Файл: Исследования кала при дисбактериозе и кишечных инфекциях студент 5 курса Лд5042.ppt

Острые кишечные инфекции это группа инфекционных болезней, при которых наблюдается преимущественное поражение кишечника.
Возбудителями острых кишечных инфекций являются различные виды бактерий и вирусов.
Острые кишечные инфекции нередко приводят к сильному пищевому отравлению. Основные симптомы острых кишечных инфекций - это сильный понос, боли в животе, тошнота, рвота, повышение температуры. У детей острая кишечная инфекция может проявляться сильным беспокойством, поносом, отказом от пищи.
Более 60% всех случаев кишечной инфекций встречается у детей. Каждый год от кишечных инфекций в мире умирает около 1 млн. детей (большая часть в возрасте до 2 лет). Ведущим симптомом (который ведет к тяжелым последствиям) кишечных инфекций является сильный понос (диарея). Чаще всего кишечные инфекции встречаются в теплое время года (летом).

Этиология ОКИ

Причиной развития острых кишечных инфекций могут быть бактерий (сальмонелла, шигеллы, стафилококк, холера и др.), а также вирусы (энтеровирус, ротавирус). Кишечные инфекции, передаются преимущественно, через пищу, воду, предметы обихода. Возбудители кишечных инфекций быстро развиваются в еде, в воде, на грязных руках.

Вирусные кишечные инфекции

сем Reoviridae –Реовирус, ротовирус
сем Picornaviridae –Риновирус, Энтеровирус 69-71
Норовирус (вирус Норфолк)

Норовирус

Норовирус (старое название — вирус Норфолк, по названию города в штате Огайо, где он впервые был идентифицирован) является одной из главных причин ОКИ во всем мире — как в развивающихся, так и в развитых странах, в том числе и в России. По оценкам, в США 80–90% случаев вспышек эпидемических гастроэнтеритов вызывается норовирусом

Для выявления норовируса в кале больных широко используется метод ПЦР, обладающий высокой чувствительностью. Этот метод пригоден и для диагностики спорадических случаев, и для инфекционных вспышек, а также используется как метод подтверждения
Диагностические наборы, основанные на методе ИФА, а также иммунохроматографические экспресс-тесты, хотя несколько уступают в чувствительности ПЦР-анализу, тем не менее обеспечивают быструю и надежную диагностику инфекции в эпидемическом очаге.
Набор для ИФА RIDASCREEN Norovirus (R-Biopharm) был первым в мире набором, при помощи которого определялись вирусы, принадлежащие к обеим опасным для человека геногруппам GI и GII. При специфичности близкой к 100%, чувствительность современных наборов третьего поколения составляет 80%. Это позволяет, исследуя 2–3 образца, полученных во время вспышки, определить ее норовирусную этиологию с эффективностью, практически не уступающей ПЦР.
Экспресс-тест RIDA QUICK Norovirus (R-Biopharm) – первый в мире быстрый тест, предложенный для диагностики норовирусной инфекции, — имеет сходные с ИФА показатели чувствительности и специфичности. Время, необходимое для проведения анализа, составляет 20 минут.

Альтернативой ИФА являются использование быстрых иммунохроматографических тестов. Постоянное совершенствование технологии привело к тому, что их чувствительность и специфичность близки к соответствующим показателям наборов для ИФА. При этом экспресс-тесты выполняются быстро (как правило, не более, чем за 15 минут), проведение анализа и интерпретация результата очень просты, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Очень важно, что анализ может быть проведен непосредственно в инфекционном очаге, что позволяет избежать потери времени на транспортировку образца в лабораторию.

Принцип работы иммунохроматографического экспресс-теста.

1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат; 3,4 – иммобилизованные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – подушечка для образца; 6 – подушечка для конъюгата; 7 – мембрана; 8 – подушечка для абсорбции реагентов; 9 – подложка для мембраны; 10 – тестовая полоса: положительный результат; 11 – контрольная полоса: достоверный результат теста.

Положительный результат экспресс-теста RIDA Quick Verotoxin / О157 Combi
Формат теста: вверху – тест-кассета, внизу – тест-полоска. 1 – участок внесения образца. 2 – участок расположения конъюгата. 3 – реакционная зона; слева направо – контрольная полоса (С); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии в образце веротоксина (T2); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии антигенов штамма O157 (T1). 4 – участок абсорбции реагентов (закрыт пленкой с названием теста).

