Выбор неподвижной фазы имеет большое значение при проведении

любого хроматографического разделения. Синтез сорбентов для ионной

хроматографии затруднен, поскольку к ним предъявляется довольно много требований:

– сорбент должен иметь очень низкую ионообменную емкость (0,001-0,1 мэкв/г). Это связано с использованием кондуктометрического детектирования, при котором необходимы элюенты (растворы кислот, солей, оснований) с концентрацией менее 0,01 М. Для эффективного разделения такими разбавленными элюентами требуются низкоемкостные

ионообменные сорбенты;

– диаметр сорбента не должен превышать 50 мкм (обычно он равен 5–10 мкм). Только в этом случае можно достичь высокой эффективности разделения;

– зерна сорбента должны обладать высокой механической прочностью и устойчивостью к давлению, которое возникает приработе с мелкодисперсной неподвижной фазой;

– сорбент должен обладать высокой химической устойчивостью по отношению к элюирующему раствору. Он должен сохранять стабильность в широком интервале рН; Этим требованиям удовлетворяют поверхностно-пористые(пелликулярные) ионообменники, которые состоят из твердого инертного ядра, покрытого тонким слоем ионита. На таких сорбентах быстро устанавливается равновесие, поскольку диффузия в тонкую ионообменную пленку занимает мало времени. В результате ускоряется хроматографический процесс и достигается высокая эффективность разделения. Разделение катионов происходит на катионообменниках, которые содержат фиксированные группы SO3-, PO3,COO- и катионы в качестве противоиона. Равновесие ионного обмена описывается схемой:



Ионная хроматография весьма эффективный метод определенияионов, на рис. 1 и 2 показаны примеры разделения сложных смесей катионов и анионов. Ионная хроматография с кондуктометрическим детектором лучший метод определения неорганических анионов. Разделение проводят на ионообменниках низкой емкости (менее 0,1мМ/г) чаще всего поверхностно–модифицированных. Нижняя граница определяемых концентраций составляет 1-10 нг/л. Воспроизводимость по высотам и площадям : Sr не более 0,05. Наиболее часто ионную хроматографию используют для определения:[1]

– анионов неорганических кислот (HCl, HNO3, H2S, H3BO3 и др.);

– моно- и дикарбоновых кислоты;

---

– щелочных и щелочноземельных металлов;

– анионных комплексов переходных металлов;

– оксоанионов;

– алифатических аминов;

– оксидов азота, серы и фосфора.



Рис. 1 Разделение смеси катионов на ионообменнике IonPac SCG 1: 1 –

медь; 2 – литий; 3 – натрий; 4 – аммоний; 5 – никель; 6 – калий; 7 – цинк; 8

– кобальт; 9 – марганец; 10 –магний; 11 – кальций; 12 – кадмий.

Подвижная фаза: смесь 4мМ винной и 2мМ щавелевой кислот



Рис.2 Разделение анионов на ионообменнике IonPac AG11: 1 – изопро-

пилэтилфосфонат, 2 – Quinate; 3 – фторид; 4 – ацетат, 5 – пропионат; 6-

формиат; 7 – метилсульфонат; 8 – Pyruvate; 9 – хлорат; 10 – валериановая

кислота; 11 – монохлорацетат; 12 – бромат; 13 – хлорид; 14 – нитрит; 15 –

трифторацетат; 16 – бромид; 17 – нитрат; 18 – перхлорат; 19 – селенит; 20

– карбонат; 21 – малонат; 22 – малеат; 23 – сульфат; 24 – оксалат; 25 – ке-

томалонат; 26 – SnO42-; 27 – фталат; 28 – фосфат; 29 – хромат; 30 – цитрат;

