Файл: Методическое обеспечение лабораторной диагностики вирусного гепатита В.rtf
Добавлен: 29.10.2023
Просмотров: 266
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
СОДЕРЖАНИЕ
.1 Вирусные гепатиты и их возбудители
Вирусные гепатиты А и Е не имеют хронических форм болезни или хронического вирусоносительства.
.2 Функции печени и их недостаточность при гепатитах
1.2.1 Белково-синтетическая функция печени
.2.2 Роль печени в пигментном обмене
1.2.3 Параметры функционального состояния печени
Согласно действующей классификации ферменты делят на шесть главных классов:
2. Классификация вирусных гепатитов
Как полагают, этим списком далеко еще не исчерпываются все возбудители ВГ.
ВГС передается через контакт с кровью больного ВГС человека.
пользование одними иглами и шприцами с больным ВГС (при внутривенном введении наркотиков);
повторное или многократное использование игл в медицинской практике;
серьезные хирургические операции;
перинатальный (или вертикальный) путь передачи ВГС от инфицированной матери к ребенку;
переливание крови или ее продуктов;
заражение при нанесении татуировок, прокалывании тела (пирсинг);
Калибровочный график АсАТ и АлАТ
Метод: Reitman, Frankel ф. Lachema
АБхФк-02 - «НПП-ТМ»
кювета 1х1, λ=530 нм
годен до 31.11.2011
| № | Е | Еср | С, мккат/л |
| 1 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 0,085 0,079 0,078 | 0,08 | 0,28 |
| 3 | 0,162 0,153 0,165 | 0,160 | 0,56 |
| 4 | 0,235 0,225 0,230 | 0,230 | 0,83 |
| 5 | 0,310 0,309 0,292 | 0,303 | 1,11 |
ΣЕ=0,773; Е0,300=110 мм;
ΣС=2,78; 1Е = 366,7
F=2,78/0,773=3,596; 1т. 0,08 Е = 0,008х366,7 = 29,3 мм;
F=3,6; 2т. 0,16 Е = 0,16х366,7 = 58,6 мм;
т. 0,23 Е = 0,23х366,7 = 84,3 мм;
т. 0,303 Е = 0,303х366,7 = 1,11 мм.
Масштаб 1 мккат = 100 мм
Расчет
По оптической плотности пробы в калибровочном графике находят концентрацию фермента.
Предупреждение
Пробы сыворотки крови можно хранить при температуре (от +2 до +8)°С в течении одной недели.
При каталитической концентрации фермента свыше 0,56 мккат/л анализ проводят с сывороткой, разбавленной физиологическим раствором (результат умножить на разведение).
| При кат. концентрации фермента | Разведение |
| (0,56 - 0,70) | 3х |
| (0,70 - 0,80) | 5х |
| (0,80 - 1,00) | 10х |
| (1,00 - 1,20) | 30х |
| Свыше 1,20 | 50х |
Повышенное содержание кетоновых тел (в сыворотках диабетиков) вызывает повышение активности ферментов АсАТ и АлАТ. В таких случаях необходимо вычесть из оптической плотности пробы оптическую плотность сывороточного контрольного раствора. Сывороточный контрольный раствор приготавливают точно так же, как и пробу, с той лишь разницей, что сыворотку добавляют в пробирку после реактива 2.
Гемолиз повышает каталитическую концентрацию ферментов АсАТ и АлАТ. Снижение результатов вызывают синтетические моющие средства (сапонаты).
Референтные величины
АлАТ (мккат/л) 0,06-0,14
Предельные величины 0,42
5.4 Метод определения общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции
Принцип метода
Белки реагируют в щелочной среде с сернокислой медью с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет (биуретовая реакция).
Реактивы
1. Лиофилизированный альбумин для приготовления 5 мл калибровочного раствора (100+2) г/л или 5 мл готового раствора альбумина (100+2) г/л.
