Файл: 1. Прогамный до оплодотворения. Соотношение половых хромосом при этом роли не играет, т к. ооциты диплоидны. (Некоторые черви, коловратки из крупных ооцитов развиваются самки, из мелких самцы). Сингамный.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 05.12.2023
Просмотров: 106
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
3) В процессе детекции продуктов амплификации проходит разделение полученной смеси продуктов амплификации. К смеси добавляется специальные растворы, которые наделяют фрагменты ДНК способностью флуоресцировать - отражаться оранжево-красными светящимися полосами. Образующееся свечение выдает присутствие ДНК вирусов, микробов или бактерий в забранном у пациента на ПЦР-анализ материале.3. ПЦР в реальном времени по сравнению с детекцией в помощью электрофореза.Сущность метода заключается в исследовании накопления продуктов амплификации с помощью специального прибора без последующего электрофореза. Так как кинетика накопления продуктов амплификации связана с исходным количеством матрицы, это дает возможность точно оценить её количество Отличительными чертами данного метода, в отличие от классической ПЦР, является возможность количественного определения ДНК/РНК инфекционных агентов в исследуемом материале, отсутствие стадии электрофореза, менее строгие требования к организации ПЦР-лаборатории и автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов.Отсутствие стадии электрофореза позволяет минимизировать риск контаминации продуктами ПЦР и таким образом резко уменьшить число ложноположительных результатов. Поскольку регистрация результатов проводится непосредственно в процессе ПЦР, весь анализ можно проводить в одной-двух комнатах лаборатории и нет необходимости в отдельном помещении для детекции продуктов реакции.Данная методика в течение последних пяти лет успешно применяется в крупнейших диагностических и научно-исследовательских центрах развитых стран мира и в ближайшее время станет так же широко распространена, как и ПЦР в ее сегодняшнем формате, благодаря экономии производственных площадей, уменьшению количества персонала и востребованности количественного определения ДНК/РНК.Использование математических методов анализа позволяет проводить автоматическую интерпретацию полученных результатов и снимает проблему субъективной оценки электрофореграмм.4. Преимущества и недостатки метода ПЦРМетод ПЦР (в диагностике инфекционных заболеваний) обладает следующими преимуществами:1) Прямое определение. Многие традиционные методы лабораторной диагностики подразумевают выявление возбудителей заболевания по различным косвенным признакам. Например, ИФА-диагностика основана на обнаружении в крови пациента белков, являющихся продуктами распада инфекционных возбудителей, на основании чего врач может поставить тот или иной диагноз. Метод ПЦР-анализа дает прямое указание на присутствие в забранном у пациента материале специфического участка ДНК возбудителя.
2) Высокая специфичность ПЦР-диагностики. В процессе проведения анализа в исследуемом материале выделяется фрагмент ДНК, специфичный, т. е. присущий только конкретному возбудителю. 3) Высокая чувствительность ПЦР. Обнаружение инфекции возможно даже в том случае, если в забранном у пациента материале содержится лишь одна клетка. По сравнению с другими иммунологическими и микробиологическими методами диагностики: чувствительность ПЦР-анализа — 10—100 клеток в пробе, другие методы - 103—105 клеток.4) Универсальность ПЦР-анализа. Для ПЦР-исследования может применяться практически любые материалы, в том числе недоступные для исследования другими методами: слизь, моча, кровь, сыворотка, мокрота, эякулят, соскоб эпителиальных клеток - поскольку инфекция может содержаться в любых биологических выделениях и тканях.5) Высокая скорость получения результата ПЦР-анализа. Единый для всех метод обработки забранного на анализ у пациента материала, детекции продуктов реакции, автоматизированная ПЦР-амплификация позволяются провести полную ПЦР-диагностику за 4—5 часов..6) Возможность диагностики любого вида инфекции. Высокая чувствительность метода ПЦР позволяет диагностировать инфекцию не только на острой стадии заболевания, но и хронические инфекции и даже наличие единичных бактерий или вирусов.Говоря о несомненном прогрессивном значении метода ПЦР и его неоспоримых преимуществах, вместе с тем, следует знать и об определенных недостатках этого метода и проблемах его проведения.1) Ключевым фактором успешности процесса, является, пожалуй, правильный выбор последовательности праймеров. Можно использовать программы, значительно упрощающие поиск подходящих регионов ДНК или даже выбирающие пару праймеров автоматически. Однако ни один из существующих алгоритмов не обеспечивает полной гарантии хорошей работы праймеров. К тому же на самом деле они представляют собой смесь молекул различной длины и состава, что приводит к появлению «минусовых» фракций - молекул с последовательностью, укороченной на одно или несколько оснований, при этом положение пропущенного нуклеотида может быть любым. Поэтому для получения наилучших результатов следует проводить очистку от этих фракций.
