Файл: Практикум_по_акушерству_и_гинекологии.pdf

промывкой изотоническим раствором натрия хлорида, а перед набиранием спермы – синтетической средой (рис. 19). Снаружи катетер обеззараживают спиртовым тампоном.

Резиновый катетер вводят в матку мануально, предварительно надев одноразовую полиэтиленовую перчатку для искусственного осеменения.

Рис. 19. Резиновый катетер с ампулой для осеменения кобыл

Для осеменения кобыл в основном используют незамороженную сперму с активностью не ниже 5 баллов. Сперму нагревают при комнатной температуре в течение 30 мин и используют для осеменения кобыл немедленно. Замороженную сперму в алюминиевых пакетах достают из жидкого азота (два пакета по 13 мл), быстро переносят в водяную баню для разморозки при температуре 40°С на минуту, затем насухо протирают чистой марлевой салфеткой, открывают один конец и набирают содержимое в шприц или ампулу.

Обеззараженный резиновый катетер вводят рукой во влагалище кобылы, а его узкий конец направляют в канал шейки матки на глубину 8-10 см. К резиновому катетеру присоединяют шприц со спермой и вводят ее в матку в объеме 25-30 мл. Кобылам тяжеловозных пород и недавно ожеребившимся сперму вводят в объеме 35-40 мл. Минимальная доза спермы для осеменения кобыл 20 мл. Активность размороженной спермы должна быть не ниже 2 баллов. В дозе спермы требуется наличие 300-400 млн. активных спермиев. После осеменения катетер вытирают сухим тампоном и обеззараживают спиртовым тампоном. Шприц наполняют спермой и производят осеменение следующей кобылы. Эффективность осеменения кобыл контролируют путем ежедневной (или через день) пробы кобыл на охоту жеребцом-пробником с 8-9-го дня, на

97

протяжении 30 дней после осеменения. Спустя 40 дней после осеменения кобыл исследуют на беременность и бесплодие ректальным методом.

Задание 2: изучить методику осеменения сельскохозяйственной птицы.

Организация искусственного осеменения птиц. Рядом с по-

мещением для содержания петухов-производителей оборудуют комнаты для получения спермы и лабораторию. Искусственное осеменение кур проводит бригада, состоящая из двух звеньев. Одно звено (из двух человек) получает сперму от петухов, второе звено (состоящее из двух или трех человек) искусственно осеменяет кур. Одно звено за 1 ч может осеменить до 500 кур.

Для искусственного осеменения индеек при птичнике оборудуют небольшую лабораторию, моечную, комнату для получения спермы и в каждом птичнике-маточнике изолированное помещение для осеменения индеек. Сперму от индюков получают один или два человека. Осеменение индеек проводят два человека, а двое или трое подают и фиксируют самок.

Для искусственного осеменения гусей оборудуют пункт, где содержат самцов. В нем должны быть лаборатория, моечная и комната для получения спермы. В помещении, куда помещают гусынь, оборудуют комнату для их осеменения. Осеменяет гусей бригада из четырех человек. Сперму от гусей получают лаборант и техник. Они же оценивают качество и производят разбавление спермы. Двое других (техник и его помощник) ловят и осеменяют гусынь. За бригадой закрепляют около 2400 гусынь.

Для разбавления спермы птиц рекомендовано несколько синтетических сред (табл. 5).

Разбавление спермы гусаков осуществляют средой ВНИИТИП, а остальные среды необходимы для разбавления спермы петухов и индюков. Для спермы петухов предложена усовершенствованная среда ВНИИТИП-С2 следующего состава (г): сахароза (х. ч.) – 4, д-глюкоза – 1, натрий уксуснокислый – 1, натрий двууглекислый – 0,15, калий фосфорнокислый двузамещенный – 0,15, уксусная кислота 10% – 0,2 мл, вода дистиллиро- ван-ная – 100 мл.

98

Сперму разбавляют примерно в 2-3 раза. Хранят разбавленную сперму во флаконах при температурах 2-5°С. Сперму, разбавленную средой ВИРГЖ-2, можно хранить в течение 3-4 ч без снижения ее оплодотворяющей способности.

