Файл: Практическая работа Знакомство с микробиологической лабораторией Задание 1.docx

ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ ПО МИКРОБИОЛОГИИ

Практическая работа 1. Знакомство с микробиологической лабораторией
Задание 1

1)Выпишите классификацию микроорганизмов по степени их биологической опасности.

По степени биологической опасности микробы разделены на 4 группы патогенности: I группа – возбудители особо опасных инфекций; II группа – возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний человека; III группа – возбудители инфекционных болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы; IV группа – условно-патогенные микробы (возбудители оппортунистических инфекций).
2) Перечислите зоны и помещения бактериологической лаборатории.

В состав бактериологической лаборатории входят: лабораторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и зараженной посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; бактериологическая кухня - для приготовления, разлива, стерилизации и хранения питательных сред; виварий для содержания подопытных животных; материальная для хранения запасных реактивов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.
3)Запишите и выучите правила, которые необходимо выполнять при проведении микробиологических исследований.

1. Работа в лаборатории ведется исключительно в халатах и сменной обуви или бахилах.

2. Верхняя одежда и сумки не должны находиться в лаборатории.

3.Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее плате на халат.

3. Запрещается принимать пищу и пить воду в лаборатории.

4. Работу с биологическим материалом проводить только предварительно обработанным инструментом.

5. При случайном попадании биологического материала на стол, руки или другие поверхности необходимо сразу же оповестить об этом преподавателя и провести обработку загрязненной поверхности дезинфицирующим раствором.

6. После работы необходимо тщательно вымыть руки с использованием дезинфекционных средств.

7. Рабочее место следует поддерживать в чистоте, не загромождать его посудой и лишними вещами.

8. Лабораторную работу необходимо проводить в точном соответствии с описанием в методических указаниях.

9. Для проведения работы пользоваться только чистой, сухой лабораторной посудой; для отбора объемов реактивов нужно иметь мерную посуду (пипетки, бюретки, мензурку, мерный цилиндр или мерный стакан); нельзя выливать избыток налитого в пробирку реактива обратно в емкость.

---

10.Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.
4) Выпишите методы микробиологического исследования.

Микроскопический - изучение микробов в окрашенном и неокрашенном (нативном) состоянии с помощью различных типов микроскопов.

2. Микробиологический - (бактериологический, культурный) - посев материала на питатель­ные среды для выделения чистой культуры и определения ее вида (идентификации).

3. Экспериментальный (биологический) - заражение микробами лабораторных животных.

4. Иммунологический (в диагностике инфекций) - изучение ответных специфических реакций микроорганизма на контакт с микробами.
Задание 2

Решение ситуационной задач оформить в таблице.

1. Микробиологическая лаборатория при проверке комиссией получила неудовлетворительную оценку. В лаборатории два входа. В ней чисто и уютно, на подоконниках живые цветы, все сотрудники были в халатах и тряпичных тапочках. Аптечка экстренной медицинской помощи была полностью укомплектована. Стены лаборатории оклеены красивыми обоями.

За что лаборатория получила «двойку»?

№	Критерий оценки	Допущенные ошибки	Требования (как должно быть?)
1	Неуд.	На подоконниках живые цветы	Недолжно быть цветов
2	Неуд.	Стены лаборатории оклеены обоями	Стены должны быть облицованы глазурованной плиткой на высоту 1,5м, или выкрашены масляной краской
3	Неуд.	Тряпичные тапочки	Тапочки должны быть обрабатываемые. Тряпичные-запрещены!

Практическая работа 2. Микроскопические методы исследования
Задание 1

Выпишите микроскопические методы исследования микроорганизмов. Опишите способы окраски препаратов.
Микроскопические методы исследования основаны на обнаружении и исследовании возбудителя в биологическом материале. Используют светооптическую и электронную микроскопию. Светооптическая микроскопия позволяет изучать объекты размером более 0,2 мкм (бактерии, простейшие, грибы и др.), электронная микроскопия - более мелкие объекты (вирусы, отдельные структуры микроорганизмов).

---

Способ окраски: Клетки микроорганизмов окрашивают главным образом анилиновыми красителями. Различают простые и дифференциальные способы окрашивания микроорганизмов. При простой окраске прокрашивается вся клетка, так что становятся хорошо видны ее форма и размеры. Дифференциальная окраска предполагает окрашивание не всей клетки, а определенных ее структур. С помощью дифференциальной окраски выявляют некоторые клеточные структуры и запасные вещества. Для простого окрашивания клеток микроорганизмов чаще всего пользуются фуксином, генциановым фиолетовым, метиленовым синим.
Задание 2


Фото 1. Световой микроскоп
Инструктаж: впишите части светового микроскопа

Механическая часть:

1 штатив

2 колонка с микро и макровинтамами

3 тринокулярный тубус

4 револьвер с обьективами

5 предметный столик

Оптическая часть:

1 окуляры

2 объективы

Осветительное устройство:

1 конденсор

2 источник света

3 коллектор
Задание 3

Инструктаж: определите основные и дополнительные структуры бактериальной клетки

Основные структуры бактериальной клетки:

• 
  клеточная стенка,
  
• 
  цито-плазматическая мембрана,
  
• 
  цитоплазма с включениями и ядро, называемое нуклеоидом.
  

Дополнительные структуры: капсулу,

• 
  микрокапсулу,
  
• 
  слизь,
  
• 
  жгутики,
  
• 
  фимбрии,
  
• 
  пили;
  
• 
  некоторые бактерии способны образовывать споры.
  

