Файл: Лабораторные работы биобезопасность биотехнологических производств.doc

Скачать файл
Заказать решение

ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 08.11.2023

Просмотров: 95

Скачиваний: 1

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ


БИОБЕЗОПАСНОСТЬ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДСТВ

Цель:

Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно-микробиологической оценки объектов окружающей среды.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

  1. Природные микробиоценозы. Экологические связи в микробиоценозах.

  2. Экологические ниши микробов:

  • микрофлора почвы;

  • микрофлора воды;

  • микрофлора воздуха;

  • микрофлора производственных объектов и ее роль в распространении инфекционных болезней.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

  • проводить оценку санитарно–бактериологического состояния воздуха, воды и смывов с рук, предметов;

  • определять бактерии группы кишечной палочки (БГКП).

Методические указания

Работа № 1. Санитарно-бактериологическая оценка воздуха



Микрофлора воздуха

Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха по общему микробному числа (ОМЧ) на МПА и количеству гемолитических стрептококков на молочно-солевом агаре.

Сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по справочной таблице (см. теоретическую справку).

Опыт № 1. Посев воздуха методом седиментации по Коху на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.



Результат: Количество выросших колоний = 37

Опыт № 2. Посев воздуха методом седиментации по Коху на молочно-солевой агар

Подсчитать количество выросших колоний.

Результат: Количество выросших колоний = 12


Заполнить таблицу.


Опыт
метод
Результат
Оценка

(чистый, грязный)

№ 1
№ 2
Посев по Коху
Посев по Коху
ОМЧ =
количество гемолитических стрептококков ==





Вывод: На основании результатов, сделать вывод. Предложить меры по очистке воздуха от микробиологических загрязнений


Работа № 2. Санитарно-бактериологическая оценка воды



Цель: провести оценку санитарно-бактериологического состояния питьевой воды по результатам посевов. Определить ОМЧ, коли- титр, коли- индекс.

Оценить чистоту воды по справочной таблице (см. теоретическую справку). Сделать вывод.


Опыт № 3. Посев воды глубинным методом на МПА.

Подсчитать количество выросших колоний.



Результат: Количество колоний = 43
Опыт № 4. Посев воды методом мембранных фильтров на среду Эндо.

Подсчитать количество выросших колоний на мембранном фильтре.






Результат: Количество колоний = 2



Заполнить таблицу:


Опыт
метод
Результат
оценка

(норма, выше нормы, ниже нормы)

№ 3
№ 4
глубинный посев
мембранных фильтров
ОМЧ =
коли-титр =

коли-индекс=





Вывод: На основании результатов, сделать вывод. Предложить меры по очистке воды от микробиологических загрязнений

Работа № 3. Санитарно-бактериологическая оценка почвы




Цель: провести оценку санитарно- бактериологического состояния почвы по результатам посевов (см. теоретическую справку). Определить ОМЧ, коли-титр, коли- индекс, перфрингенс-титр.

Результаты внести в таблицу. Сделать выводы.
Опыт № 5. Посев почвы на МПА глубинным методом.

Опыт № 6 .Посев почвы на среду Кесслера (для выявления БГКП).

Опыт № 7 .Посев почвы на среду Эндо (для выявления БГКП).

Опыт № 8 .Посев почвы на среду Вильсон-Блера (для выявления анаэробов).

Опыт № 9 .Мазок, сделанный со среды Вильсон-Блера


Опыт
метод
Схема опыта
Результат
Оценка

(норма, выше нормы, ниже нормы)

№ 5
№ 6,7

№ 8,9
Глубинный посев
посев



-1 -3 -6

разведения почвы МПА

в воде
посев


-1 -3 –6 Эндо (Гр- пал.)

среда Кесслера


-1 -3 –6 -1 -3 -6

разведения среда ( Гр+ спо-

почвы Вильсон-Блера ровые

палочки)

ОМЧ= 13

коли-титр= 12

титр-перфрингенс= 3




Вопросы:

  1. Какой состав имеет среда Вильсона-Блера?

  2. С какой целью используют посев на среду Вильсона-Блера?

Ккакие микроорганизмы можно увидеть в препарате для микроскопии, сделанный со среды Вильсона-Блера?

Вывод: На основании результатов, сделать вывод. Предложить меры по очистке почвы от микробиологических загрязнений


Работа № 4 Санитарно-бактериологическая оценка чистоты рук персонала

Цель: учесть результат готового посева смывов с рук на среде Кесслера.

Сделать вывод.

Опыт № 10. Посев смыва с рук персонала на среде Кесслера.


Результат: помутнение в пробирке «О»

«К» «О»
Вывод: На основании результатов, сделать вывод. Предположить источник загрязнения рук персонала. Какие меры по дальнейшему распространению микробиологического загрязнения необходимо применить?


Работа № 5. Собственная микрофлора и микрофлора загрязнения кожи рук



Цель: сделать посев микрофлоры кожи рук методом отпечатков на МПА и на среду Эндо. Записать в тетрадь номер своего посева Посевы изучить на следующем занятии.