Инструменты. Осеменение птиц осуществляют шприцамиполуавтоматами, которые применяют для осеменения овец, индивидуальными полистироловыми или стеклянными пипетками с полиэтиленовым (резиновым) баллончиком.

Кратность и время введения спермы. Птиц осеменяют во второй половине дня: кур – раз в 5 дней, гусынь – раз в 6 дней, индеек – в начале сезона 2-3 раза с интервалом 1-2 дня, а затем через каждые 10-12 дней. В весенне-летний сезон при снижении оплодотворяемости яиц индеек осеменяют через каждые 7 дней.

Требования к спермодозам. Для искусственного осеменения птиц используют густую и среднюю сперму с активностью спермиев не ниже 7 баллов. В дозе спермы для кур должно быть 100-150 млн. активных спермиев, для гусынь – 30-50 млн., для индеек – 80-100 млн. активных спермиев.

При осеменении птиц используют неразбавленную или разбавленную сперму в следующих дозах: курам – 0,028-0,03 мл; гусыням – 0,05-0,2 мл, индейкам – 0,025-0,03 мл спермы. Главным критерием выбора дозы спермы является обеспечение наличия в ней необходимого количества активных спермиев.

99

Техника искусственного осеменения кур. Сперму курам вводят в яйцевод микрошприцом для искусственного осеменения овец, укоротив катетер наполовину. Искусственное осеменение кур лучше проводить вдвоем. Помощник держит курицу левой рукой, а правой надавливает на левую сторону живота в области между лонными костями и грудной клеткой, где расположен яйцевод. При этом клоака птицы слегка выпячивается. Раскрытию ее способствует и отгибание хвоста к спине. Техник левой рукой слегка растягивает клоаку и надавливает возле неё, пока не покажется отверстие яйцевода, расположенное несколько слева. Правой рукой он вводит в яйцевод катетер шприца на глубину не менее 4-5 см и выжимает дозу спермы (в этот момент руку, надавливающую на живот, следует убрать). За час работы два специалиста могут осеменить 120-150 кур.

Техника искусственного осеменения индеек. Перед осеменени-

ем помощник техника левой рукой берет индейку за ноги, переворачивает ее головой вниз и зажимает между рукой и туловищем так, чтобы живот птицы был придавлен. Правой рукой он отводит хвостовые перья индейки к ее спине. Техник-осеменатор указательным и большим пальцами левой руки раскрывает клоаку индюшки, отводя складку вниз. Обнаружив отверстие яйцевода, он вводит правой рукой катетер со спермой на глубину 4-5 см. Как только катетер введен, помощник ослабляет давление на живот, а техник быстро впрыскивает сперму и извлекает катетер из яйцевода. Если пользуются пипеткой с мягким колпачком, то ее вынимают из яйцевода, не ослабляя давления на колпачок. После осеменения индюшку выпускают в загон для осемененных птиц.

Техника искусственного осеменения гусынь. Помощник техни-

ка фиксирует гусыню на специальном станке, прижимая ее левое крыло и отгибая хвост. Техник вводит в клоаку гусыни указательный палец левой руки в перчатке, нащупывает отверстие яйцевода (расположенное левее и ниже входа в клоаку на 2-4 см) и вводит в

него сперму при помощи микрошприца или пипетки. Рекомендуется искусственно осеменять гусынь, которые несутся, у них яйцевод мягкий и вход в него открытый. У не несущихся гусынь ввести пипетку в яйцевод почти невозможно.

100

Задание 3: освоить технику искусственного осеменения со-

бак.

Время осеменения собак. Собак осеменяют на 10 и 12-е сутки после начала течки, на 4 и 6-е сутки половой охоты или же на 2 и 4-е сутки после проявления преовуляторного пика лютеинизирующего гормона, регистрируемого по результатам исследования крови.

Требования к дозам спермы. В дозе спермы перед замораживанием должно содержаться не менее 150-200 млн. активных спермиев. Активность спермы после размораживания должна составлять не менее 3 баллов. Вводимый объем разбавленной спермы не должен превышать 3 мл для крупных пород и 2 мл для мелких, в противном случае сперма может вытекать из половых путей суки.

