ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 16.04.2021
Просмотров: 11570
Скачиваний: 30
Способ 2. Для получения закрепленного слоя сорбента толщиной в несколько десятков микрон
2-3 г гипса растирают в ступке в 40 мл метилового спирта. В суспензию гипса, продолжая
растирание, добавляют 40 г силикагеля или окиси алюминия (200-400 меш) и 140 мл хлороформа.
Полученную суспензию сорбента из расчета 4,5 мл на 100 кв. см поверхности выливают на
тщательно вымытые сухие стеклянные пластинки, расположенные горизонтально. Пластинки, если в
частной статье не указано иначе, сушат на воздухе в течение 10-15 мин.
Суспензии сорбентов сохраняют в колбах с притертой пробкой, тщательно взбалтывая перед
употреблением.
Способ 3. Для приготовления незакрепленного слоя сорбента последний насыпают на
горизонтально расположенное матовое стекло и разравнивают до получения слоя толщиной 1-2 мм
валиком из нержавеющей стали диаметром 6-8 мм с цилиндрическими утолщениями на обоих
концах. Диаметр утолщения должен превышать на 2-4 мм диаметр валика (соответственно
предполагаемой толщине слоя). Длина средней части валика должна быть на 20-30 мм меньше
ширины стекла, на которое наносится слой сорбента. Вместо металлического валика можно
использовать стеклянную палочку с надетыми на концы кусками резиновой или полиэтиленовой
трубки, имеющей подходящую толщину стенки и диаметр.
Методика хроматографического разделения
Для разделения веществ методом хроматографии в тонком слое сорбента используют
хроматографические камеры подходящего размера. На дно камеры наливают подвижную фазу в
количестве, достаточном для образования слоя глубиной 0,5 см, камеру закрывают и выдерживают
для насыщения парами растворителей 30-60 мин. Стенки камеры для полноты насыщения можно
обкладывать фильтровальной бумагой. Анализируемый раствор наносят микропипеткой или
микрошприцем на линию старта, проведенную на расстоянии 2-3 см от нижнего края пластинки, так,
чтобы пятна образцов отстояли друг от друга и от краев слоя сорбента не менее чем на 2 см.
Нежелательное растекание пятен анализируемых проб при нанесении предотвращают путем
периодического подсушивания.
После окончательного высыхания нанесенных на линию старта пятен пластинку вносят в
камеру. Нижний край пластинки при этом должен погрузиться в подвижную фазу на 0,5-1 см.
Пластинки с закрепленным слоем сорбента располагают под углом 60-90 град., а пластинки с
незакрепленным слоем сорбента - под углом 15-20 град. к поверхности жидкости. Когда фронт
растворителя пройдет 10-15 см, пластинку вынимают, отмечают положение фронта и открывают
пятна хроматографировавшихся веществ, как указано в соответствующей частной статье.
Опрыскивание незакрепленного слоя сорбента проводят немедленно после завершения процесса
хроматографирования, не допуская высыхания хроматограммы. Результаты хроматографирования
оценивают, как описано в разделе "Хроматография на бумаге" настоящей статьи.
СПЕЦИАЛЬНЫЕ ПРИЕМЫ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ
И В ТОНКОМ СЛОЕ СОРБЕНТА
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
При необходимости достигнуть лучшего разделения анализируемых смесей веществ методами
хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента можно применять специальные приемы
хроматографирования - повторное и двухмерное.
Повторное хроматографирование заключается в том, что после завершения первого
хроматографирования пластинку или бумагу высушивают и подвергают повторному пропусканию
той же или иной подвижной фазы в том же направлении.
При двухмерном хроматографировании повторное пропускание той же или иной подвижной
фазы осуществляют в направлении, перпендикулярном направлению первоначального движения.
Двухмерное хроматографирование целесообразно осуществлять на квадратных пластинках или листах
бумаги. Анализируемая проба при этом наносится на диагональ квадрата вблизи одного из его углов.
Двухмерную хроматографию с использованием одной и той же подвижной фазы часто
применяют для проверки устойчивости веществ в условиях хроматографирования. Устойчивые
вещества образуют пятна, лежащие только на диагонали пластинки или листа бумаги.
Газовая хроматография
Газовая хроматография - это хроматография, в которой подвижная фаза находится в состоянии
газа или пара. В фармацевтическом анализе находит применение как газожидкостная, так и
газоадсорбционная хроматография. В газожидкостной хроматографии неподвижной фазой служит
жидкость, нанесенная на твердый носитель, в газоадсорбционной хроматографии неподвижной
фазой служит твердый адсорбент. В дальнейшем твердый носитель с нанесенной на него жидкой
фазой и адсорбент будут обозначаться термином "сорбент". Анализируемые вещества вводятся в
поток газа-носителя, испаряются и в парообразном состоянии проходят через колонку с сорбентом,
распределяясь в результате многократного повторения актов сорбции и десорбции между газовой и
жидкой или газовой и твердой фазами. Отношение количества вещества в неподвижной фазе к
количеству вещества в подвижной фазе представляет собой коэффициент распределения, который, в
частности, зависит от природы растворенного вещества и количества неподвижной фазы.
