ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 10.02.2025

Просмотров: 1456

Скачиваний: 3

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

СОДЕРЖАНИЕ

2 Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ…...… 5

6.1 Количественное определение общего азота по методу Къельдаля.………..29

6.2 Определение различных форм азота в молоке и сыре………………………34

6.3 Определение белка в молоке по Лоури……………………………………….38

1 Основные требования техники безопасности при работе в лабораториях и оказание первой помощи при несчастных случаях

2 Общие указания к методике выполнения и защиты лабораторных работ

3 Аминокислоты, пептиды и белки

3.1 Протеиногенные аминокислоты

3.2 Классификация аминокислот

Цвиттер-ион

3.3 Биологическое значение аминокислот

4 Цветные реакции на белки

4.1 Биуретовая реакция

4.2 Нингидриновая реакция

Соон о 

О о

4.3 Ксантопротеиновая реакция

4.4 Реакция Адамкевича

4.5 Реакция Фоля

Соон соон

Контрольные вопросы

5 Физико-химические свойства белков

5.1 Определение изоэлектрической точки белков

5.2 Высаливание белков сульфатом аммония

5.3 Необратимое осаждение белков

5.3.1 Осаждение белков органическими веществами

3.3.2 Денатурация белков при нагревании

5.3.3 Осаждение белков концентрированными минеральными

5.3.4 Осаждение белков органическими кислотами

5.3.5 Осаждение белков солями тяжелых металлов

Контрольные вопросы

5.4 Разделение и очистка белков методом диализа

Контрольные вопросы

6 Методы определения азота в биологических объектах

6.1 Количественное определение общего азота по методу Къельдаля

6.2 Определение различных форм азота в молоке и сыре

Азотистые соединения сыра

Нерастворимые в воде азотистые Растворимые в воде азотистые

6.2.1 Метод определения общего количества азота в сыре

6.2.2 Метод определения общего количества растворимого азота

6.2.3 Метод определения азотосодержащих небелковых соединений

6.2.4 Метод определения аминного азота (пептиды, аминокислоты, амиды, аммиак)

6.3 Определение белка в молоке по Лоури

20 40 60 80 100 120 140 С10-6, г/мл

0,002054

Контрольные вопросы

7 Определение влажности весовым методом

7.1 Метод высушивания до постоянной массы

7.2 Определение влажности ускоренным методом высушивания

7.3 Определение влажности экспрессным методом высушивания

Контрольные вопросы

8 Список используемых источников

Приложение а

Значение рК для ионизируемых групп в аминокислотах

Приложение б

Методики приготовления реактивов

 - положением аминогруппы, например:

 

2 -CН2 –СООН CН2 -CН2 -CН2–СООН

 

2 2

- аминопропионовая кислота - аминомасляная кислота

(- аланин)

Таблица 1Аминокислоты, постоянно встречающиеся в составе белков

Аминокислота

(эмпирическое и рациональ-ное название)

Формула

2

R-СН-СООН

Сокращенное название

рус/лат

1

Глицин

- аминоуксусная кислота

2

Н -СН-СООН

Гли/Gly

2

Аланин

-аминопропионовая кислота

2

Н3С- СН-СООН

Ала/Аla

3

Валин

-аминоизовалериановая кислота

2

Н3С-СН- СН-СООН

СН3

Вал/Val

4

Лейцин

-аминоизокапроновая кис-лота

2

Н3С-СН-СН2-СН-СООН

СН3

Лей/Leu

5

Изолейцин

(-амино--этил--метил-

пропионовая кислота)

2

Н3С-СН2-СН -СН-СООН

СН3

Иле/Ile

6

Серин

(-амино--оксипропионо-вая кислота)

2

НО-СН2 -СН-СООН

Сер/Ser

7

Треонин

(-амино--оксимасляная кислота

2

Н3С-СН-СН-СООН

ОН

Тре/Thr

8

Цистеин

(-амино--меркаптопропи-оновая кислота)

2

НS-CН2 -СН-СООН

Цис/Cys

9

Метионин

(-амино--метилтиомасля-ная кислота

2

Н3С-S-СН2-СН2 -СН-СООН

Мет/Met

10

Лизин

(--диаминокапроновая кислота)

2

Н2N- СН2 -СН2-СН2-СН2 -СН-СООН

Лиз/Lys

Продолжение таблицы 1

11

Аргинин

(-амино-блуанидил-п-вале-риановая кислота)

NН NН2

 

Н2N-C-NН-СН2-СН2 -СН-СООН

Арг/Arg

12

Гистидин

(-амино--имидазолпро-пионовая кислота)

-СН2 -СН-СООН

N N-Н NН2

Гис/His

13

Аспарагиновая кислота, аспартат (-аминоянтарная кислота)