31 – трикарбалилат; 32 – изоцитрат; 33 – цис-ацинитат;34 – транс-

ацинитат; Подвижная фаза (50 –100) мМ NaOH, градиентный режим

ГЛАВА III. Оценка пригодности ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе
Валидация (оценка пригодности) методики анали­за — это экспериментально обоснованное доказательст­во ее пригодности для получения результатов, имеющих достаточную точность и прецизионность. Валидации должны подвергаться методики анализа, применя­емые при разработке и определении показателей и норм качества фармацевтической продукции. В случае исполь­зования методик, изложенных в государственных фарма­копейных статьях, не требуется оценивать их пригод­ность, если анализ проводят в строгом соответствии с текстом фармакопейной статьи. В большинстве осталь­ных случаев, особенно при изменении в составе готового лекарственного средства, изменении в синтезе лекарст­венной субстанции или изменении в самой аналитиче­ской методике, требуется оценка пригодности методики анализа.[2]
3.1. Тестирование аналитических методик, как единой аналитической системы

---

Единая аналитическая система предполагает, что оборудова­ние, электроника, аналитические операции и анализируемые образцы составляют единую систему, которую можно иссле­довать как целое. В общем случае тес­тирование аналитической методики как единой аналити­ческой системы дает возможность определять следующие валидационные характеристики: специфичность (Specificity), прецизион­ность (Precision), линейность (Linearity), точность (Accu­racy), диапазон применения (область действия, Range), предел обнаружения (Detection Limit), предел количест­венного определения (Quantitation Limit), стабильность растворов (Solutions Stability)³. В зависимости от типа методики могут требоваться не все, а лишь некоторые из валидационных характеристик.

Специфичность методики-Для подтверждения специфичности вышеупомянутых методик обычно требуется показать, что пики определяе­мых веществ хорошо разделены между собой и хорошо отделены от пиков основных примесей, системных пиков (из растворителя образца) и пиков плацебо. С этой целью специфичность подтверждается набором хроматограмм, как минимум: а)испытуемого раствора, б)раствора суб­станции определяемого вещества, в) растворителя образ­ца (blank), г)плацебо — для лекарственных форм, д)рас­твора для определения пригодности хроматографической системы. В качестве критерия полноты разделения пиков обычно используют коэффициент разделения пиков R_s. Специфичность рекомендуется также подтвердить ре­зультатами исследования "чистоты " пика определяемого вещества. Для этой цели наиболее часто использу­ют диодно-матричный детектор, с помощью которого по специальной программе проверяется спектральная одно­родность пика определяемого вещества. Принцип оценки "чистоты пика" заключается в следующем. Хроматограмму снима­ют одновременно при многих длинах волн (их количест­во — п). В каждой точке пика получают спектр, который математически характеризуется вектором, координаты которого в и-мерном пространстве представляют собой величины абсорбции (AU) при заданных (и) длинах волн (длина вектора пропорциональна концентрации вещества в анализируемом растворе). Различие между спектрами оценивают по величине угла между векторами спектров, называемого углом спектрального контраста G (Spectral Contrast angle). Если 9 равен нулю, то это означает, что спектры подобны (однородны), то есть величина абсорб­ции одного из спектров при любой длине волны

---

X может быть получена путем умножения на постоянный множи­тель величины абсорбции другого спектра при той же X. Для оценки спектральной однородности хроматографического пика в каждой из точек пика определяют угол спектрального контраста между вектором спектра в этой точке и вектором спектра в вершине пика 9, и находят максимальное значение Q_p

Специфичность методик определения содержания примесей-Для подтверждения специфичности методик опреде­ления примесей в субстанциях требуется показать, что 1) методика дает возможность обнаруживать пики основ­ных продуктов деструкции лекарственного вещества, 2) пики примесей достаточно хорошо разделены между со­бой и отделены от пика лекарственного вещества и сис­темных пиков (из растворителя образца).

Для подтверждения специфичности методик опреде­ления примесей в лекарственных формах требуется пока­зать, что 1) методика дает возможность обнаруживать пики основных примесей, содержание которых в лекар­ственной субстанции нормируется, 2) пики основных примесей достаточно хорошо разделены между собой и отделены от пика лекарственного вещества и системных пиков (из растворителя образца).