Разделенные вещества элюируются из хроматографической колонки потоком газа-носителя,
регистрируются детектором и фиксируются на хроматограмме в виде пиков. Полученная
хроматограмма служит основой для качественного и количественного анализа смеси веществ. Метод
газовой хроматографии применяется для анализа летучих веществ либо веществ, которые могут быть
переведены в летучие с помощью специальных приемов и устройств в парообразное состояние.
Газовый хроматограф состоит из систем: измерения и регулирования скорости потока газа -
носителя и вспомогательных газов (для детектора); ввода пробы анализируемого образца;
газохроматографических колонок, а также систем детектирования, регистрации (и обработки)
хроматографической информации; термостатирования и контроля температуры колонок, детектора и
системы ввода проб.
Газ - носитель поступает в хроматограф из баллона через редуктор. Обычно в качестве газа -
носителя применяют гелий, азот, аргон. При работе с детектором по теплопроводности
предпочтительнее гелий, так как он обеспечивает максимальную чувствительность детектора
благодаря высокой теплопроводности по сравнению с большинством органических соединений.
Система ввода пробы анализируемого образца обычно состоит из испарителя и мембраны из
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
термостойкой резины, которая прокалывается при вводе пробы. Некоторые хроматографы снабжены
также специальными дозаторами для ввода газообразных и твердых веществ. Анализируемые
вещества поступают в колонку в парообразном состоянии, поэтому температура испарителя должна
обеспечить возможно быстрое испарение компонентов пробы. Жидкие пробы вводят в хроматограф
микрошприцем. Объем вводимой пробы зависит от типа детектора, количества неподвижной
жидкой фазы и диаметра колонки. Обычно для насадочной аналитической колонки объем пробы
жидкости составляет 0,1-1 мкл, а газа - от 0,5 до 5 мл.
Газохроматографическая колонка представляет собой прямую, спиральную или U-образную
трубку, обычно изготовленную из нержавеющей стали или стекла с внутренним диаметром от 0,6 до
5 мм. Наиболее часто используются колонки длиной 1-3 м.
Эффективность газохроматографической колонки n, характеризующая степень расширения зоны
определяемого вещества на выходе газохроматографической колонки, определяется по формуле:
-
l
¬
2
n = 5,545
¦
------
¦
,
¦
"ми "
¦
L
0,5
-
где l - время удерживания вещества, выраженное в единицах
длины диаграммной ленты (например, мм); "ми " - ширина
0,5
хроматографического пика, измеренная на половине его высоты и
выраженная в тех же единицах, что и расстояние удерживания.
Степень газохроматографического разделения веществ R определяют по формуле:
"ДЕЛЬТА"l
R = -------------------------,
"ми " + "ми "
0,5(1) 0,5 (2)
где "ДЕЛЬТА"l - разность расстояний времен удерживания разделяемых веществ 1 и 2.
Температура колонки должна обеспечивать оптимальное разделение компонентов смеси при
достаточно коротком времени анализа.
Для анализа смесей с широким диапазоном температур кипения компонентов целесообразно
применять газовую хроматографию с программированием температуры либо газовую хроматографию
с программированием расхода газа - носителя, либо сочетание этих видов газовой хроматографии.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
Твердый носитель служит для удержания тонкой равномерной пленки неподвижной жидкой
фазы, его поверхность должна обеспечивать достаточное разделение. Он должен иметь достаточную
механическую прочность и быть инертным как по отношению к анализируемым веществам, так и к
жидкой фазе. В качестве твердых носителей применяют материалы на основе кремнезема -
диатомита или кизельгура (например, сферохромы, хроматоны, хезосорбы, целиты); фторуглеродных
полимеров (например, тефлон, полихром); полистирола и сополимеров стирола и дивинилбензола
(полисорбы). В отдельных случаях в качестве твердых носителей могут использоваться кристаллы
некоторых солей (например, хлорида натрия), стеклянные шарики и графитированная сажа
(карбохром). Наиболее часто используемый размер частиц твердого носителя от 0,1 до 0,5 мм. В
зависимости от задач анализа свойства носителей можно изменять обработкой их кислотами или
щелочами, а также силанизированием.