2

НООС-СН2 -СН-СООН

Асп/Asp

14

Глутаминовая кислота, глутамат (-аминоглутаровая кислота

2

НООС-СН2 -СН2-СН-СООН

Глу/Glu

15

Фенилаланин

(-амино--фенил-пропи-оновая кислота)

2

-СН2-СН-СООН

Фен/Phe

16

Тирозин

(-амино--(п-гидроксифенил)пропионовая кислота)

2

НО- -СН2-СН-СООН

Тир/Tyr

17

Триптофан

(-амино--индолилпро- пионовая кислота)

СН2-СН-СООН

2

N

Н

Трп/Trp

18

Пролин

(пирролидин--карбоновая кислота)

СООН

NH

Про/Pro

19

Аспарагин

О NН2

 

2-С-СН2-СН-СООН

Асн/Asn

20

Глутамин

О NН2

 

2-С-СН2-СН2-СН-СООН

Глн/Gln


В молекуле всех природных аминокислот (за исключением глицина), в - положении, все четыре валентные связи заняты различными заместителями, такой атом углерода является асимметрическим, и получил название хирального атома. В следствии этого растворы аминокислот обладают оптической активностью – вращают плоскость плоскополяризованного света. Причем при прохождении через них поляризованного луча происходит вращение плоскости поляризации либо в право (+), либо влево (-). По расположению атомов и атомных группировок в пространстве относительно асимметрического атома различают L –и D- изомеры аминокислот. Знак и величина оптического вращения зависит от природы боковой цепи аминокислот (R – группы).

В составе белков обнаруживаются только L- изомеры аминокислот. D- формы аминокислот в природе встречаются редко.

Кроме указанных выше 20 аминокислот в составе некоторых белков обнаружены, так называемые, модифицированные аминокислоты, например цистин:

СН2-СН-СООН

 

S NН2 -часто встречается в белке (клейковине) злаков

S – СН-СООН

2

ОН СН2-СН-(СН2)2-СН-СООН

  •   

- СООН NН2 ОН NН2

Оксиприлон Оксилизин

Эти две аминокислоты содержатся в белке соединительной ткани – коллагене.

НООС-СН-СН2-СН-СООН - входит в состав протромбина (белок сверты-

  вания крови

НООС NН2

- карбоксиглутаминовая кислота

СН2-СН-СООН - входит в состав фермента – глутатион-

  пероксидаза, в котором S (сера) заме-

НSе NН2 нена Sе (селеном)

Селеноцистеин

Эти аминокислоты образуются после завершения синтеза белка в рибосоме клеток путем посттрансляционной химической модификации.



3.2 Классификация аминокислот

В зависимости от строения и свойств радикала аминокислот их можно классифицировать следующим образом:

1) По строению радикалов

2) По полярности радикалов

Таблица 2- Классификация аминокислот по строению радикалов

Ациклические

Циклические

Моноаминомонокарбоновые

Моноаминодикарбоновые

Диаминомонокарбоновые

Гомоциклические

Гетероциклические

Глицин (Гли)

Аспарагиновая кислота (Асп)

Лизин (Лиз)

Фенилаланин (Фен)

Триптофан (Трп)

Аланин (Ала)

Аргинин (Арг)

Валин (Вал)

Тирозин (Тир)

Гистидин (Гис)

Лейцин (Лей)

Глутаминовая кислота (Глу)

Изолейцин (Иле)

Пролин (Про)

Серин (Сер)

Цистеин (Цис)

Глутамин (Глн)

Метионин (Мет)

Аспарагин (Асн)

Треонин (Тре)


Присутствие в структуре аминокислот ионогенных групп, карбоксильной и аминной, определяет их кислотно-основные свойства. В нейтральных растворах и кристаллах аминокислоты существуют в форме биполярных ионов – цвиттер – ионов:

R- СН – СОО

3+

В зависимости от рН среды аминокислоты могут быть в форме анионов, катионов, электронейтральных биполярных ионов или в виде смеси этих форм с доминированием одной из них.

В сильнокислых растворах аминокислоты присутствуют в виде положительных ионов, а в щелочных – в виде отрицательных ионов, т.е аминокислоты – это амфотерные соединения:

3+2

 

R-С-СОО + ОН  R – C - СОО + Н2О

 

Н Н

3+3+

 

R-С-СОО + Н+  R – C - СООН

 

Н Н

Помимо вклада  - амино и - карбоксильной групп в общий заряд молекулы аминокислоты может вносить еще и третья ионогенная группа, присутствующая в радикале некоторых аминокислот.

Таблица 3 - Классификация аминокислот по полярности радикалов

Полярные гидрофильные

Неполярные гидрофобные

Заряженные

Незаряженные

Асп

Гли

Ала

Глу

Сер

Вал

Лиз

Асн

Мет

Арг

Глн

Лей

Гис

Иле

Цис

Фен

Тир

Три

Про