Если же основные примеси неизвестны или отсутствуют тоВ этом случае целесообразно использовать специаль­ные эксперименты по химической модификации структу­ры лекарственного вещества, в ходе которых раствор лекарственного вещества (и/или само вещество) подвергают воздействиям, способствую­щим его частичной деструкции. При этом образуются примеси родственных соединений. Степень разложения вещества можно легко оценить по уменьшению площади основного пика на хроматограмме раствора, подвергну­того воздействию по сравнению с аналогичным пиком на хроматограмме исходного раствора. По разделению пи­ков примесей между собой и с пиком лекарственного ве­щества и по чистоте пика лекарственного вещества дела­ют вывод о специфичности тестируемой методики.[2]

3.2.Диапозон определения методики

Диапазон применения методики — это интервал меж­ду наименьшей и наибольшей концентрациями (количе­ствами) определяемого вещества, включая эти концент­рации (количества), в котором:

1) соблюдается линей­ность

2) воспроизводимость не выходит за пределы до­пустимых (заданных) значений

3) методика является достаточно точной.

1. 
   на практике достаточно доказать, что диапазон при­менения методики охватывает "с запасом" нормируемые границы содержания определяемых веществ, указанные в фармакопейных статьях. Для количественного определения основных ве­ществ в субстанциях и лекарственных формах: от 80 до 120% от номинального содержания (т.е. концентрация испытуемых растворов должна охватывать диапазон не менее 80- 120% относительно концентрации раствора стандартного образца, используемого в тестируемой ме­тодике).
   

---

1. 
   Для однородности дозирования: от 70 до 130 % от номинального содержания, если для испытания не требу­ется более широкий интервал (например, для аэрозолей).
   

2. 
   Для испытаний на растворение: ± 20 % (абсолют­ных) от нормируемой величины высвобождения. Напри­мер, если при контроле высвобождения пролонгирован­ных лекарственных средств нормируемая величина вы­свобождения составляет от 20 % за первый час и до 90 % за 24 ч, то диапазон применения должен быть от 0 до ПО % от номинального содержания.[2]
   

3.3. Предел обнаружения

Предел обнаружения (LOD) определяют как наимень­шую концентрацию анализируемого вещества в образце, которую можно детектировать (обнаружить отклик) при заданных условиях теста . Для ВЭЖХ методик анализа субстанций и лекарственных форм предел обна­ружения требуется находить для предельных тестов определения примесей. Очевидно, что предел обнаруже­ния может зависеть от детекторов и насосов хроматогра­фов, поэтому рекомендуется его оценить на различных приборах, включая те, которые могут быть у потребителя методики. Независимо от метода оценки предела обнару­жения необходимо хроматограммой визуально подтвер­дить, что при концентрации, соответствующей пределу обнаружения определяемого вещества, действительно имеется его пик, явно превышающий шум базовой ли­нии. В соответствии с Американской фармакопеей мож­но утверждать, что для методик, используемых в фарма­ции, в подавляющем большинстве случаев нет необходи­мости определять фактический предел обнаружения определяемых веществ (исключение — методики конт­роля полноты очистки технологического оборудования). Достаточно показать, что примесь надежно детектирует­ся на нормируемом уровне.
3.4. Предел количественного определения

Предел количественного определения (LOQ) — наи­меньшая концентрация аналита, которая может быть определена с приемлемой прецизионностью (воспроиз­водимостью) и точностью при регламентированных условиях метода.ICH и USP рекомендует несколько способов оценки LOQ для методик определе­ния содержания примесей:[2]

Оценка предела количественного определения LOQ по соотношению "Сигнал/Шум" S/N' = 10.

Это наиболее распространенный способ. Однако, по­скольку в нем используются высоты откликов (а не их площади), он более подходит для методик ВЭЖХ, в кото­рых в качестве отклика применяются высоты пиков. Од­нако при этом не учитываются требования к воспроизво­димости методики ВЭЖХ.

---

Смотрите также файлы

• международные стандарты учета и отчетности.docx

• Оренбургский государственный университет (Кумертауский филиал огу).docx

• Тренировочный вариант 1 (почти все задания взяты из реальных кимов егэ 2022) Часть 1.docx

• 1. Закончите определение.docx

• Первая мировая война 19141918.docx