Файл: Лабораторная работа 2 по учебному курсу Биотехнологии.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.10.2023
Просмотров: 262
Скачиваний: 9
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИфедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования
«Тольяттинский государственный университет»
Институт химии и энергетики
| (наименование института полностью) |
| Кафедра «Химическая технология и ресурсосбережение» |
| (Наименование учебного структурного подразделения) |
| 18.03.02 Энерго- и ресурсосберегающие процессы в химической технологии нефтехимии и биотехнологии |
| (код и наименование направления подготовки / специальности) |
| Рациональное природопользование, рециклинг и утилизация отходов |
| (направленность (профиль) / специализация) |
Лабораторная работа № 2
по учебному курсу «Биотехнологии»
(наименование учебного курса)
Вариант ____ (при наличии)
| Обучающегося | | |
| | (И.О. Фамилия) | |
| Группа | | |
| | | |
| Преподаватель | | |
| | (И.О. Фамилия) | |
Тольятти 2023
Лабораторная работа № 2.
Выращивание микробов на различных питательных средах
Цель: освоить основные методики приготовления искусственных питательных сред, наиболее широко применяемых в лабораториях.
Материалы и оборудование: сухая смесь (пептонно-агарная среда), водная баня, электронные весы, чашки Петри.
Задания:
1) Приготовить пептонно-агарную питательную среду (смотреть методику ниже).
2) Залить питательную среду в чашки Петри (всего 4 шт.)
3) Взять пробы воздуха (из двух мест), воды и смывы с рук.
4) Ответить на вопросы.
5) Сделать вывод.
Искусственные питательные среды для бактерий .
Искусственные среды разделяют на животные [например, мясопептонный агар (МПА) или мясопептонный бульон (МПБ)] и растительные (например, настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло и др.). Естественные среды для выращивания бактерий Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения. По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды дм выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные). Классификации питательных сред по загрязнённости материала Если материал слабо загрязнён посторонней микрофлорой, то для выделения чистых культур применяют простые (по составу) среды. При обильной контаминации сапрофитами используют специальные или элективные (для отдельных видов), селективные (только для отдельных бактерий), дифференциально-диагностические (для облегчений идентификации) среды.
Агар-агар получают из некоторых морских водорослей путем экстракции водой при кипячении. Образуемая масса представляет собой студень. Высококачественный агар-агар изготавливают из красных морских водорослей. По составу это сложное органическое соединение, в котором преобладают полисахариды (70 - 80 %). Готовый агар-агар слабожелтого цвета, имеет вид шнуров, пластинок или порошка. Плавится при температуре примерно 100 °С, застывает при 40 °С. При добавлении к среде придает ей плотность.
Пептон - продукт неполного распада белков, происходящего под действием ферментов в кислой среде. По составу это смесь полипептидов и некоторых аминокислот. Содержит вещества, необходимые для жизни многих микроорганизмов. Получают пептон из рубца крупного и мелкого рогатого скота. Препарат легко растворяется в воде, при
нагревании не свертывается, не выпадает в осадок при добавлении в раствор солей.
Желатин - животный клей, состоящий из белка. Получают его путем варки хрящей, костей и сухожилий. Внешне он напоминает листочки светло-коричневого цвета, не имеет запаха и вкуса. Плавится при температуре 32 - 34 °С, застывает при 16 °С.
Ход работы:
Мясопептонный агар (МПА) – среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Представляет собой плотную студнеобразную массу. Питательная среда имеет вид студня светло-коричневого цвета и содержит:
-пептон сухой ферментативный - 10 г;
-натрий хлористый - 5 г;
-агар микробиологический - 13 г;
- мясной экстракт(из мяса крупного рогатого скота) - до 1 л.
Мясо-пептонный агар (МПА). Для приготовления рабочих сред навеску сухого порошка в количестве, указанном на этикетке (чаще 15-18 г), растворяют при нагревании в 300 мл дистил. воды, кипятят, помешивая, до образования быстрооседающей крупной пены, не допуская пригорания, охлаждают до 50°С, взбалтывают и разливают по бактериол. чашкам.