Техника осеменения. Разработано два способа искусственного осеменения собак – влагалищный и маточный.

Влагалищный способ на сегодняшний день остается основным. Самку удерживают в стоячем положении. Половые органы обмывают теплой водой и орошают 1% раствором бикарбоната натрия. По верхнему своду преддверия влагалища и влагалища вводят укороченную стерильную полистироловую пипетку длинной 25 см. Продвижение катетера к цервикальному каналу контролируют рукой через брюшную стенку. С помощью силиконовой трубки к катетеру присоединяют стерильный одноразовый шприц со спермой. Заднюю часть тела собаки поднимают на левое бедро осеменатора, сидящего на стуле. Собаку удерживают в наклонном положении: спереди за ошейник – владелец, сзади – осеменатор. Левой рукой осеменатор удерживает самку за левое бедро, правой медленно вводит сперму из шприца во влагалище. Катетер извлекают, в преддверие и каудальную часть влагалища вводят на 10 мин большой палец для имитации «полового замка» и стимуляции антиперистальтических сокращений в матке. Наклонное положение самки при введенном в ее влагалище пальце способствует быстрому проникновению спермы в матку. После осеменения собаку выгуливают 30 мин, не позволяя ей бегать, прыгать и садиться. Хорошие результаты получают при осеменении собак свежеполученной спермой.

101

Внутриматочный способ осеменения практикуют редко. Этот метод разработан, чтобы повысить эффективность осеменения замороженной спермой.

Контрольные вопросы

1.Какие инструменты необходимы для осеменения кобыл?

2.Какое количество активных спермиев должно быть в дозе спермы для

кобыл?

3.Как выявить кобыл в охоте?

4.Какова кратность и время введения доз спермы кобылам?

5.Методика размораживания спермы жеребцов.

6.Какие требования предъявляются к дозам спермы для птиц?

7.Какие среды требуются для разбавления спермы птиц?

8.Охарактеризуйте технику искусственного осеменения кур.

9.Какова техника искусственного осеменения индеек?

10.Какова техника искусственного осеменения гусынь?

11.Какова методика искусственного осеменения собак?

12.Какие требования предъявляются к дозам спермы для собак?

102

3.ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Занятие 16. Технология получения эмбрионов

Цель занятия: изучить технику получения эмбрионов у коров и телок.

Материал и оборудование: клинически здоровые коровы; набор гонадотропных препаратов (фоллимаг, фоллигон, хорулон); простагландины (эстрофан, магэстрофан, просольвин или аналоги); витаминные препараты; шприцы для инъекций с иглами; 2-3 коровы или телки на 7-8-й день после суперовуляции и осеменения; станок для фиксации животных; катетер Фоллея для извлечения зародышей; защитные чехлы разового использования из полиэтилена к катетерам; среда Дюльбекко для вымывания (фос- фатно-солевой буферный раствор); сыворотка крови северного оленя или фетальная сыворотка теленка; шприцы емкостью 60 мл (Луэра); 2% раствор новокаина; 2% раствор рометара или ветранквил; 96% этиловый спирт; градуированные стеклянные цилиндры на 500 мл; часовые стекла; пипетки для манипуляции с эмбрионами; сифонные шланги; чашки Петри; термостат; холодильник; стерилизатор; фартуки; одноразовые полиэтиленовые перчатки.

Задание 1: изучить методики гормональной обработки животных доноров с целью суперовуляции.

Схемы гормональной обработки коров-доноров. Важный момент в технологии трансплантации эмбрионов – вызывание суперовуляторной реакции яичников коров-доноров, которая является решающим фактором биотехнологии трансплантации эмбрионов. Под способом вызывания суперовуляции яичников у коров подразумевают определённую последовательность воздействия на организм животного биологически активными веществами, в результате чего многократно увеличиваются воспроизводительные способности высокоценных животных. Процесс вызывания суперовуляции состоит из отбора, оценки потенциальных способностей коров и их подготовки путём создания оптимальных условий кормления и содержания, витаминизации, диспансеризации, определения индивидуальной схемы гормональной обработки и дозы гонадотропина, обработки гормональными препаратами, стимуляции овуляции во время течки и осеменения животных.

103