества ОФС.1.2.4.0008.18
Михайлова Ю.В.

Стерильность ОФС.1.2.4.0003.18
•
Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на методы испытания на стерильность различных лекарственных средств (ЛC) препаратов для инъекций, инфузий, глазных капель, пленок, фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ, включая биологические лекарственные препараты и их растворители, которые в соответствии с нормативной документацией или фармакопейными статьями должны быть стерильными.
•
Условия проведения испытания
•
Испытание на стерильность проводят в асептических условиях в ламинарных установках, чистых помещениях или изоляторах класса чистоты А. Меры, предотвращающие контаминацию, не должны оказывать губительного влияния на микроорганизмы, которые могут содержаться в испытуемых образцах иммунобиологические лекарственные препараты (ИЛП). Условия проведения испытания регулярно контролируют в соответствии с соблюдением надлежащих правил производства и лабораторной практикой.
Морозова М.А.

Стерильность ОФС.1.2.4.0003.18
•
Методы испытания стерильности
•
Испытание на стерильность проводят двумя методами: методом прямого посева или методом мембранной фильтрации. Метод мембранной фильтрации используют во всех случаях, когда природа препарата, его физико-химические свойства позволяют фильтровать его через мембранные фильтры.
•
Мембранная фильтрация. Проверка пригодности (определении
•
антимикробного действия) может выполняться одновременно с испытанием на стерильность испытуемого препарата (п. 2.2.). После переноса требуемого количества испытуемого препарата на фильтр в последнюю порцию жидкости для промывания вносят не более 100 колониеобразующих единиц (КОЕ) тест-штаммов микроорганизмов (п.
2.2.8.).
•
Прямой посев. При проверке пригодности (определении антимикробного действия) готовят взвеси тест-штаммов с конечной концентрацией не более 100 КОЕ в 1 мл. Испытание проводят с каждым видом микроорганизмов.
Морозова М.А.

Стерильность ОФС.1.2.4.0003.18
•
1.1
. Устранение антимикробного действия препарата
•
Для устранения антимикробного действия препарата используют следующее:
•
А) Увеличивают разведение препарата, взяв больший объем растворителя/разбавителя/питательной среды (но не более 200 мл). Для ИЛП допускается только разбавление питательной средой.
•
Экспериментально установленное соотношение объемов питательной среды и посевного материала, обеспечивающее нейтрализацию антимикробного действия препарата, должно соблюдаться при испытании препарата на стерильность.
•
Б) Применяют метод мембранной фильтрации с последующим промыванием фильтров, если препарат растворим в водных разбавителях или в изопропилмиристате (ИПМ).
•
В) Вместо стандартного разбавителя можно использовать стерильную нейтрализующую жидкость, промышленного производства или приготовленную в лаборатории
•
Г) Используют неспецифические инактиваторы. Для инактивации консервантов, входящих в состав ряда лекарственных препаратов, в разбавитель и/или в питательные среды до стерилизации вносят следующие неспецифические инактиваторы: 3% твина-80 или 0,3% лецитина (яичного или соевого) от объема среды. В случае, если в препарате имеется более двух консервантов различной химической структуры, в среду вносят 3% твина-80,
0,3
% лецитина, 0,1% L-гистидина и 0,5% натрия тиосульфата одновременно. Если разведение в вышеприведенном растворе не инактивирует антимикробные свойства ЛС, увеличивают концентрацию твина-80 или лецитина.
•
Д) Применяют специфические инактиваторы, нейтрализующие антимикробное действие ЛС, но не угнетающие рост микроорганизмов.
•
Для инактивации пенициллинов и цефалоспоринов, независимо от их лекарственной формы, в буферный раствор, используемый для растворения, суспендирования или эмульгирования образца, а также в питательные среды перед их применением, асептически вносят стерильный раствор β-лактамазы в количестве, указанном в фармакопейной статье или нормативной документации.
Морозова М.А.