-
На аптекарских весах необходимо отвесить 0.66 грамма сухой смеси. -
Высыпать в пробирку с 11 мл дистиллированной воды. -
Поставить на водяную баню стакан с водой и поместить в него пробирку. -
Довести до кипения и оставить на 20 минут до получения равномерной желтоватой вязкой жидкости. -
Перед разливом в чашки Петри среду охладить до 50°C, разливать слоем 4 — 6 мм. Разливку питательной среды лучше производить, когда она имеет температуру около 50°, так как при этом на крышках чашек не образуется капель воды в результате конденсации пара. -
Подсушить питательную среду. -
Произвести пробы воды, воздуха и смывы с рук. Пробы воздуха берутся в течение 1 минуты (крышка чашки Петри поднимается и засекается 60с, далее крышка закрывается). Студенты отправляются брать пробы в столовую и из вестибюля. Смывы с рук осуществляются следующим образом. Непосредственно перед взятием смыва ватную паочку увлажняют средой. При взятии смывов с рук протирают тампоном ладонные поверхности обеих рук, проводя не менее 5 раз по каждой ладони и пальцам, затем протирают межпальцевые пространства. Перед посевом смывов в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Изотонический раствор соли получают, растоворяя 3 г NaСl и 220 мл дистиллята. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Аналогично берем пробу воды. Проба воды наносится на питательную среду. -
Все пробы подписываются!
Вопросы для самоконтроля:
1. Для чего используют питательные среды?
Питательные среды - это субстраты, на которых выращивают микроорганизмы и тканевые культуры. Их используют для диагностических задач, выделения и изучения чистых культур микроорганизмов, получения вакцин и лекарств, для других биологических, фармацевтических и медицинских целей.
2. Как подразделяются питательные среды по происхождению?
По присхождению питательные среды подразделяют на естественные, синтетические и полусинтетические.
Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы).
Полусинтетические среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда).
Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава.
3. Какие компоненты используются для приготовления питательных сред?
Основные компоненты большинства питательных сред – это продукты животного и растительного происхождения. Для приготовления питательных бульонов используют мясную воду или перевары от кислотного или ферментативного гидролиза. Чаще всего используют панкреатический перевар Хоттингера, гидролизаты казеина и кормовые дрожжи. На их основе готовят различные среды.
4. Какие вещества служат для уплотнения сред?
Для уплотнения питательных сред применяют агар-агар, желатин и кремнекислый гель (силикагель).
Агар-агар (по-малайски «желе») — бесцветный или желтоватый твердый продукт; растительный коллоид, получаемый из некоторых морских водорослей, смесь двух кислых полисахаридов, содержащихся в клеточных стенках красных водорослей. В его состав входят азотсодержащие соединения: общий азот (0,4—0,9%), аминный азот (0,03—0,09%). Основное вещество агар-агара, обладающее желиру- ющей способностью, состоит из кальциевой соли, кислого эфира, серной кислоты и углеводного комплекса — полисахарида, в состав которого, как полагают, входят в различных соотношениях араби- ноза, глюкоза, галактоза и др.
Желатин, «животный клей» - студнеобразующее вещество, получаемое путем вываривания костей и хрящей животных, или экстракт из хрящей, кожи, костей животных. Мало пригодна в качестве уплотнителя сред, так как плавится при температуре 23—26 °С, т.е. переходит в жидкое состояние при температурах, которые необходимы для культивирования большинства патогенных бактерий. Разжижается протеолитическими ферментами многих бактерий. Желатин используют главным образом для приготовления полужидких питательных сред (МПЖ), диагностических целей (выявление протеолитической активности микроорганизмов), получения гигантских и глубинных колоний дрожжей в целях их идентификации.
Кремнекислый гель используют как твердую основу для синтетических сред строго определенного состава. Это вещество неорганической природы, состоящее из жидкого стекла (НС1 + раствор Na2Si03 или K2Si03).
Вывод: В ходе лабораторной работы были освоены основные методики приготовления искусственных питательных сред, наиболее широко применяемых в лабораториях. Таким образом, можно сделать вывод, что пиательная среда - однокомпонентный или многокомпонентный субстрат, применяемый для культивирования микроорганизмов или культур клеток высших организмов. Одним из основных факторов успешного культивирования является состав и свойства питательной среды. Универсальной питательной среды, пригодной для роста и развития всех без исключения микроорганизмов не существует, поскольку конструктивные и энергетические процессы микробов различны. Основные компоненты любой питательной среды – источники азота и углерода. Их количественное отношение является определяющей характеристикой большинства сред.