ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 24.08.2021
Просмотров: 823
Скачиваний: 3
Rho(D), rh'(C), rh»(E).
В повседневной практике переливания крови ограничиваются определением у реципиента только антигена Rho(D).
Таблица 6-5. Aнтигенные группы системы резус-фактор (по M.A. Умно- вой, 1983)
Существует подтип этого антигена Du, отличающийся по структуре и количеству экспрессируемых молекул на строме эритроцитов. Иммуногенность антигена Du значительно снижена, и выявить его сложнее, чем резус-фактор. Подтип Du имеет существенное значение, так как приводит к синтезу особых антител. Они могут стать причиной развития резус-несовместимости крови донора и реципиента. При наличии Du кровь реципиента считают отрицательной, а кровь донора - положительной.
|
|
Aнтигены резус - липопротеиды. Они очень активны и способны вызывать образование иммунных антител. Резус-антитела, будучи иммунными (неполными, моновалентными, блокирующими), могут фиксироваться к резус-положительным эритроцитам, не вызывая их склеивания. Они агглютинируют эритроциты только в присутствии коллоидных растворов, протеолитических ферментов или под действием специально приготовленной антиглобулиновой преципитирующей сыворотки. Неполные антитела относят к иммуноглобулинам класса G.
Наличие резус-антигена выявляют у эмбриона начиная с 5-8-й нед, оно хорошо выражено на сроке гестации 3-4 мес. Существова-
ние антигенов системы резус в эритроцитах человека - физиологическое явление, антител к этим антигенам в организме людей с резус-положительными эритроцитами нет. Образование иммунных антител происходит при поступлении в организм человека чужеродного ему изоантигена. У сенсибилизированных людей с резус-отрицательными эритроцитами антитела анти-D содержатся не только в крови, но и в экссудате, транссудате, моче, слезе и других средах.
Способы определения резус-фактора
Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.
Способы определения Rh0(D) в клинической практике
В клинических условиях (в приёмном покое, хирургическом отделении, операционной), где нет специального лабораторного оборудования, используют экспресс-методы определения Rho(D) (D-фактора).
Экспресс-метод определения стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева
Для исследования можно использовать свежую несвернувшуюся кровь, взятую из пальца (или вены) непосредственно перед исследованием, или консервированную кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.
|
|
Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ(IV), разведённую 33% раствором декстрана (ср. мол. масса 50 000-70 000). Затем в неё добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круго- вым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать следует не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического
раствора и перемешивают путём одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).
Трактовка результатов. Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.
Лабораторные способы определения резус-фактора
Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.
Метод агглютинации в солевой среде
Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом ра- створе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 ?С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.
|
|
Метод агглютинации в присутствии желатина
B две пробирки помещают по 0,02-0,03 мл осадка исследуемых эритроцитов. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) анти-резусной сыворотки, во вторую (контрольную) пробирку - 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) физиологического раствора.
Содержимое осторожно перемешивают. Затем пробирки инкубируют в термостате при температуре 45-48 ?С в течение 30 мин, после чего добавляют 5-8 мл физиологического раствора и переворачивают пробирки 1-2 раза для перемешивания.
Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невоору- жённым глазом или через лупу. Eсли эритроциты резус-положи- тельны, произойдёт их агглютинация. Отсутствие агглютинации свидетельствует о том, что испытуемая кровь резус-отрицательная. B контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать.
Непрямой антиглобулиновыи тест (реакция Кумбса)
Эта реакция наиболее чувствительна для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-при- надлежности крови, связанных с нечёткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки.
При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание, сенсибилизация по отношению к антиглобулиновой сыворотке, которая агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.
В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты, помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 ?С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации - показатель того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует, то испытуемая кровь резус-отрицательная.
|
|
Реакция с анти-D-моноклональными антителами
На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-монокло- нальных антител и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови.
За реакцией наблюдают в течение 3 мин. При смешивании анти- D-MKA с образцами резус-положительных эритроцитов отмечают быстро наступающую лепестковую агглютинацию. Если кровь резусотрицательная, агглютинация отсутствует.
Возможные ошибки
Чаще всего ошибки бывают следствием методических погрешностей при проведении исследования, в особенности при использовании конглютинационных методов. К ложным результатам могут привести неправильное соотношение между сывороткой и эритроцитами, преждевременная оценка результатов, оценка результатов по высыхающей капле, определение резус-фактора в гемолизированном и длительно хранящемся образце крови, а также использование неактивных, инфицированных и загнивших сывороток или сывороток с истекшим сроком годности.
Причиной ошибок могут быть биологические особенности испытуемой крови: снижение агглютинабельности резус-антигена при некоторых заболеваниях печени, почек, системы крови, а также неспе- цифическая агглютинация испытуемых эритроцитов. B случае сомнительных результатов исследование повторяют, применяя более активные антирезусные сыворотки.
