ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 27.11.2019
Просмотров: 3475
Скачиваний: 4
МОДУЛЬ 1. ЦИТОЛОГИЯ
КАК НАУКА
Лабораторная работа 1
Цитология с основами гистологии. Лаб. практикум
11
Н
Н
а
а
с
с
т
т
р
р
о
о
й
й
к
к
а
а
о
о
с
с
в
в
е
е
щ
щ
е
е
н
н
и
и
я
я
м
м
и
и
к
к
р
р
о
о
с
с
к
к
о
о
п
п
а
а
с
с
в
в
ы
ы
н
н
е
е
с
с
е
е
н
н
н
н
ы
ы
м
м
о
о
с
с
в
в
е
е
т
т
и
и
т
т
е
е
л
л
е
е
м
м
В соответствии с принципом Келера при установке освещения для
микроскопа типа МБИ
-
3, а также микроскопов серии Микмед с вынесенным
осветителем необходимо руководствоваться следующими правилами
:
1. Устанавливают осветитель ОИ
-
19 (или ОИ
-
9м) перед микроскопом
с помощью соединительной планки, что обеспечивает нормальное расстоя-
ние микроскопа от осветителя. Включают его через трансформатор в сеть и,
поворачивая
корпус, направляют световой поток на плоское
зеркало микро-
скопа.
2. Поднимают конденсор микроскопа в верхнее положение и полно-
стью закрывают его диафрагму.
3. Уменьшают диаметр отверстия ирисовой диафрагмы осветителя до
1
–
2 мм.
4. Перемещая патрон лампочки осветителя вдоль оси и
одновременно
поворачивая зеркало микроскопа и корпус осветителя, добиваются получе-
ния изображения нити лампочки на закрытой диафрагме конденсора. При
этом центр изображения нити лампочки должен находиться в центральной
части ирисовой диафрагмы.
5. Открывают отверстие диафрагмы конденсора и осветителя.
6. Уменьшают яркость свечения нити лампочки при помощи реостата.
7. Помещают исследуемый препарат на предметный столик микроско-
па, ставят необходимый объектив в рабочее положение и, глядя в окуляры
бинокулярной насадки микроскопа, перемещением тубуса фокусируют опти-
ку микроскопа на объект.
8. Почти полностью закрывают диафрагму осветителя и перемещением
конденсора добиваются резкого изображения диафрагмы осветителя в поле
зрения микроскопа.
9. Поворотом зеркала центрируют изображение диафрагмы осветителя,
а затем открывают ее настолько, чтобы изображение диафрагмы было равно
(или немного больше) полю зрения микроскопа.
10. Вынимают один окуляр и, глядя в тубус микроскопа, уменьшают
диафрагму конденсора до едва заметного появления ее краев на фоне светло-
го кружка задней линзы объектива.
11. Помещают окуляр на место. В прорези осветителя вставляют синее
и матовое стекла. Затем, глядя в микроскоп, при помощи реостата осветителя
устанавливают необходимую освещенность препарата.
12. Исследуют препарат.
Примечания
:
1. При работе с низкоапертурными объективами малого увеличения
(10
х
и меньше) перед настройкой освещения устанавливают сменный низко-
апертурный конденсор или, если это позволяет конструкция конденсора, от-
деляют (отвинчивают) его верхнюю линзу.
МОДУЛЬ 1. ЦИТОЛОГИЯ
КАК НАУКА
Лабораторная работа 1
Цитология с основами гистологии. Лаб. практикум
12
2. Пункт 7 можно выполнить в самом начале при произвольно установ-
ленном освещении, а затем внести коррективы в соответствии с принципом
Келера.
Н
Н
а
а
с
с
т
т
р
р
о
о
й
й
к
к
а
а
о
о
с
с
в
в
е
е
щ
щ
е
е
н
н
и
и
я
я
м
м
и
и
к
к
р
р
о
о
с
с
к
к
о
о
п
п
а
а
с
с
в
в
с
с
т
т
р
р
о
о
е
е
н
н
н
н
ы
ы
м
м
в
в
о
о
с
с
н
н
о
о
в
в
а
а
н
н
и
и
е
е
о
о
с
с
в
в
е
е
т
т
и
и
т
т
е
е
л
л
е
е
м
м
Порядок настройки микроскопа со встроенным осветителем:
1. Устанавливают матовое стекло в откидную рамку конденсора.
2. Вводят в ход лучей объектив меньшего увеличения (10х и менее).
3. Вводят в ход лучей матовое стекло и откидную линзу конденсора.
4. Поднимают рукояткой кронштейн с конденсором до упора и полно-
стью раскрывают апертурную диафрагму конденсора.
5. Устанавливают патрон с лампой в шарнир до упора.
6. Устанавливают лампу таким образом, чтобы ее нить располагалась
горизонтально.
7. Подключают источник питания к сети и включают лампу.
8. Фокусируют микроскоп на резкое изображение препарата, установ-
ленного на предметном столике.