Дано: чашки со средами МПА, Эндо.
Опыт №11.

При посеве отпечатков кожи рук на МПА через 24 часа обнаружили рост 27 колоний.
Опыт №12.

При посеве отпечатков кожи рук на среду Эндо через 24 часа не обнаружили рост колоний.

Вывод: На основании результатов, сделать вывод о микробиологической чистоте кожи рук.

Теоретическая справка

Санитарно-бактериологическая оценка объектов окружающей среды

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

  1. Правильный забор проб - а) с соблюдением стерильности; б) правил транспортировки, позволяющих избежать искажения результатов; в) быстрое проведение исследований или сохранение материала до анализа в холодильнике (не дольше 6-8 часов).

  2. Серийность проведения анализов. Для получения адекватных результатов проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала (среднее по отношению к материалу в целом).

  3. Повторность отбора проб, позволяющую получить более достоверную информацию по загрязнению объекта.

  4. Применение только стандартных унифицированных методов исследования для получения сравнимых результатов.

  1. Использование комплекса тестов.

  1. Проведение оценки объектов по совокупности полученных результатов с учетом других показателей - органолептических, химических, физических.

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований пре­дусматривают определение общей микробной обсемененности (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов, выявление в исследуемых объектах патогенных микробов и их метаболитов.

ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.

Санитарно-показательными называют микроорганизмы (СПМ), по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.

Содержание СПМ определяют: 1) прямым подсчетом с помощью специальных камер или электронным счетчиков, предварительно гомогенизируя пробу и внося краситель (эритрозин). Методика позволяет отличить живые от погибших бактерий; 2) посевом на питательные среды.

СПМ должны удовлетворять следующим характеристикам: а) постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду; б) не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты; в) длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше, и даже несколько больше, чем у патогенов; г) устойчивость СПМ в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов; д) у СПМ не должно быть в окружающей среде «двойников»; е) микроб не должен изменяться в окружающей среде; ж) методы индикации и идентификации СПМ должны быть простыми.
Микробиологическое исследование атмосферного воздуха, а также воздуха жилых и производственных помещений, занимает важное место при осуществлении его очистки от бактериального загрязнения, например, как мера борьбы с аэрогенными инфекциями.

Объектами санитарно-бактериологического исследования являются: воздух лечебно-профилактических и детских учреждений, мест массового скопления людей, промышленных районов (табл.1). Для оценки работы вентиляции проводят исследование воздуха на различных этажах зданий.


Исследование воздуха включает определение общего числа сапрофитных бактерий, стафилококков, стрептококков, которые являются показателями биологической контаминации воздуха микрофлорой носоглотки человека. При исследовании воздуха родильных домов, хирургических клиник определяют условно-патогенные микроорганизмы, вызывающие внутрибольничные инфекции.

Методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.

Седиментационный метод основан на оседании бактериальных частиц и капель под влиянием силы тяжести на поверхности агара открытых чашек Петри. Их устанавливают в точках отбора на горизонтальной поверхности. Для определения общей микробной обсемененности воздуха чашки Петри с МПА оставляют открытыми на 5-10-15 мин в зависимости от предполагаемого бактериального загрязнения. Для выявления санитарно-показательных микроорганизмов экспозиция чашек с элективными средами увеличивается до 30-60 мин. Инкубацию посевов проводят при 370С 24 час, затем чашки Петри оставляют при комнатной температуре на 48 час для образования пигмента пигментообразующими бактериями.

Для определения микробного числа подсчитывают колонии выросшие на чашках Петри (площадь поверхности агара в чашке равна 75 см2) и расчет ведут по правилу В.Л. Омелянского: на поверхность площадью 100 см2 за 5 мин оседает такое количество микробов, которое содержится в 10 л воздуха.

А х 100 х 100

Х = , где

75 см2

Х − количество микробов в 1 м3;

А − количество колоний на агаре в чашке Петри.

Аспирационный метод основан на принудительном оседании микроорганизмов на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость. Для этой цели используются аппарат Кротова, бактериоуловитель Речменского, прибор ПОВ-1 и др.

Для определения общего числа бактерий забирают две пробы по 100 л каждая. Посевы инкубируют в термостате 24 час, а затем оставляют на 48 час при комнатной температуре. Подсчитывают количество колоний на чашках, вычисляют среднее арифметическое и делают перерасчет на количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха.

Определение стафилококков

Обнаружение патогенных стафилококков в воздухе закрытых помещений имеет санитарно-показательное значение и свидетельствует об эпидемическом неблагополучии (табл. 2). Отбор проб проводят с помощью аппарата Кротова в количестве 250 л воздуха на 2 чашки Петри с молочно-солевым агаром и на чашку с кровяным агаром. Посевы инкубируют при 37

Смотрите также файлы