Файл: Практикум_по_акушерству_и_гинекологии.pdf

В практике для вызова суперовуляции применяют в основном два гонадотропных препарата: сыворотку жеребых кобыл (СЖК) и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ).

Препараты СЖК обладают комплексной фолликулостимулирующей и лютеонизирующей активностью, что обусловлено содержанием в них фолликулостимулирующего и лютеонизирующего гормонов. Соотношение ФСГ и ЛГ в различных партиях неодинаково, что усиливает вариабельность суперовуляции. Оптимальным соотношением ФСГ и ЛГ принято считать 3:1. Длительность действия СЖК позволяет применять для вызывания суперовуляции однократную инъекцию СЖК.

Используемые в практике стандартные гонадотропные препараты высокой очистки, изготовленные из сыворотки жеребых кобыл (СЖК), имеют различные фирменные наименования – гравогормон, сывороточный гонадотропин, прегматон, серогонан, интергонан, маретропин, фоллигон, фоллимаг.

Количество животных, реагирующих множественным ростом фолликулов на введение экзогенного гонадотропина, находится в прямой зависимости от дозы препарата, с увеличением которой повышается число неовулированных фолликулов. Оптимальная доза лиофилизированных стандартных препаратов СЖК высокой очистки – 2500-3000 ИЕ.

Для вызывания суперовуляции с использованием СЖК применяют несколько схем гормональной обработки. Схема№1 наиболее приемлема, ей можно пользоваться без хорионического гонадотропина (табл. 6). При недостатке в рационах витаминов или затрудненном их усвоении в неблагоприятный для воспроизводительной функции животных зимне-весенний период, а также для повышения эффективности гормонального вызывания суперовуляции кроме СЖК и простагландидов коровам-донорам дают витамины А и Е (табл. 6, схема 2).

Применение схемы №2 обеспечивает проявление множественной овуляции у 81,6% животных. После введения простагландина большинство коров-доноров (95,9%) проявляют признаки охоты через 48 ч.

Среднее число фолликулов, индуцированных к росту на одного отреагировавшего донора, составляет 15, а овуляций около 13 (87,8%), то есть не все индуцированные к росту фолликулы овулируют. Эффективность метода вызывания суперовуляции

104

определяется числом эмбрионов на одного обработанного донора.

Обработка по схеме №2 обеспечивает получение 4-6 нормальных эмбрионов. Число дегенерируемых эмбрионов у большинства обработанных доноров остается значительным и составляет в среднем 1,9 на донора (25,4%), число неоплодотворенных яйцеклеток минимальное (13,3%).

Между числом овуляций и количеством извлеченных зародышей существует прямая зависимость. Оптимальный уровень, при котором обеспечивается удовлетворительная оплодотворяемость яйцеклеток и выход нормальных эмбрионов – 4-15 овуляций.

Наряду с СЖК для вызова суперовуляции у коров-доноров используют фолликулостимулирующий гипофизарный гормон (ФСГ) (табл. 6). В отличие от СЖК препараты ФСГ вводят многократно, так как период полураспада ФСГ очень короткий (5 ч). Он

105

обеспечивает получение большего числа нормальных эмбрионов на обработанного донора и повышает оплодотворяемость яйцеклеток.

Наличие неовулированных фолликулов можно уменьшить путем включения в схемы обработки хорионического гонадотропина либо рилизинг-гормона гонадотропина (сурфагон, фертагил). Применение данных препаратов заметно уменьшает число неовулированных фолликулов и повышает уровень овуляции. С повышением числа овуляций увеличивается выход нормальных эмбри-

онов (на 25,8%).

Осеменение коров-доноров. Правильный выбор препарата и его дозы позволяет создавать более благоприятные условия для овуляции и оплодотворяемости яйцеклеток. Достаточно однократно осеменить корову-донора двойной дозой, содержащей 50 млн. сперматозоидов, через 10-12 ч после проявления рефлекса неподвижности, а при необходимости, если признаки охоты сохраняются, осеменение повторить через 12 ч после первого.

Задание 2: освоить методику и практические приемы нехирургического способа извлечения зародышей.

Извлечение эмбрионов двухканальным эластичным кате-

тером Фоллея. Для извлечения зародышей используется двухканальный резиновый катетер Фоллея с надувным баллончиком и шестью отверстиями на конце. Для придания жесткости при введении инструмента в канал катетера вводят упругий металлический мандрен. Катетер стерилизуется кипячением в стерилизаторе.

Перед извлечением эмбрионов животное фиксируют в станке. Хвост подвязывают бинтом к ошейнику. Наружные половые органы моют теплой водой с мылом, а затем дезинфицируют тампонами, смоченными 96% этиловым спиртом. Животным холерикам вводят нейролептические вещества (2% рометар – 0,5-1,0 мл или ветранквил – 1,0 мл внутримышечно), кроме успокоения животных эти препараты способствуют усилению действия анестетиков, поэтому при выполнении низкой сакральной анестезии 2% раствор новокаина вводят эпидурально в меньшей дозе (5,0 мл) между последним крестцовым и первым хвостовым позвонками. Это приводит к уменьшению напряжения мышц прямой кишки, предотвращает дефекацию и сокращение внутренних половых органов,

106

что облегчает манипуляции и способствует более полному извлечению эмбрионов.