Задание 4

Инструктаж: зарисуйте и подпишите варианты расположения спор

Инструктаж: зарисуйте варианты расположения жгутиков

Практическая работа 3. Бактериологические методы исследования
Задание 1

Фазы роста бактерий.

• 
  лаг-фаза
  
• 
  фаза логарифмического роста
  
• 
  фаза стационарного роста, или максимальной концентрации
  

Задание 2

Методы выделения чистой культуры бактерий.

Чистые культуры микроорганизмов, как правило, выделяют внутри или на поверхности твердых питательных сред. Для выделения чистых культур микроорганизмов из объектов окружающей среды, содержащих обильную микрофлору, предложено много различных методов. Все они основаны на выделении из популяции одной клетки.

---

Метод разбавлений Пастера. Из суспензии, содержащей смесь микроорганизмов, делается ряд последовательных разведении в стерильной жидкой питательной среде. С каждым разведением количество микроорганизмов, попадающих в пробирку, будет уменьшаться и можно таким образом получить такие разведения, когда в объеме среды в пробирке будет находиться только одна клетка, из которой и разовьется чистая культура. Однако этот метод не всегда дает возможность получить чистую культуру и в настоящее время практически мало используется.

Выделение чистой культуры из одной клетки капельным методом. Предварительно подготавливается разведение культуры микроорганизма в питательной среде с таким расчетом, чтобы в небольшой капле этой среды могли быть единичные клетки. Затем на поверхность стерильного стекла с помощью простерилизованной иглы и стеклянной палочки наносят ряды мелких капель среды, содержащей микроорганизмы. Стекло перевертывают и помещают над лункой предметного стекла. Края лунки предварительно обмазывают вазелином. Затем все капли просматривают под микроскопом и отмечают те из них, в которых находится только одна клетка. Стекло помещают в чашку Петри, на дне которой находится увлажненная фильтровальная бумага, и ставят в термостат; клетка размножается, образуя микроскопическую колонию. Полученную колонию снимают стерильной фильтровальной бумагой, которую держат простерилизованным на пламени пинцетом, и переносят в пробирку с питательной средой. Выделение чистой культуры капельным методом используется при работе с крупными микроорганизмами (дрожжи, плесени).

Выделение чистой культуры с помощью микроманипулятора. Для выделения под контролем микроскопа одиночных микробных клеток и их посева применяют специально оборудованные микроскопы -микроманипуляторы. Отдельные микробные клетки в них вылавливаются из висячей микрокапли микропипеткой и микропетлей, перемещаемыми в поле зрения микроскопа с микронной точностью с помощью системы винтов и рычагов.

Для выделения аэробов наиболее распространен в микробиологической практике метод выделения чистой культуры с помощью твердых сред (метод Коха). Метод заключается в получении чистой культуры из отдельной колонии, выросшей на твердой питательной среде в результате размножения одной клетки. Метод основан на том, что при нанесении микроорганизмов из посевного материала на твердую среду отдельные клетки будут закрепляться (иммобилизироваться) в определенной точке твердой среды и, размножаясь, давать потомство (клон), представляющее чистую культуру микроорганизма Для получения изолированных колоний на твердой среде исследуемый материал высевают на поверхность твердой питательной среды, наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала. Рассев проводят либо методом истощающего мазка, либо методом истощающего штриха. В первом случае шпателем равномерно распределяют нанесенную каплю по поверхности твердой среды. Тем же шпателем делают посев на поверхности второй пластинки и затем третьей, т. е. перенося последовательно на твердую среду клетки микроорганизмов, которые остались на шпателе. Таким образом, количество микроорганизмов,

---

вносимых последовательно на пластинки, будет уменьшаться: на вторую - меньше, чем на первую; на третью - еще меньше, чем на вторую
Задание 3

Классификация питательных сред

Инструктаж: заполните таблицу



Практическая работа 4. Правила отбора и доставки биоматериала в лабораторию
Задание 1

Инструктаж: установите соответствие между одной цифрой и одной буквой

Класс отходов	Название отходов
1.Класс А (ответ в)	а) близкие к промышленным
2.Класс Б (ответ ж)	б) радиоактивные
3.Класс В (ответ д)	в) неопасные
4.Класс Г (ответ г)	г) опасные
5.Класс Д (ответ б)	д) чрезвычайно опасные
	е) промышленные
	ж) средне опасные
	з) биологические

Задание 2

Инструктаж: Описать правила взятия биологического материала

1. Вид исследуемого материала должен определяться клинической картиной заболевания и соответствовать локализации и характеру инфекционного процесса. В случае неясности клинической картины, а также при отсутствии очаговой симптоматики для исследования берут кровь, а в некоторых случаях мочу.

2. Всегда собирают достаточное количество материала для детального тщательного исследования).

3. Материал для бак исследования должен забираться по возможности в начальном периоде болезни .При хирургической инфекции, следовательно, материал забирают до вскрытия абсцесса, флегмоны, первичной обработки раны, оперативного лечения.

4. Забор материала должен проводиться по возможности до применения антибиотиков и антисептиков.

5. Для того чтобы избежать ошибок в определении этиологии заболевания, необходимо предупредить возможную контаминацию исследуемого материала нормальной микрофлорой больного и микроорганизмами из окружающей среды. Поэтому забор надо осуществлять в строго асептических условиях.

---