9. Перемещая патрон с лампой за рукоятку вдоль оси и разворачивая
его вместе с шарниром в горизонтальной плоскости, добиваются наиболее
яркого и равномерного освещения поля зрения микроскопа.
10. При работе с другим объективом повторяют настройку освещения.
11.ВНИМАНИЕ! При работе с объективами с увеличением более 10х
откидная линза конденсора должна быть выведена из хода лучей.
П
П
р
р
и
и
г
г
о
о
т
т
о
о
в
в
л
л
е
е
н
н
и
и
е
е
п
п
о
о
с
с
т
т
о
о
я
я
н
н
н
н
ы
ы
х
х
и
и
в
в
р
р
е
е
м
м
е
е
н
н
н
н
ы
ы
х
х
п
п
р
р
е
е
п
п
а
а
р
р
а
а
т
т
о
о
в
в
Постоянные препараты являются прекрасным демонстрационным
материалом и могут храниться долгие годы. На тонких срезах толщиной
10–
22 микрона можно наблюдать проникновение пыльцевых
трубок, подсчи-
тывать число хромосом, изучать митоз и мейоз, развитие зародыша и так далее.
Техника
приготовления окрашенных микропрепаратов включает в себя
несколько
этапов
:
1. Подготовка материала к фиксации.
2. Фиксирование материала водным или спиртовым фиксатором (24 ча-
са и до 12 часов соответственно).
3. Промывка зафиксированного материала.
4. Полное обезвоживание промытого материала.
5. Пропитывание материала растворителями парафина (хлороформом,
ксилолом или бензолом).
МОДУЛЬ 1. ЦИТОЛОГИЯ
КАК НАУКА
Лабораторная работа 1
Цитология с основами гистологии. Лаб. практикум
13
6. Пропитывание материала парафином до полного испарения хлоро-
форма (или ксилола).
7. Заливка материала в парафин (материал, залитый в парафин
,
можно
хранить очень долго).
8. Изготовление блоков из материала, пропитанного парафином.
9.Получение срезов при помощи микротома.
10. Наклейка срезов на предметные стекла.
11. Просушивание препаратов при температуре 40
–
45
о
С, стекла со сре-
зами можно хранить долго, оберегая их от пыли и высокой температуры.
12. Удаление парафина из срезов ксилолом.
13. Удаление ксилола из срезов спиртом.
14. Удаление спирта из срезов дистиллированной водой.
15. Окрашивание препаратов (иногда протравливание и окрашивание)
и дифференцировка.
16. Обезвоживание окрашенных срезов 96
%-
ным и 100
%-
ным спир-
тами.
17. Замещение спирта в срезах на ксилол (одновременно происходит
просветление срезов ксилолом).
18. Заключение срезов в канадский бальзам.
19 Просушивание и подчистка, этикетирование препаратов.
20. Изучение препаратов под микроскопом.
Также широко распространены в микроскопической
технике давленые
препараты, для изготовления которых не требуется сложной процедуры
обезвоживания, заключения в промежуточную жидкость, в парафин и полу-
чения микротомных срезов. Давленые препараты применяют при изучении
митоза, кариотипов и при работе с животными объектами.
Наиболее часто для приготовления давленых препаратов применяют
различные фиксаторы. Зафиксированный материал промывают в 70 %
-
ном
спирте. В нем можно сохранять материал в течение длительного времени, но
лучше хранить в холодильнике. При изготовлении давленых препаратов ис-
ключительное значение имеют способы мацерации тканей. Обычно для этого
используют 45 %
-
ную уксусную кислоту, 40
–
45 %-
ную пропионовую кисло-
ту, 1 н. соляную кислоту, энзимы.
Окрашивают препараты ацетокармином, реактивом Шиффа, нигрози-
ном и др.
МОДУЛЬ 1. ЦИТОЛОГИЯ
КАК НАУКА
Цитология с основами гистологии. Лаб. практикум
14
Л
Л
а
а
б
б
о
о
р
р
а
а
т
т
о
о
р
р
н
н
а
а
я
я
р
р
а
а
б
б
о
о
т
т
а
а
2
2
В
В
а
а
ж
ж
н
н
е
е
й
й
ш
ш
и
и
е
е
х
х
а
а
р
р
а
а
к
к
т
т
е
е
р
р
и
и
с
с
т
т
и
и
к
к
и
и
м
м
и
и
к
к
р
р
о
о
с
с
к
к
о
о
п
п
а
а
Микроскоп для цитологических исследований должен иметь набор из
4
–
7 высокоапертурных объективов
-
апохроматов, в том числе объективов 90х
с нумерической (числовой) апертурой
(A)
1,3
–
1,4; набор компенсационных
окуляров; апланатический конденсор прямого и косого освещения с
A
не ме-
нее 1,4; штатив; механизмы фокусировки объективов и перемещения препа-
ратов; бинокулярную насадку для наблюдения в микроскоп обоими глазами;
набор светофильтров, а также точную центрировку всех оптических и меха-
нических деталей микроскопа. Кроме того, микроскоп должен быть оснащен
осветителем, который может быть как вынесенным (ОИ
-
9м для МБР
-
3), так и
встроенным (у микроскопов МБИ
-6;
МБИ
-11;
Микмед
-1,
вариант 2). Осве-
щение устанавливают в соответствии с принципом Кёлера
,
который заключа-
ется в обеспечении условий для максимального использования апертур опти-
ческих компонентов микроскопа, т. е. в создании условий наблюдения, при
которых числовые апертуры конденсора и объектива совпадают.