2) Следует также обратить внимание на приготовление смеси четырех типов нуклеотидов. Неравная их концентрация ведет к существенному увеличению ошибок ДНК-полимеразы в ходе амплификации. Необходимо также поддерживать соответствующую концентрацию ионов магния, поскольку снижение концентрации свободных катионов влияет на температуру и специфичность гибридизации праймеров.3.Чрезвычайная чувствительность метода требует строгого соблюдения специального технологического режима, тщательного выполнения всех этапов анализа в отдельных изолированных зонах лаборатории, поскольку существует риск амплификации очень небольших количеств неспецифической ДНК, что приведет к неправильному диагнозу. К тому же ПЦР идеально подходит для получения ответов типа «да-нет». Гораздо меньше этот метод пригоден для определения, какой организм из множества других присутствует в образце. Причина в том, что ПЦР лучше всего работает, когда в тестовой реакции находится только одна или несколько пар праймеров. Если в одной реакции используется большое число пар праймеров, соответсвующих всем возможным возбудителям инфекции, возникает серьезная проблема возможных артефактов.4) Для правильной интерпретации результатов необходимо также знать, что выявление ДНК возбудителя не всегда говорит о состоянии его жизнеспособности, а также о непосредственной связи выявленного инфекционного агента с конкретным патологическим процессом.5) Для успешного проведения анализа важно правильно собрать биоматериал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. В настоящее время для забора крови существуют вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести забор материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.6) Методики, используемые при экстракции нуклеиновых кислот, должны максимально удалять антикоагулянты (например, гепарин) и остатки гема во избежание снижения эффективности амплификации. Системы с протеинкиназами являются более эффективными в сравнении с системами, основанными только на применении химических агентов. Некоторые системы позволяют выделять одновременно вирусные ДНК и РНК, что позволяет унифицировать этапы выделения нуклеиновых кислот при определении в одном образце как ДНК-, так и РНК-содержащих вирусов-мишеней.
7) Следует также иметь в виду, что ДНК-полимеразы, используемые в ПЦР, имеют склонность к ошибкам. Однако основной проблемой применения ПЦР в медицине является существенное ограничение информации о функции генов, участвующих в развитии большинства болезней человека. Сегодня чаще всего известны лишь симптомы этих заболеваний.5. Применение ПЦР
2) Высокая специфичность ПЦР-диагностики. В процессе проведения анализа в исследуемом материале выделяется фрагмент ДНК, специфичный, т. е. присущий только конкретному возбудителю. 3) Высокая чувствительность ПЦР. Обнаружение инфекции возможно даже в том случае, если в забранном у пациента материале содержится лишь одна клетка. По сравнению с другими иммунологическими и микробиологическими методами диагностики: чувствительность ПЦР-анализа — 10—100 клеток в пробе, другие методы - 103—105 клеток.4) Универсальность ПЦР-анализа. Для ПЦР-исследования может применяться практически любые материалы, в том числе недоступные для исследования другими методами: слизь, моча, кровь, сыворотка, мокрота, эякулят, соскоб эпителиальных клеток - поскольку инфекция может содержаться в любых биологических выделениях и тканях.5) Высокая скорость получения результата ПЦР-анализа. Единый для всех метод обработки забранного на анализ у пациента материала, детекции продуктов реакции, автоматизированная ПЦР-амплификация позволяются провести полную ПЦР-диагностику за 4—5 часов..6) Возможность диагностики любого вида инфекции. Высокая чувствительность метода ПЦР позволяет диагностировать инфекцию не только на острой стадии заболевания, но и хронические инфекции и даже наличие единичных бактерий или вирусов.Говоря о несомненном прогрессивном значении метода ПЦР и его неоспоримых преимуществах, вместе с тем, следует знать и об определенных недостатках этого метода и проблемах его проведения.1) Ключевым фактором успешности процесса, является, пожалуй, правильный выбор последовательности праймеров. Можно использовать программы, значительно упрощающие поиск подходящих регионов ДНК или даже выбирающие пару праймеров автоматически. Однако ни один из существующих алгоритмов не обеспечивает полной гарантии хорошей работы праймеров. К тому же на самом деле они представляют собой смесь молекул различной длины и состава, что приводит к появлению «минусовых» фракций - молекул с последовательностью, укороченной на одно или несколько оснований, при этом положение пропущенного нуклеотида может быть любым. Поэтому для получения наилучших результатов следует проводить очистку от этих фракций.
2) Следует также обратить внимание на приготовление смеси четырех типов нуклеотидов. Неравная их концентрация ведет к существенному увеличению ошибок ДНК-полимеразы в ходе амплификации. Необходимо также поддерживать соответствующую концентрацию ионов магния, поскольку снижение концентрации свободных катионов влияет на температуру и специфичность гибридизации праймеров.3.Чрезвычайная чувствительность метода требует строгого соблюдения специального технологического режима, тщательного выполнения всех этапов анализа в отдельных изолированных зонах лаборатории, поскольку существует риск амплификации очень небольших количеств неспецифической ДНК, что приведет к неправильному диагнозу. К тому же ПЦР идеально подходит для получения ответов типа «да-нет». Гораздо меньше этот метод пригоден для определения, какой организм из множества других присутствует в образце. Причина в том, что ПЦР лучше всего работает, когда в тестовой реакции находится только одна или несколько пар праймеров. Если в одной реакции используется большое число пар праймеров, соответсвующих всем возможным возбудителям инфекции, возникает серьезная проблема возможных артефактов.4) Для правильной интерпретации результатов необходимо также знать, что выявление ДНК возбудителя не всегда говорит о состоянии его жизнеспособности, а также о непосредственной связи выявленного инфекционного агента с конкретным патологическим процессом.5) Для успешного проведения анализа важно правильно собрать биоматериал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. В настоящее время для забора крови существуют вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести забор материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.6) Методики, используемые при экстракции нуклеиновых кислот, должны максимально удалять антикоагулянты (например, гепарин) и остатки гема во избежание снижения эффективности амплификации. Системы с протеинкиназами являются более эффективными в сравнении с системами, основанными только на применении химических агентов. Некоторые системы позволяют выделять одновременно вирусные ДНК и РНК, что позволяет унифицировать этапы выделения нуклеиновых кислот при определении в одном образце как ДНК-, так и РНК-содержащих вирусов-мишеней.
7) Следует также иметь в виду, что ДНК-полимеразы, используемые в ПЦР, имеют склонность к ошибкам. Однако основной проблемой применения ПЦР в медицине является существенное ограничение информации о функции генов, участвующих в развитии большинства болезней человека. Сегодня чаще всего известны лишь симптомы этих заболеваний.5. Применение ПЦР