Министерство зравохранения и социальной защитыНОУМО «Тираспольский Межрегиональный Университет»Фармацевтический факультетКафедра фармацииКурсовая работа на тему:«Высокоэффективная жидкостная хроматография в фармацевтическом анализе»Исполнитель: студента V курсаЛозинского Владимира Руководитель:Тирасполь 2011 СОДЕРЖАНИЕВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………ГЛАВА I. Основные положения хроматографии……………………….4-61.1.Характеристика метода………………………………………………..41.2.Классификация хроматографических методов……………………..4-6ГЛАВА II. Выскоэффективная жидкостная хроматография…………7-202.1. Молекулярно-адсорбционная хроматография………………………..8-102.2. Обращённа-фазовая хроматография…………………………………10-162.3.Ионная хроматография……………………………………………….16-20ГЛАВА III. Оценка пригодности ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе…………………21-263.1.Тестирование аналитических методик, как единой аналитической системы…………………………………………………………….21-233.2. Диапазон применения методик …………………………………23-243.3.Предел обнаружения ……………………………………………….24-253.4. Предел количественного определения…………………………….25-26Заключение………………………………………………………………27Список литературы………………………………………………………28ВВЕДЕНИЕСовременная высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) один из эффективных методов анализа и разделения сложных смесей. Она, как метод, была открыта в 1903 г. русским ученым-ботаником М.С.Цветом, который использовал для разделения растительных пигментов на их составляющие колонки, заполненные порошком мела. При вымывании пигментов петролейным эфиром они перемещались вдоль колонки, разделяясь при этом на кольца разного цвета. Метод оказался очень удобным и был позднее назван Цветом хроматографией (цветописью). Если ранее методы хроматографии в тонких слоях (бумажная и тонкослойная) в значительной мере заменили колоночную как более быстрые, удобные и простые, то сейчас ВЭЖХ характеризуются гигантским прогрессом. Быстрый рост применения ВЭЖХ связан с освоением и серийным выпуском как отдельных узлов (насосов, демпферов, инжекторов, детекторов), так и комплектных жидкостных хроматографов. Немалую роль сыграли также разработка теоретических основ ВЭЖХ, организация выпуска высокочистых растворителей и химикатов для ВЭЖХ. Особенно следует отметить организацию выпуска узкодисперсных сорбентов зернением от 3 до 10 мкм на основе силикагеля, в том числе и с химически привитыми неподвижными фазами, и разработку способов заполнения ими высокоэффективных колонок для ВЭЖХ. Причинами быстрого развития ВЭЖХ:

---

• 
  большой диапазон молекулярных масс веществ
  
• 
  мягкость условий ВЭЖХ
  

Эффективность разделения, которую уже сейчас дает ВЭЖХ (до 150000 т. т. на 1 м), существенно превосходит достигнутую в газовой хроматографии (ГХ). Метод ВЭЖХ дает возможность препаративно выделить из сложной смеси в мягких условиях чистые вещества, которые можно далее исследовать другими физико-химическими методами. Наконец, чувствительность, достигаемая в ВЭЖХ, в ряде случаев превосходит чувствительность в ТХ, а высокоселективные детекторы позволяют определять микроколичества веществ в сложных смесях. Метод ВЭЖХ находит широкое применение в таких областях, как химия, нефтехимия, биология, биотехнология, медицина, пищевая промышленность, охрана окружающей среды, производство лекарственных препаратов и во многих других. [1,4,5]Целью курсовой работы является изучение метода ВЭЖХ и его практического применения в определении подлинности и количественного определения лекарственных веществ на основании литературных источников.Задачи исследования:1) Раскрыть сущность и содержание хроматографии как метода анализа проб сложного состава2) Рассмотреть вопросы классификации видов хроматографии и определить место и роль ВЭЖХ среди них.3) Дать основные характеристики ВЭЖХ и общее описание особенностей эксплуатации колонок.ГЛАВА I. Основные положения хроматографии