Эшерихии (род Escherichia)

Прямые грамотрицательные палочки размером 0,4-0,6x2-6 мкм, подвижные за счет перитрихиально расположенных жгутиков.
Культуральные свойства. На плотных средах образуют колонии в R- и S-формах. Колонии в S-формах гладкие, блестящие, полупрозрачные. На жидких средах образуют диффузное помутнение и придонный осадок.
Биохимические свойства. Обладают выраженной биохимической активностью. Биохимическими свойствами, составляющими основу дифференциальной диагностики при бактериологическом исследовании, являются:
• продукция кислоты и газа при ферментации глюкозы;
• ферментация лактозы;
• отсутствие продукции сероводорода;
• продукция индола.

Микробиологическая диагностика осуществляется бактериологическим методом. Материалом для исследования при кишечных эшерихиозах служат испражнения, при парентеральных - материал из соответствующего инфекционного очага (моча, отделяемое раны, кровь, ликвор). Исследуемый материал (кроме крови и ликвора) засевается на дифференциальные лактозосодержащие среды, после инкубации при 37 С в течение 18 ч отбираются колонии, агглютинирующиеся поливалентной ОВ-агглютинирующей сывороткой, которые подвергаются идентификации до вида по биохимическим тестам с последующим определением их серологического варианта.

Клебсиеллы (род Klebsiella)

Морфология. Неподвижные грамотрицательные палочки размером 0,3-1,5x0,6-0,8 мкм, имеющие капсулу. Располагаются единично, парами или цепочками.
Культуральные свойства. За исключением вида K. granulomatis, который на искусственных питательных средах растет плохо, и его культивируют в желточном мешке куриного эмбриона, остальные виды клебсиелл нетребовательны к питательным средам. На жидких средах вызывают диффузное помутнение. На плотных образуют блестящие выпуклые слизистые колонии.
Биохимические свойства. Способны расщеплять лактозу, поэтому относятся к группе колиформных бактерий. Дифференциация внутри рода на виды и внутри вида. Разделение K. pneumoniae на подвиды производится на основе биохимических свойств. Для клебсиелл характерно отсутствие продукции сероводорода. Они
способны утилизировать цитрат, малонат, расщеплять мочевину. В отличие от других видов, K. oxytica продуцирует индол.

Микробиологическая диагностика. Используют бактериологический метод исследования. Материал для исследования, выбор которого зависит от локализации инфекционного процесса, засевают на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и ее идентификацией до вида и подвида. Серологическая диагностика проводится постановкой РСК с О-антигенами. Диагностику донованоза проводят бактериоскопическим методом путем обнаруже- ния телец Донована в мазках из биоптата гранулем, окрашенных по Романовскому-Гимзе.

Шигеллы (род Shigella)

Род получил название по имени К. Шига, который в 1898 г. детально изучил микроб, известный в настоящее время под названием S. dysenteriae, серовара 1.
Род Shigella включает 4 вида, которые различаются по биохимическим свойствам и антигенной структуре: S. dysenteriae - 12 сероваров; S. flexneri - 9 сероваров; S. Boydii - 18 сероваров; S. sonnei - 1 серовар.
Морфология. Шигеллы - неподвижные палочки размером 0,5- 0,7x2-3 мкм, спор и капсулу не образуют.
Культуральные свойства. Хорошо культивируются на простых питательных средах. На плотных средах образуют мелкие гладкие блестящие полупрозрачные колонии, на жидких - диффузное помутнение. Жидкой средой обогащения является селенито- вый бульон. У S. sonnei отмечена при росте на плотных средах S-, R-диссоциация.
Биохимические свойства. Шигеллы обладают слабой биохимической активностью по сравнению с родами Escherihia и Salmonella.
Основные биохимические признаки, необходимые для идентификации при выделении чистой культуры:
• не образуют газ при ферментации глюкозы;
• не расщепляют лактозу;
• не продуцируют сероводород.
S. dysenteriae не расщепляет маннитол. S. sonnei способен ферментировать лактозу медленно, в течение 72 ч.

Микробиологическая диагностика. Основным методом является бактериологический, материалом для исследования служат испражнения.
Для посева отбирают гнойно-слизисто-кровяные образования из средней порции кала, которые непосредственно высевают на ряд разных лактозосодержащих и других дифференциальноэлективных плотных питательных сред. В случае выявления бак- терионосителей посев испражнений обязательно проводится в селенитовый бульон с последующим выделением возбудителя на плотных дифференциально-элективных питательных средах.
Среди выросших на этих средах колоний отбирают лактозоотрицательные, которые идентифицируют до вида и серовара, выделенные культуры S. flexneri - до подсероваров, а S. sonnei - до хемоваров. В качестве вспомогательного используют серологический метод с постановкой РНГА.