Файл: MУ_белки_прил.doc

 казеина	20	40	60	80	100	120	140
Кол-во 0,1%-ного раствора казеина, мл	0,2	0,4	0,6	0,8	1,0	1,2	1,4
Кол-во Н₂О, мл	1,8	1,6	1,4	1,2	1,0	0,8	0,6
Концентрация казеина, г/мл	2010^-6	4010^-6	6010^-6	8010^-6	10010^-6	12010^-6	14010^-6
Оптическая плотность D₁
D₂
D_ср

Материалы и реактивы: молоко; 0,1% раствор белка казеина по Гаммарстену на фосфатном буфере (см. приложение Б п.10); реактив А (см. приложение Б п.11); реактив В (см. приложение Б п.12); реактив С (см. приложение Б п.13); реактив Фолина ( (см. приложение Б п.14).

Оборудование: пробирки; мерные колбы на 1 л, 100 мл; пипетки на 1 и 2 мл с ценой деления 0,05 мл; ФЭК-56М.

Контрольные вопросы

1. Химизм метода Къельдаля.

2. Коэффициенты пересчета азота на белок.

3. Методика работы на аппарате Сереньева.

4. Схема определения азотосодержащих соединений в сыре.

5. Принцип метода определения белка по методу Лоури.

6. Методика построения калибровочной кривой.

7 Определение влажности весовым методом

Принцип метода основан на определении массовой доли воды (в %) в анализируемом материале по разнице массы навески до и после высушивания Высушивание проводят до полного удаления влаги, а точнее, влаги и летучих веществ при 100–105 ⁰С до тех пор, пока два последующих взвешивания навески с записью результата до четвертого десятичного знака не покажут практически одинаковую массу. Первое взвешивание проводят обычно через 2 часа сушки, последующие через каждый час. За окончательный результат принимают тот, который отличается от предыдущего не более чем на 0,0004 г.

7.1 Метод высушивания до постоянной массы

Данный метод является более точным по результатам, так как полно удаляется влага. Однако метод длителен и трудоемок.

Ход работы. Пустые бюксы, предварительно прокаленные и охлажденные в эксикаторе, взвешивают с точностью до 0,0001г. Берут в них навески массой около 5 г и взвешивают также с точностью до 0,0001г. В случае малого содержания анализируемого материала берут меньшую массу навесок. Перед взвешиванием при необходимости материал предварительно размельчают, от этого зависит время высушивания. Например, семена злаковых размалывают на лабораторной мельнице.

Бюксы с навесками при открытых крышках помещают в сушильный шкаф при температуре 105 ⁰С. После 2 часов высушивания бюксы закрывают крышками, охлаждают в эксикаторе 10–15 мин. и производят первое взвешивание (при закрытой бюксе). Бюксы с открытыми крышками вновь помещают в сушильный шкаф на 1 час. После охлаждения взвешивают и при необходимости вновь помещают в сушильный шкаф. Операции повторяют до достижения постоянной массы бюксы с навеской.

Расчет влаги проводят по формуле:

(m₁– m₂)  100

W= , (7)

где W – влажность материала, %;

g - навеска исследуемого материала, взятого на анализ, г;

m₁ – масса пустой бюксы с навеской до высушивания, г;

m₂ – масса пустой бюксы с навеской после высушивания, г.

7.2 Определение влажности ускоренным методом высушивания

Ускоренным методом определяют влажность зерна, продуктов его переработки (муки, отрубей, крупы, хлеба) и т.д. Этот метод сушки является более условным, так как при более высокой температуре, вероятно, протекают процессы распада веществ.

Ход работы. В две заранее высушенные и взвешенные на технических весах бюксы, поставленные на снятые с них крышки, отвешивают по 5 г материала с точностью 0,01 г и помещают в сушильный шкаф марки СЭШ-I или СЭШ – 3М. Навески высушивают при температуре 130 ⁰С в течение 40 минут с момента установления температуры 130 ⁰С. Понижение и повышение температуры до 130 ⁰С после загрузки шкафа не должно быть более 15 мин. Высушивание проводят при полной загрузки сушильного шкафа.