1. 
   Характеристика метода
   

Хроматография - это физико-химический метод разделения и анализа смесей газов, паров, жидкостей или растворенных веществ сорбционными методами в динамических условиях. Метод основан на различном распре­делении веществ между двумя несмешивающимися фазами - подвижной и неподвижной. Подвижной фазой может быть жидкость или газ, неподвижной фазой - твердое вещество, которое называют носителем. При движении подвиж­ной фазы вдоль неподвижной, компоненты смеси сорбируются на непод­вижной фазе. Каждый компонент сорбируется в соответствии со сродством к материалу неподвижной фазы (вследствие адсорбции или других механизмов). Поэтому неподвижную фазу называют также сорбентом. Захва­ченные сорбентом молекулы могут перейти в подвижную фазу и продви­гаться с ней дальше, затем снова сорбироваться.Таким, образом, хроматографию можно определить как процесс, ос­нованный на многократном повторении актов сорбции и десорбции вещества при перемещении его в потоке подвижной фазы вдоль непод­вижного сорбента.

---

Чем сильнее сродство компонента к неподвижной фа­зе, тем сильнее он сорбируется и дольше задерживается на сорбенте; тем медленнее его продвижение вместе с подвижной фазой. Поскольку компо­ненты смеси обладают разным сродством к сорбенту, при перемещении смеси вдоль сорбента произойдет разделение: одни компоненты задержат­ся в начале пути, другие продвинутся дальше. В хроматографическом про­цессе сочетаются термодинамический (установление равновесия между фазами) и кинетический (движение компонентов с разной скоростью) ас­пекты.[3,5]
1.2.Классификация хроматографических методов

Различные методы хроматографии можно классифицировать по агре­гатному состоянию фаз, механизму разделения, аппаратурному оформле­нию процесса (по форме) и по способу перемещения подвижной фазы и хроматографируемой смеси.

По агрегатному состоянию фаз различают жидкостную и газовую хроматографию.

Разделение веществ протекает по разному механизму, в зависимости от природы сорбента и веществ анализируемой смеси.

По механизму взаимо­действия вещества и сорбента различают сорбционные методы, основан­ные на законах распределения (адсорбционная, распределительная, ионо­обменная хроматография и др.), гельфильтрационные (проникающая хро­матография), основанные на различии в размерах молекул разделяемых веществ. На практике часто реализуются одновременно несколько меха­низмов разделения.

По технике выполнения хроматографию подразделяют на колоночную, когда разделение веществ проводится в специальных ко­лонках, и плоскостную: тонкослойную и бумажную. В тонкослойной хроматографии разделение проводится в тонком слое сорбента, в бумаж­ной - на специальной бумаге.

В соответствии с режимом ввода пробы в хроматографическую систему различают фронтальную, элюентную и вытеснительную хроматогра­фию. Если растворенную смесь непрерывно вводить в хроматографическую колонку, то в чистом виде можно выделить только одно, наиболее слабо сорбирующееся вещество. Все остальные выйдут из колонки в виде смеси. Этот метод называют фронтальным. В элюентном режиме через ко­лонку пропускают подвижную фазу (элюент), вводят пробу, затем снова пропускают подвижную фазу (ПФ). В процессе движения по колонке компоненты смеси разделяются на зоны. Эти зоны поочередно выходят из колонки, разделенные зонами чистого растворителя.

В вытеснительном методе

---

после введения пробы и предварительного разделения слабоактивным элюентом состав элюента меняется таким обра­зом, что он взаимодействует с неподвижной фазой (НФ) каждого из ком­понентов анализируемой смеси. Вследствие этого новый элюент вытесняет компоненты, которые выходят из колонки в порядке возрастания взаимо­действия с НФ. В этом методе не достигается достаточно полное разделе­ние из-за частичного перекрывания зон.

Наибольшее распространение получил элюентный режим хроматографирования, позволяющий получать в чистом виде все компоненты пробы. В жидкостной хроматографии применяют изократический и градиент­ный режим подачи элюента. В изократическом режиме состав элюента в течение анализа не изменяется, а в градиентном режиме состав элюента меняется по определенной программе.[3,4]


ГЛАВА II. Высокоэффективная жидкостная хроматография

Жидкостная хроматография (ЖХ) - метод разделения и анализа

сложных смесей веществ, в котором подвижной фазой является жидкость.