2. Биуретовый реактив (концентрированный раствор):
- сульфат меди (15.0+0,75) г/л;
гидроокись натрия (40,0+2) г/л;
калия нитрат тартрат (45,0
+2,25) г/л;
йодит калия (25,0+1,25) г/л;
Оборудование
1. Анализатор биохимический фотометрический кинетический АБхФк-02 - «НПП-ТМ».
2. Колба мерная емкостью 500 мл, пробирки емкостью 10 мл (ГОСТ1770-74).
. Пипетки емкостью 1; 0,1; и 5 мл (ГОСТ 29227-91).
Приготовление рабочих растворов
1. Калибровочный раствор альбумина. Если флакон содержит лиофилизированный альбумин, то в него вносят, аккуратно вытащив крышку, точно 4,5 мл физиологического раствора. Флакон закрывают крышкой и, не допуская пены, легкими вращательными движениями руки перемешивают его содержимое до полного растворения. Флакон не взбалтывать. Хранить при температуре от +2°С до +4°С. Раствор содержит (100+2) г/л альбумина. Если во флаконе раствор, то он готовый для использования.
2. Биуретовый реактив. Содержимое одного флакона с концентрированным раствором биуретового реактива перенести в мерную колбу емкостью 500 мл и довести до метки дистиллированной водой. Потом перенести в полиэтиленовую емкость, которая герметично закрывается. Раствор стабильный.
Ход определения
| Ингредиенты, мл | Калибровочная или исследуемая проба | Холостая проба |
| Калибровочный или исследуемый раствор | 0,02 | - |
| Физиологический раствор | - | 0,02 |
| Биуретовый реактив | 1,00 | 1,00 |
Смешивают, оставляют на 30 мин при комнатной температуре (от + 18°С до +25°С). Измеряют оптическую плотность калибровочной и исследуемой проб против холостой на АБхФк-02 - «НПП-ТМ», длина волны 540 нм. Окрашивание стабильно в течение 60 минут.
Расчет концентрации общего белка проводят по формуле:
С= Еиссл /Екалх100. где
С - концентрация общего белка в исследуемой пробе, г/л;
- концентрация общего белка в калибровочном растворе, г/л;
Еиссл - оптическая плотность исследуемой пробы, ед. опт. плотности;
Екал - оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотности.
Нормальные величины 65-85 г./л.
Примечания
1. Биуретовая реакция чувствительна к температуре. Повышение температуры увеличивает скорость развития окраски. Поэтому определение необходимо проводить при одной и той же температуре. Обычно это комнатная температура.
2. Время экспозиции проб в ходе исследования также сказывается на интенсивности окраски реакционной смеси. Поэтому для получения сопоставимых результатов колориметрирование всегда проводится через одинаковые интервалы времени, которые выбирают в промежутке между 30 - 60 мин. экспозиции.
. Содержание белка в стандартном растворе должно быть не меньше 70 г./л.
. При содержании белка в сыворотке крови больше 100 г./л сыворотку разводят физиологическим раствором, а результаты умножают на коэффициент разведения.
. Все реактивы готовят на прокипяченной дистиллированной воде.
Заключение
Острый вирусный гепатит В передается преимущественно парентеральным путем (с продуктами крови, при использовании инфицированных шприцев и т.д.), при половых контактах, а также вертикально (от матери ребенку). Инкубационный период может колебаться в зависимости от дозы возбудителя. От момента заражения до развертывания клинических проявлений может пройти 160 дней. НВsAg обнаруживается в сроки от 6 до 43 дней с момента инфицирования. Часто наблюдается безжелтушное течение заболевания. Выздоровление отмечается более чем в 95% случаев. Однако острый вирусный гепатит В следует считать потенциально опасным, поскольку возможны переход в хроническую форму, развитие вирусоносительства и возникновение фульминантного гепатита.
Диагноз предположительно ставится на основании клинической картины и повышения уровня аминотрансфераз и подтверждается более чем у 80% больных с помощью определения НВsAg. У остальных пациентов ВГВ как этиологический фактор заболевания устанавливается при выявлении высокого титра анти-НВс-IgM.
Этиотропного лечения впервые возникшего острого гепатита В в настоящее время не существует.