После высушивания бюксы вынимают щипцами, закрывают крышками и помещают в эксикатор для охлаждения не менее, чем на 20 мин. и не более, чем на 2 часа. После охлаждения бюксы взвешивают. Допустимые расхождения между результатами параллельных определений не должно быть более 0,2 %, а при арбитражных – не более 0,5 %.

Расчет влажности данным методом ведут по формуле (7).

7.3 Определение влажности экспрессным методом высушивания

Для ускорения высушивания используют более высокую температуру в специально сконструированных для этих целей шкафах и приборах. Так, для определения влажности зерна основным стандартным методом высушивания используют электрические сушильные шкафы СЭШ-1 и СЭШ-3М. Расхождения между двумя параллельными определениями допускаются не более 0,25%. При контрольных и арбитражных определениях отклонения допускаются не более 0,5%.

Быстрое удаление влаги из высушиваемого материала осуществляется на приборе ВНИИХП-В4 (конструкция К.Н. Чижовой). Обезвоживание происходит за счет прогревания объекта тепловыми лучами, исходящими от двух плит из материала с высокой теплопроводностью. Плиты соединены шарнирами, нагреваются они электрическими элементами.

Ход работы. Пакетики из бумаги (пропускающей влагу) размером 16х16 высушивают при температуре 160 ⁰С в течение 3 мин. и охлаждают в эксикаторе. В просушенный и взвешенный на технических весах пакетик помещают навеску материала около 4 г из материала с низкой влажностью и около 5 г – из материала с влажностью выше 20%, распределяя ее равномерно по всему пакетику и высушивают: например, хлеб – 3 мин., муку – 5 мин., клейковину – 10 минут. Пакеты с высушенным материалом охлаждают 2 мин и взвешивают. Полученные данные используют для расчета влажности по формуле (5), используя вместо массы бюкса массу пакетика. Расхождение между двумя параллельными определениями не должны превышать 0,5%.

Оборудование: весы технические и аналитические; бюксы; пакетики из бумаги; сушильный электрический шкаф; эксикатор; шпатели; совочки; пинцет; фарфоровые чашки.

Контрольные вопросы

1. Какие вы знаете методы определения влажности? Охарактеризовать их.

8 Список используемых источников

Биохимия: Практикум.–К.:Выща шк.Изд–во при Киев. ун–те,1988. – 128с.
Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача.–Екатеринбург: Издательско–полиграфическое предприятие "Уральский рабочий",1994.–384с.
Кретович В.Л.Биохимия растений.–М.:Высш.шк.,1986.–503с.
Лебедева П.Т.,Усович А.Т. Методы исследования кормов, органов и тканей животных.– М.: Россельхозиздат,1965.–711 с.
Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник.–М.: Медицина,1987.– 368 с.
Марри Р.,Греннер Д.,Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека; В 2–х т.–М.: Мир,1993.
Мелентьева Г.А.Фармацевтическая химия.т.II.–М.:Медицина,1976.–827 с.
Методы анализа пищевых, сельскохозяйственных продуктов и медицинских препаратов.– М.:Пищевая промышленность,1974.–743 с.
Петров К.П. Практикум по биохимии пищевого сырья растительного происхождения.– М.: Пищевая промышленность,1965.–300 с.
Плешков Б.П. Практикум по биохимии растений.–М.:Агропромиздат,1985.–255 с.
Практикум по биохимии сельскохозяйственных животных.– М: Высш. школа,1980.–303 с.
Пустовалова Л.М. Практикум по биохимии – Ростов на Дону:Изд–во" Феникс", 1999.–544 с.
Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. М.: Медицина,1976.–294 с.
Справочник биохимика.– М.: Мир,1991.–554 с.
Филлипович Ю.Б., Основы биохимии: Учеб. для хим. и биолог. спец. пед. ун–тов и ин–тов.– 4–е изд., перераб. и доп.– М.: изд–во "Агар", 1999.–512с.
Шапиро Д.К. Практикум по биологической химии.– Мн.: Вышэйш. школа,1976.–288 с