Подвижная фаза в жидкостной хроматографии выполняет двоякую

функцию: 1) обеспечивает перенос десорбированных молекул по колонке

(подобно подвижной фазе в газовой хроматографии); 2) регулирует

константы равновесия, а, следовательно, и удерживание в результате

взаимодействия с неподвижной фазой (сорбируясь на поверхности) и с

молекулами разделяемых веществ. В ЖХ природа подвижной фазы имеет

существенно большее значение. В результате комбинации ограниченного

числа сорбентов и неограниченного числа, различных по составу,

подвижных фаз возможно решение чрезвычайно большого числа

встречающихся на практике задач. Метод ЖХ применим для разделения

значительно более широкого круга веществ, чем газовая хроматография,

поскольку большая часть веществ не обладает летучестью, а многие

вещества неустойчивы при высоких температурах. В ЖХ разделение

обычно происходит при комнатной температуре.ЖХ подразделяется на варианты в соответствии с характером основных проявляющихся межмолекулярных взаимодействий:

• 
  – в ситовой хроматографии разделение компонентов осуществляется
  
• 
  за счет разницы в растворимости молекул при их прохождении
  
• 
  (фильтрации) через слой сорбента;
  

• 
  – в адсорбционной хроматографии – за счет разницы в
  
• 
  адсорбируемости молекул, проходящих через слой частиц сорбента,
  
• 
  покрытых неподвижной фазой в виде тонкого слоя или
  
• 
  поверхностнопривитых радикальных групп;
  
• 
  – в ионообменной и ионной хроматографии – за счет разницы в
  
• 
  способности к обмену ионами с ионообменниками;
  

---

2.1. Молекулярно-адсорбционная хроматографияВ основе молекулярной адсорбционной хроматографии лежит различие в адсорбционных свойствах компонентов разделяемой смеси. В состоянии равновесия каждой концентрации адсорбируемого вещества отвечает определенное количество его на адсорбенте. В связи с тем, что такое равновесие зависит от температуры, его изучение должно проводиться при постоянной температуре. Зависимость количества адсорбированного вещества от его концентрации в растворе при состоянии равновесия и при постоянной температуре может быть выражена изотермой адсорбции.Изотерма адсорбции является важной характеристикой системы адсорбент — адсорбат, так как знание формы изотермы адсорбции, а также взаимного расположения изотерм адсорбции различных веществ может помочь правильному выбору условий хроматографического разделения сложных смесей. В зависимости от природы подвижной (ПФ) и неподвижной (НФ)фазы различают нормально-фазовую (НФХ) и обращенно-фазовую (ОФХ)хроматографию. В нормально-фазовой ВЭЖХ НФ – полярная (чаще всегосиликагель), а ПФ – неполярная (гексан, либо смеси гексана с болееполярными органическими растворителями – хлороформом, спиртами ит.д.). Удерживание веществ растет с увеличением их полярности. Разделения компонентов достигают, меняя элюрующую силу подвижной фазы, которая зависит от энергии взаимодействия компонентов ПФ с поверхностью НФ. В нормально-фазовой хроматографии элюирующая способность ПФ увеличивается с ростом ее полярности.В обращенно-фазовой хроматографии неподвижная фаза –неполярная (гидрофобные силикагели с привитыми группами С8, С18);ПФ – полярная (смеси воды и полярных растворителей: ацетонитрила, метанола, тетрагидрофурана и др.). Удерживание веществ растет с увеличением их гидрофобности (неполярности). Наименьшей элюирующей способностью обладает вода, а для повышения элюирующейспособности в ПФ вводят ацетонитрил, метанол и другие растворители.[1]Этот наглядный подход позволяет предвидеть насколько вероятноизменение селективности при замене одного растворителя другим. Растворители одной группы сходны по селективности, максимального изменения селективности можно ожидать при замене одного растворителя

---

Смотрите также файлы

• международные стандарты учета и отчетности.docx

• Оренбургский государственный университет (Кумертауский филиал огу).docx

• Тренировочный вариант 1 (почти все задания взяты из реальных кимов егэ 2022) Часть 1.docx

• 1. Закончите определение.docx

• Первая мировая война 19141918.docx