Неподвижная жидкая фаза представляет собой, как правило, высококипящую жидкость. В
качестве жидкой фазы обычно применяют: индивидуальные углеводороды или их смеси, например
вазелиновое масло, апиезоны; силоксановые полимеры без функциональных групп; сложные эфиры
и полиэфиры; простые эфиры; полифенилы; амиды; силоксановые полимеры с привитыми
нитрильными или галогеналкильными группами; одно- и многоатомные спирты; полигликоли;
амины; жирные кислоты и т. д.
Перед работой с новой колонкой ее следует кондиционировать при температуре, как правило,
на 10-30 град. С превышающей рабочую температуру, в токе газа-носителя в течение нескольких
часов. Важно следить за тем, чтобы температура термостата колонки не превышала температурного
предела применения данной фазы.
Как правило, неподвижная жидкая фаза наносится на твердый носитель в количестве 1-20% от
его массы, наиболее часто используются колонки с содержанием жидкой фазы до 5-10% от массы
твердого носителя. Нанесение жидкой фазы на носитель осуществляется из ее раствора в подходящем
растворителе. Существует несколько методов нанесения жидкой фазы, из которых предпочтительнее
пользоваться наиболее воспроизводимыми методами упаривания раствора при перемешивании в
фарфоровой чашке или удаления растворителя в ротационном вакуумном испарителе.
Для обеспечения высокой эффективности разделения применяют капиллярную газовую
хроматографию, в которой неподвижная жидкая фаза нанесена в виде тонкой пленки
непосредственно на внутреннюю поверхность капилляра. Длина капиллярных колонок обычно
составляет от 10 до 100 м, внутренний диаметр - от 0,1 до 0,6 мм.
Автоматическая система измерения, регистрации и обработки хроматографической информации
включает в себя детектор, электронные устройства усиления, самопишущий измерительный прибор и
интегратор.
Наиболее часто применяют детектор по теплопроводности и пламенно - ионизационный.
Действие детектора по теплопроводности основано на изменении теплопроводности газа - носителя
в присутствии других веществ. Он характеризуется большой универсальностью, так как чувствителен
практически ко всем летучим органическим соединениям. Действие более чувствительного пламенно
- ионизационного детектора основано на измерении тока насыщения ионизированной газовой смеси
в зависимости от ее состава. Детектор чувствителен к органическим соединениям и нечувствителен к
парам воды. Кроме этих двух детекторов, в газохроматографическом анализе лекарственных веществ,
особенно если требуется повышенная чувствительность определения, можно использовать
селективные детекторы, такие, как термоионный и электронозахватный.
Системы термостатирования и контроля температуры колонок, детектора, узла ввода пробы
предназначены для обеспечения необходимых температурных режимов анализа.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
Качественный анализ. Наиболее часто используемыми методами качественного анализа,
применяемыми для идентификации лекарственных веществ, являются метод веществ - свидетелей и
метод относительных удерживаний.
Метод веществ - свидетелей заключается в том, что непосредственно после анализа
исследуемого образца в идентичных условиях проводят хроматографирование веществ, присутствие
которых в исследуемой пробе вероятно. Совпадение времен удерживания любого из компонентов
анализируемой пробы и вещества - свидетеля может служить доказательством идентичности обоих
веществ. Можно ввести вещество - свидетель прямо в анализируемый образец. В этом случае
критерием идентичности служит увеличение соответствующего пика на хроматограмме. Поскольку
соединения различной структуры могут иметь совпадающие времена удерживания (удерживаемые
объемы), для большей достоверности проводимой идентификации хроматограммы анализируемого
образца и веществ - свидетелей должны быть сняты минимум на двух колонках с неподвижными
жидкими фазами, отличающимися по полярности.
Для идентификации веществ по методу относительных удерживаний проводят анализ образца в
условиях, указанных в конкретной методике, причем предварительно к пробе прибавляют
определенное количество указанного в методике вещества сравнения. Относительное удерживание
(ч) определяется по формуле:
t - t
R 0
ч = ------------,
t - t
Rср 0
где t - время газохроматографического удерживания
R
анализируемого вещества; t - время удерживания веществ сравнения;
Rср
t - время удерживания несорбирующегося вещества.
0
Количественный анализ. Количественный анализ проводят с учетом измерения параметров
пиков веществ на хроматограммах. Практически используют два параметра пиков: площадь или
высоту. Наиболее часто применяемым параметром является площадь пика.
Площади пиков на хроматограмме определяют одним из следующих
способов: умножением высоты пика (h) на его ширину ("ми "),
0,5
измеренную на половине его высоты; планиметрированием; с помощью
интегратора. В связи с тем что, чувствительность детекторов по
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.