Файл: Методическое обеспечение лабораторной диагностики вирусного гепатита В.rtf
Добавлен: 29.10.2023
Просмотров: 282
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
СОДЕРЖАНИЕ
.1 Вирусные гепатиты и их возбудители
Вирусные гепатиты А и Е не имеют хронических форм болезни или хронического вирусоносительства.
.2 Функции печени и их недостаточность при гепатитах
1.2.1 Белково-синтетическая функция печени
.2.2 Роль печени в пигментном обмене
1.2.3 Параметры функционального состояния печени
Согласно действующей классификации ферменты делят на шесть главных классов:
2. Классификация вирусных гепатитов
Как полагают, этим списком далеко еще не исчерпываются все возбудители ВГ.
ВГС передается через контакт с кровью больного ВГС человека.
пользование одними иглами и шприцами с больным ВГС (при внутривенном введении наркотиков);
повторное или многократное использование игл в медицинской практике;
серьезные хирургические операции;
перинатальный (или вертикальный) путь передачи ВГС от инфицированной матери к ребенку;
переливание крови или ее продуктов;
заражение при нанесении татуировок, прокалывании тела (пирсинг);
Однако иммунизация только групп риска (медицинские работники, имеющие «кровяные контакты», новорождённые от носителей и больных, персонал и дети домов ребенка) не обеспечивает эффективного снижения заболеваемости. Активно повлиять на эпидемический процесс и добиться существенного снижения заболеваемости гепатитом В возможно лишь перейдя от вакцинации только лиц, составляющих «группы риска» к иммунизации подростков и новорождённых детей.
.1 Эпидемиологический надзор
Большое значение имеют определение доли вирусного гепатита В среди всех острых гепатитов, регистрация и учёт хронических форм болезни. Анализ заболеваемости гепатитом проводят с учётом активности тех или иных путей заражения, определяющих социально-возрастную структуру заболевших. Серологический мониторинг включает в себя сбор информации о скрыто протекающем эпидемическом процессе вирусного гепатита В на популяционном, коллективном и индивидуальном уровнях.
Осуществляют оценку эпидемиологической эффективности вакцинации и других мер профилактики вирусного гепатита В среди различных групп населения, их социально-экономической значимости.
4.2 Мероприятия в эпидемическом очаге
Заболевшие острой формой вирусного гепатита, а также больные хронической формой в период обострения подлежат обязательной госпитализации в инфекционную больницу или отделение, а с подозрением на это заболевание - в диагностическое отделение или боксы. Выписку реконвалесцентов и допуск их к работе (в том числе работников пищевых предприятий и лиц, к ним приравненных) или в детские учреждения осуществляют по клиническим показаниям. Переболевшие вирусным гепатитом В подлежат диспансерному наблюдению сроком не менее 12 мес. Упомянутых лиц снимают с учёта при отсутствии хронического гепатита и 2-кратном отрицательном результате исследования на наличие HBsAg, проведённого с интервалом в 10 дней. Носителей HBsAg наблюдают в течение 2 лет. Обследование на наличие антигенов проводят сразу по выявлении, через 3 мес, а затем 2 раза в год до снятия с учёта. Если антигены обнаруживают более 3 мес, то таких носителей расценивают как хронических; они подлежат наблюдению как больные хроническим гепатитом. В отношении других лиц в очаге вирусного гепатита В никаких ограничительных мер не проводят.
Выделения больного и носителя, посуда, постельное и нательное бельё, полотенца и т.д. подлежат обработке дезинфицирующими средствами. Экстренная профилактика проводится путём введения специфического иммуноглобулина или вакцины (в соответствии с рекомендуемой схемой введения) при экстренных эпидемиологических ситуациях, т.е. при реальной угрозе заражения, например при случайном уколе или переливании инфицированной вирусом вирусного гепатита В крови.
5.
Методы лабораторной диагностики вирусного гепатита В
Печень является своеобразной биохимической лабораторией организма. Когда функция печени нарушается, например, вследствие вирусного гепатита, это естественным образом отражается на активности ряда ферментов и концентрации многих веществ в крови больного.
Наиболее важным признаком гепатита является повышение активности ферментов (АлАТ и АсАТ, соответственно). Эти ферменты попадают в кровь в результате разрушения печеночной клетки и поэтому косвенно отражают выраженность этого процесса. По степени повышения АлАТ и АсАТ судят об активности гепатита. Если АлАТ повышено не более чем в 3 раза, говорят о мягком гепатите, в 3-10 раз - гепатите умеренной активности, более чем в 10 раз - высокой активности заболевания. Т.к. АсАТ может изменяться и при других заболеваниях внутренних органов, изменение АлАТ считают более специфичным для болезней печени.