Стерильность ОФС.1.2.4.0003.18
•
2.1. Отбор образов для испытания
При проведении испытания на стерильность число контролируемых
•
первичных упаковок определяется с учетом общего количества единиц в серии. Отбирают образцы препарата, как указано в
Таблице 1.
•
Испытание на стерильность в процессе производства ИЛП проводят в соответствии с регламентом производства.
•
при необходимости, могут быть регламентированы особые требования в отношении необходимого количества контролируемых емкостей, обеспечивающие надежность контроля стерильности препарата
•
2.2.1
. Испытание водных растворов ЛС
•
Определенный объем препарата, стерильно отобранный из всех образцов, перемешивают и асептически переносят на один или несколько предварительно смоченных фильтров. Фильтры асептически снимают с фильтродержателя и помещают в среды или заливают их в емкости с фильтродержателями. При использовании замкнутой системы канистры заполняют равным объемом сред. При этом следует избегать аэрации тиогликолевой среды.
•
2.2.3.
Пробоподготовка мазей, кремов, растворимых в ИПМ, и растворов в маслах
•
Мази на жировой основе и эмульсии типа «вода в масле» растворяют в ИПМ, предварительно простерилизованном методом фильтрации (мембрана с диаметром пор 0,22 мкм). Стерильный разбавитель/растворитель и, если необходимо, испытуемый препарат, непосредственно перед фильтрацией нагревают до температуры не более 44о
С. Первоначально через мембрану пропускают стерильный ИПМ в количестве 5 мл. Затем фильтруют раствор препарата в ИПМ. Для максимальной эффективности процесса во время фильтрации над фильтром постоянно должен быть слой раствора. После фильтрации мембрану промывают тремя порциями жидкости No2 по 100 мл каждая. Испытание проводят на питательных средах с добавлением 1 г/л твина-80.
•
2.2.5
. Испытание твердых форм лекарственных средств для инъекций (кроме антибиотиков)
•
Препарат разводят, как указано в инструкции по применению, и проводят испытание согласно методике, приведенной в разделах 2.2.1. и 2.2.2.
•
2.2.6
. Испытание стерильных аэрозольных препаратов
•
Требуемое количество препарата в аэрозольной упаковке асептически переносят в стерильную колбу нажатием на шток распылительного клапана. Если возможно, удаляют пропеллент путем испарения. Добавляют в колбу жидкость
No2 и осторожно перемешивают. Испытание проводят, как указано в разделах 2.2.1. и 2.2.2.
Морозова М.А.

Микробиологическая чистота ОФС.1.2.4.0002.18
•
Нестерильные ЛС (субстанции, различные формы препаратов – таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, сиропы, мази, суппозитории и др., а также вспомогательные вещества) могут быть контаминированы микроорганизмами. В НЛС допускается лимитированное количество микроорганизмов при отсутствии определенных видов, представляющих опасность для здоровья человека. Испытание лекарственных средств на микробиологическую чистоту проводят в асептических условиях с помощью регламентированных методик и питательных сред.
•
Испытание включает способы подготовки различных лекарственных форм, отбор образцов для анализа, методы количественного определения жизнеспособных микроорганизмов, выявление и идентификацию отдельных видов бактерий, наличие которых недопустимо или ограничено в лекарственных средствах, а также питательные среды, растворы и реактивы, необходимые для проведения испытаний.
Саначева А.В.

Микробиологическая чистота ОФС.1.2.4.0002.18
•
Для проведения испытания (определение антимикробного действия ЛС, качества питательных сред, биохимического тестирования выделенных микроорганизмов) необходимо использовать
тест-штаммы микроорганизмов, депонированные в официальных отечественных и зарубежных коллекциях, например:
•
- Государственной коллекции патогенных микроорганизмов (ГКПМ), Россия;
•
- Российской коллекции патогенных грибов (РКПГ);
•
- Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ) РАН, Россия;
•
- Американской коллекции типовых культур (АТСС), США;
•
- Национальной коллекции типовых культур (NCTC), Великобритания;
•
- Коллекции культур института Пастера (CIP), Франция.
Саначева А.В.

Микробиологическая чистота ОФС.1.2.4.0002.18
•
Микробиологическая чистота лекарственных препаратов
Рекомендуемые требования к качеству лекарственных средств (пример)
Саначева А.В.

Аномальная токсичность
ОФС.1.2.4.0004.15
Испытание проводят на 5 здоровых белых нелинейных мышах обоего пола массой 19 - 21 г, которые ранее не использовались в экспериментах. Условия содержания и кормления должны обеспечивать нормальную жизнедеятельность животных. Испытуемый образец растворяют или разводят (в случае необходимости) раствором натрия хлорида 0,9% для инъекций или водой для инъекций. Тест-доза должна содержаться в объеме 0,5 мл испытуемого раствора, который вводят в хвостовую вену животного со скоростью 0,1 мл в секунду. Тест-дозу указывают в частной фармакопейной статье. Период наблюдения за животными составляет
48 ч.
Испытуемый образец считают прошедшим испытание, если в течение предусмотренного срока наблюдения не погибнет ни одно из подопытных животных.
В случае гибели одного животного, эксперимент повторяют на 5 мышах массой 20,0 +/- 0,5 г. Если при повторном испытании не погибнет ни одна мышь, испытуемый образец считают прошедшим испытание.
Испытуемый образец не выдерживает испытание, если в течение предусмотренного срока наблюдения погибнет более, чем одно животное.
Смирнова Г.Р.