Конденсор
состоит из двух
или трех
линз и обеспечивает освещение
полей на объекте при работе с объективами с увеличением от 3,5 до 100х.
Различают несколько типов конденсоров в зависимости от метода наблюде-
ния в микроскопе: конденсор светлого поля, конденсор темного поля, кон-
денсор для наблюдений по методу фазового контраста, конденсор с апертур-
ной диафрагмой для косого освещения и др. Например, конденсор ОИ
-14
кроме прямого освещения объекта обеспечивает косое, что позволяет полу-
чить более рельефное и контрастное изображение.
Зеркало микроскопа имеет две поверхности
–
плоскую и выгнутую, оно
располагается под конденсором и направляет в него свет. Из кондесора пучок
света попадает на препарат, находящийся на столике микроскопа, а затем по-
падает в окуляр.
Визуальная насадка микроскопа (тубус), как правило, бинокулярная.
Она позволяет устанавливать расстояние между осями окулярных тубусов
в соответствии с глазной базой наблюдателя в диапазоне от 54 до 72 мм
(на рис
. 2
возможность изменения этого расстояния показана стрелками).
В левом окулярном тубусе имеется диоптрийный механизм, который с по-
мощью вращения кольца
2
позволяет компенсировать ошибку наблюдателя
от плюс 5 до минус 5 дптр. Окулярные тубусы имеют наклон 45°. Увеличе-
ние бинокулярной насадки
– 1,5
х
.
В комплект микроскопа может входить монокулярная
насадка, которая
позволяет проводить исследование объектов только одним глазом. В отличие
от бинокулярной насадки она имеет увеличение, равное 1х. При использова-
нии такой насадки можно применять полярофильтры для исследования в по-
ляризованном свете. При работе с объективами, рассчитанными на длину ту-
МОДУЛЬ 1. ЦИТОЛОГИЯ
КАК НАУКА
Лабораторная работа 2
Цитология с основами гистологии. Лаб. практикум
15
буса, отличающуюся от стандартной
,
160 мм применяется вертикальная
на-
садка с прямым выдвижным тубусом. С помощью шкалы на выдвижном ту-
бусе устанавливается механическая длина тубуса, на которую рассчитан объ-
ектив.
Окуляры нередко состоят из двух линз. Они могут иметь различное
увеличение и позволяют проводить наблюдения в полях зрения разного диа-
метра (
).
Таблица 1
Характеристика некоторых окуляров
Маркировка окуляра
Увеличение
Диаметр поля зрения, мм
К5х
5
22
К7х
7
18
К10х
10
13
K
10х/18
10
18
К15х
15
11
К20х
20
9
Окуляры строят мнимое изображение и увеличивают создаваемое объ-
ективами изображение, не выявляя подробностей строения. Маркировка оку-
ляра позволяет определить его увеличение, а в некоторых случаях
–
диаметр
поля зрения.
Револьверное устройство обеспечивает установку четырех объективов.
Смена объективов производится вращением револьверного устройства за ко-
нусную поверхность до фиксированного положения.
Объективы выполняют главную функцию: в их системе линз формиру-
ется первичное изображение, которое передается в окуляры. Объективы рас-
считаны на механическую длину тубуса
160 мм, линейное поле в плоскости
изображения 18 мм и толщину покровного стекла 0,17 мм.
Большое значение имеет полное или частичное отсутствие в объективе
оптических аберраций, которые могут привести к тому, что изображение
объекта может быть искаженным вследствие его размытости, искривления,
окрашенности.
Аберрации оптики микроскопа
могут быть разного типа. Сферическая
аберрация
–
изображение точки передается в виде кружка рассеяния. Астиг-
матизм
–
изображение точки передается в виде кружка рассеяния эллипсоид-
ной формы. Кома
–
резкость изображения снижается от центра к границе по-
ля зрения. Кривизна поля зрения не позволяет одновременно видеть резко
центр и края поля зрения. Дисторсия
–
нарушения подобия между объектом и
его изображением вследствие разного линейного увеличения на краях
и в
центре поля зрения. Хроматические аберрации
–
хроматизм увеличения и
хроматизм положения. Хроматизм положения
–
изображения, созданные раз-
ными цветами, располагаются на неодинаковом расстоянии от оптической
системы. Хроматизм увеличения
–
изображения
находятся в одной плоско-
сти, но имеют неодинаковые размеры. Высококачественные объективы
-