Повышение в крови концентрации билирубина является следствием избыточного его образования или замедленного выведения из организма. При вирусных гепатитах нарушается выведение билирубина. Если концентрация билирубина в крови больше 30-35 мкмоль/л, появляется желтушное окрашивание слизистой полости рта, склер, а потом и кожи. У большинства больных гепатитом уровень билирубина не повышается.
Некоторые заболевания печени, иногда и вирусные гепатиты, протекают с синдромом холестаза (нарушением отделения желчи или некоторых ее компонентов). В этом случае у больных может повышаться активность таких ферментов как щелочная фосфатаза и гамма-глютамилтрансфераза (ГГТ), а также уровень холестерина и желчных кислот. Нужно иметь ввиду, что болезни печени не являются единственной причиной изменения активности и концентрации упомянутых ферментов или веществ.
Синтетическую функцию печени отражает концентрация белка в крови, в первую очередь - альбумина. При нарушении синтетической функции печени уменьшается концентрация в крови холестерина и мочевины.
Нужно сказать, что все перечисленные симптомы поражения печени не специфичны для вирусного гепатита, но могут встречаться и при других заболеваниях печени (алкогольном, лекарственном гепатите и др.).
Доказать, что выявленные при биохимическом исследовании крови изменения являются следствием вирусного гепатита можно лишь обнаружив в крови маркеры вирусных гепатитов.
.1 Метод определения билирубина в сыворотке крови по диазореакции в присутствии акселератора (метод Йендрашика, Клеггорна и Гофа)
Принцип метода. При взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая дает со связанным (прямым) билирубином сыворотки крови розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности окрашивания определяется концентрация билирубина, дающего прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива несвязанный (непрямой) билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние и со смесью диазореактивов дает розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности окрашивания определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между общим и связанным билирубином определяют концентрацию несвязанного билирубина.
Реактивы
1. кофеиновый реактив (концентрат):
- бензонат натрия
ацетат натрия
кофеин
2. 0,9% раствор хлористого натрия.
3. Диазосмесь:
а) Диазореактив Ι - сульфониловая кислота
б) Диазореактив ІІ - раствор нитрита натрия
Оборудование
1. Фотоколориметр КФК-3.
2. Колба мерная емкостью 200 мл, пробирки емкостью 10 мл (ГОСТ 1770-74).
. Пипетки емкостью 1 и 5 мл (ГОСТ 29227-91).
Приготовление рабочих растворов
1. Рабочий кофеиновый реактив. Содержание флакона с кофеиновым реактивом (концентратом) количественно переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и, после растворения осадка, доводят дистиллированной водой до метки.
2. Диазосмесь. Перед работой смешивают необходимое количество раствора сульфаниловой кислоты и раствора нитрита натрия в отношении 100:3.
Ход определения
В 3 пробирки (для общего билирубина, прямого и для контроля) вводят реактивы согласно таблице:
| Ингредиенты в мл | Опытная проба, мл | Холостая проба | |
| | Общий билирубин | Прямой билирубин | |
| Сыворотка | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
| Кофеиновый реактив | 1,75 | - | 1,75 |
| 0,9% р-р NaCl | 0,25 | 2,0 | 0,5 |
| Диазосмесь | 0,25 | 0,25 | - |
Для определения
прямого билирубина колориметрирование следует проводить через 5-10 минут после добавления диазосмеси (при температуре +18°С до +25°С), т.к. при длительном стоянии в реакцию вступает непрямой билирубин.
Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять на 20 минут (при температуре +18°С до +25°С), после чего колориметрируют. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется. Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 530 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5 мм против воды. Из показателей, полученных при колориметрировании общего и прямого билирубина, вычитают показатель прямого билирубина.
Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и прямого билирубина. Для определения уровня непрямого билирубина вычитают из показателя общего его содержания показатель прямого билирубина.
Калибровочный график строится по готовому набору реактивов билирубин-эталон лиофизилированный, выпускаемый фирмой «Лахема» (Чехия).
Метод: Иендрашика ф. Филисит
КФК-3 №9001438
кювета 5 мм, λ=530 нм
Стандарт: Билирубин - стандарт ф. Lachema 391,51 мкмоль/л
Годен до 31.01.2012 г.
Масштаб 1 мкмоль/л = 1 мм
| № | Е | Еср | С, мккат/л |
| 1 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 0,049 0,049 0,048 | 0,049 | 19,6 |
| 3 | 0,123 0,122 0,120 | 0,122 | 48,9 |
| 4 | 0,234 0,246 0,234 | 0,238 | 97,9 |
| 5 | 0,367 0,347 0,365 | 0,359 | 146,8 |