В просвет катетера вводят упругий металлический мандрен. Одну руку вводят в прямую кишку для контроля хода операции. Затем двумя пальцами другой руки раздвигают половые губы животного донора, осемененного 7-8 дней назад, и продвигают катетер под углом 300-450 на глубину 10-15 см по верхней стенке влагалища к своду влагалища. В дальнейшем, канюлю катетера вводят в канал шейки матки так же, как при ректоцервикальном способе искусственного осеменения. После чего извлекают мандрен из катетера и осторожно продвигают его в верхушку рога матки, не доходя до места соединения рога с яйцепроводом примерно 5-10 см. Когда катетер достиг нужного положения, в резиновый баллончик через нижний ход с помощью шприца нагнетают, в зависимости от размеров матки, 15-20 мл воздуха. Через стенку прямой кишки тщательно контролируют размеры и место расположения баллончика во время наполнения его воздухом и в период промывания (рис. 20).

Рис. 20. Извлечение эмбрионов нехирургическим способом:

1 – катетер Фоллея; 2 – шейка матки; 3 – рог матки; 4 – надувной баллончик; 5 – яичники

Резиновый баллончик фиксирует катетер в роге матки и ограничивает объем полости рога матки, из которого вымывают эмбрионы. При этом жидкость не вытекает в другой рог. Далее в свободный конец основного канала вставляют стерильную иглу от шприца, соединяют ее с флаконом через резиновую трубку со стеклянным или эбонитовым краником. Флакон с промывной жидкостью поднимают на высоту 2-2,5 м от пола и укрепляют на

107

штативе. Затем открывают краник, и жидкость из флакона перемещается в рог матки. Чаще всего используют два флакона среды Дюльбекко по 250 мл с добавлением 1%-й фетальной сыворотки в объёме 2,5-5 мл и антибиотиков. На промывание одного рога матки затрачивают в среднем 450-500 мл среды.

Количество жидкости, извлекаемой обратно, составляет 95-98%, так как часть ее всасывается в полости матки. После промывания рога выпускают воздух из резинового баллончика, а катетер осторожно перемещают в соседний рог. Следующий рог матки промывают также. Собранную промывную жидкость в стеклянных цилиндрах передают в стерильный бокс.

Для профилактики различных осложнений в матку после промывания вводят специальные бальзамические эмульсии или смесь

1)гормональных препаратов, применяемых при обработке доно-

ров;

2)конструкции устройства для извлечения эмбрионов;

3)полноты извлечения промывной жидкости;

4)квалификации специалиста;

5)глубины введения катетера в рог;

6)величины орошаемой поверхности;

7)интенсивности оттока промывной жидкости.

В30% случаев в промывной жидкости эмбрионы могут отсутствовать по причинам ановуляторных половых циклов после гормональной обработки, нарушения транспорта яйцеклеток, зигот и эмбрионов в яйцепроводе, дегенерации и рассасывания оплодо-

творенных и неоплодотворенных яйцеклеток, неправильного положения катетера при промывании рогов матки.

Полученную жидкость помещают в вертикальные цилиндры ёмкостью по 500 мл для отстаивания осадка, в котором и будут находиться эмбрионы.

Контрольные вопросы

1.Какой катетер используется для извлечения эмбрионов?

2.Методы стерилизации инструментов.

3.Нейролептические вещества.

108

4.Техника введения акушером катетера.

5.Инструменты, используемые для извлечения эмбрионов.

6.От каких факторов зависит эффективность извлечения эмбрионов?

7.По каким причинам эмбрионы могут отсутствовать в промывной

жидкости?

8.Преимущества и недостатки нехирургического способа извлечения эмбрионов.

9.Количество жидкости, требуемое для промывания одного рога.

10.Продолжительность промывания рога.

Занятие 17. Оценка качества эмбрионов и техника их пересадки

Цель занятия: изучить критерии оценки качества эмбрионов крупного рогатого скота и освоить технику пересадки эмбрионов с использованием катетера.

Материал и оборудование: эмбрионы, полученные от животных на 7-8 день после суперовуляции и осеменения; среды для хранения эмбрионов; чашки Петри; часовые стекла; микропипетки; шприцы типа «Рекорд» на 1 мл; настольный бокс с терморегулятором; лупы бинокулярные с осветителями (типа МБС-9); инвертированный микроскоп МБС-13; пробирки для транспортировки эмбрионов; 96% этиловый спирт-ректификат; тампоны ватные пропитанные 96% этиловым спиртом; животные-реципиенты; катетеры, состоящие из металлической трубки длиной 450 мм, диаметром 4,5 мм, защитного кожуха длиной 250 мм, диаметром 6 мм, пластикового катетера длиной 550 мм, диаметром 33 мм, шприца на 1 мл с переходником (муфтой).

Задание 1: овладеть методикой оценки качества эмбрионов.

Обнаружение эмбрионов. Промывную жидкость, размещенную в вертикальных цилиндрах для осаждения эмбрионов, помещают сразу после извлечения эмбрионов в термостат на 20 мин

при температуре 37 С. Затем с помощью шприца и сифона удаляют пену и верхний слой жидкости, оставляя 60-80 мл. Отстой переносят осторожно в чашки Петри, дно которых расчерчено на квадраты размером 1×1 см. Стенки и дно цилиндров необходимо ополоснуть небольшим количеством (5-10 мл) промывной среды и вылить в чашку Петри. Поиск производят под микроскопом при 15-25-кратном увеличениях. Обнаруженные зародыши переносят

109