Испытание на гистамин
ОФС.1.2.4.0007.15
I. Подготовка изолированного органа
1.Берут морскую свинку-самца массой тела 200-
350 г.
2.За 24 ч до эксперимента животное лишают пищи,
но оставляют свободный доступ к воде.
3.После эвтаназии у свинки вскрывают брюшную полость и находят слепую кишку.
4.Подвздошную кишку нарезают на равные части и помещают в чашку Петри с гипокальциевым раствором Тироде. Этим раствором осторожно промывают полученные отрезки до полного удаления содержимого кишечника.
5.Промытые отрезки подвздошной кишки помещают в чистый гипокальциевый раствор
Тироде. Они могут быть использованы сразу или храниться в течение 24 ч при температуре от 2 до 4
С.
II. Приготовление разведений стандартного и испытуемого образца
1. Разведение стандартного образца (СО)
В
качестве
СО
используют гистамина дигидрохлорид в 3 разведениях
В качестве растворителя используют 0,9 % раствор натрия хлорида.
2. Разведение испытуемого образца (ИО)
Испытанию подвергают неразведённый ИО, когда максимально допустимая нормативной документацией концентрация гистамина в
неразведённом препарате находится в диапазоне от
1,25
∙ 10–6 г/мл до 2,50 ∙10–6 г/мл. При необходимости ИО разводят 0,9 % раствором натрия хлорида таким образом,
чтобы предполагаемая концентрация гистамина дигидрохлорида в разведении ИО составляла 2,50
∙10–6 г/мл.
III. Регистрирующая система
Для регистрации сокращений изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки в изотонических условиях в ответ на введение СО и
ИО
используют регистрирующую систему,
состоящую из термостатируемой ванночки с гипокальциевым раствором
Тироде при температуре 35 ºС, а также электронного датчика с самописцем или механического рычага с
кимографом. Ванночку аэрируют карбогеном (95
% О2 и 5 % СО2) или воздухом. Нагрузка обычно составляет 500 800 мг. В случае использования механического рычага для вычисления нагрузки следует применять правило равновесия:
Сила ∙ Плечо силы = Нагрузка ∙ Плечо нагрузки.
IV. Проведение опыта
Отрезок подвздошный кишки помещают в ванночку и прикрепляют к регистрирующей системе. Прикладывают нагрузку и оставляют его в покое на 30
мин. За это время необходимо не менее 3 раз сменить в ванночке раствор Тироде.
1. Адаптация изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки к субмаксимальной дозе гистамина
В термостатируемую ванночку вводят СО в разведении 3 в объёме, равном 1/100 от её ёмкости. Через 30 с ванночку промывают тройным объёмом раствора Тироде. После первого отмывания проводят второе таким же объёмом раствора. Не менее чем через 4 мин после первого введения снова повторяют цикл «введение–экспозиция–два отмывания». Эти циклы повторяют до тех пор, пока не получат не менее 2 одинаковых пиков. Их высоту принимают за 100 %. Временные интервалы между введениями испытуемого вещества и между двумя отмываниями должны быть постоянными.
2. Испытание ИО на гистамин
Предварительное испытание. После достижения постоянной величины ответа отрезка кишки на введение СО в разведении 3 проводят испытание ИО на гистамин. Для этого с интервалом не менее 4 мин однократно в случайном порядке вводят СО в разведениях 1 и 3 и неразведенный ИО. Циклы «введение–
экспозиция–два отмывания» такие же, как и при проведении адаптации органа к субмаксимальной дозе.
Количественное испытание ИО на гистамин. В случайном порядке поочерёдно вводят СО в разведениях 1и 3 и ИО до получения не менее 4 пиков в ответ на введение каждого раствора. Находят среднее значение ответа отрезка кишки на каждый раствор. С помощью регрессионного анализа вычисляют параметры линейной зависимости среднего ответа кишки на введение СО от логарифма его концентрации. Затем, подставляя полученные значения этих параметров в уравнение регрессии, вычисляют концентрацию гистамина в том разведении ИО, которому соответствует средняя высота его пика, и, исходя из этого, рассчитывают содержание гистамина в неразведённом ИО. ИО считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина не превышает максимально допустимое, указанное в нормативной документации (коэффициент пересчёта гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038).
Контрольное испытание Схема проведения контрольного испытания такая же, как и при количественном определении содержания гистамина в ИО,
только вместо ИО используют СО в разведении 2. Если средняя высота его пика соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении (2,50 ∙10–6 г/мл), то результаты опыта следует признать достоверными.
Черепанова Я. А.