Клиническое значение групповой дифференциации
Общие иммуногенетические аспекты
Групповые антигены и антитела крови имеют большое значение в физиологии и патологии человека. Прежде всего, надо иметь в виду, что антигены крови - маркёры генотипа каждого индивидуума. Этот факт имеет значение для плодовитости брака, течения и исхода беременности и здоровья новорождённого. Половые клетки соответственно генотипу имеют антигены, аналогичные групповым антигенам крови, а супруги часто отличаются по группе крови. Несовместимость супругов по системе резус-фактора - одна из наиболее частых причин иммунологического конфликта при беременности, приводящего к гибели плода или гемолитической болезни новорождённого.
|
|
B настоящее время всё больше появляется данных о статистически значимых связях групп крови с инфекционной и неинфекционной патологией человека. Наличие некоторых эритроцитарных и лей- коцитарных антигенов создаёт условия для большей вероятности некоторых заболеваний. B частности, известно, что язвенная болезнь наиболее часто развивается у пациентов с группой крови A(II), а наличие антигена HLA-B18предрасполагает к заболеванию гепатитом B, а если при этом у человека имеется ещё антиген HLA-B5, то наиболее вероятно хроническое течение заболевания. Существует оп- ределённая связь иммунологической реактивности и лейкоцитарных групп по системе HLA. Например, организм людей, имеющих антиген HLA-B8, более активно синтезирует любые антитела, а при наличии антигена HLA-B35 особенно активно образует антитела к столбнячному анатоксину. Таких примеров много. Подобные данные имеют большое значение для определения групп риска в направленной диспансеризации, а также при профессиональном отборе.
Без учёта антигенной структуры крови доноров и реципиентов, особенно системы HLA, невозможно осуществлять аллотрансплан- тацию различных органов и тканей (пересадки почки, сердца, печени, костного мозга).
Исследование групп крови широко используют в судебной медицине при решении вопросов о спорном отцовстве, материнстве, а также при исследовании крови на вещественных доказательствах. Значение групп крови велико и в решении некоторых вопросов антропологии.
Однако первостепенное значение группы крови имеют в трансфузиологической практике при переливании донорской крови, её компонентов и препаратов.
Значение групповой принадлежности при гемотрансфузии
Группа крови каждого человека включает большое количество различных эритроцитарных, лейкоцитарных, тромбоцитарных и плазменных антигенов, достаточно активных и способных стать причиной иммунологической несовместимости при гемотрансфузии. Главенствующую роль играют антигенные системы АВ0 и Rh-фактора.
|
|
Иммунологическая несовместимость возникает при появлении в результате гемотрансфузии в крови у реципиента одноимённых ан- тигенов в эритроцитах и в достаточном количестве антител - в сыворотке крови (агглютиноген А - агглютинин а; агглютиноген В - агглютинин β; антиген D(Rh0) - антирезусные антитела). При этом возникает агглютинация эритроцитов с последующим гемолизом.
Первыми указали на значение групповой совместимости крови донора и реципиента, как на важнейшее условие «приживления» перелитой крови, Грилле (1907) и Оттенберг (1908).
Правило Оттенберга
При выявлении совместимости крови реципиента и донора по системе АВ0 Оттенберг ввёл правило (правило Оттенберга), согласно которому подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента. По правилу Оттенберга, можно переливать кровь, эритроциты которой не могут быть агглютинированы сывороткой реципиента (рис. 6-2).
В соответствии с правилом Оттенберга возможно переливание не только одногруппной крови. Эритроциты группы 0(I) не содержат никаких агглютиногенов и не дают агглютинации ни с какими сыворотками. Следовательно, кровь этой группы можно переливать лицам всех остальных групп.
Рис. 6-2. Возможные способы переливания крови, по правилу Оттенберга
В сыворотке крови группы АВ(IV) нет никаких агглютининов, поэтому перелитые эритроциты других групп никогда не будут агг- лютинироваться и, соответственно, лицам с четвёртой группой крови можно переливать кровь от людей с любой группой крови.
Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).
|
|
При массивной кровопотере, когда необходимо перелить большее количество крови, агглютинины плазмы вливаемой крови не полу- чают достаточной степени разведения плазмой реципиента и, следовательно, могут агглютинировать его эритроциты.
По современным правилам во избежание этого осложнения всегда следует переливать только одногруппную кровь.
Особенность совместимости по резус-фактору
В норме в крови как резус-положительных, так и резус-отрицательных людей антирезусных антител нет. Причины их появления в сыворотке резус-отрицательных людей следующие:
• резус-конфликт при беременности;
• переливание резус-положительной крови;
• искусственная иммунизация добровольных доноров.
Резус-конфликт
Система резус-фактора играет большую роль в акушерстве и гинекологии. Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом может происходить иммунизация беременной и образование у неё антител анти-D, которые из её крови проникают через плацентарный барьер, попадают в кровоток плода и повреждают его резус-положительные эритроциты и органы кроветворения. Возникает резус-конфликт. Указанные изменения ведут
к развитию гемолитической болезни, имеющей симптомы различной степени выраженности: от анемии, выраженной желтухи и отёка плода до нарушения беременности и мертворождения.
Первая беременность, как правило, заканчивается рождением здорового ребёнка, происходит только сенсибилизация матери к антигену D. В последующем, если снова развивается резус-положитель- ный плод, тяжесть проявления и последствий резус-конфликта нарастает. Иногда серьёзные последствия могут наступить и при первой беременности, в то время как в других случаях выраженность резусконфликта при второй, третьей беременностях может быть весьма умеренной. Степень выраженности осложнений зависит в первую очередь от титра антирезусных антител в сыворотке беременной. В связи с этим все резус-отрицательные беременные состоят на диспансерном учёте, у них регулярно контролируют содержание антител анти-D и в зависимости от полученных данных предпринимают соответствующее лечение, а иногда и искусственно прерывают беременность.
|
|
Переливание резус-несовместимой крови
Аналогичен механизм патологических изменений при переливании резус-несовместимой крови. Первое переливание резус-положи- тельной крови резус-отрицательному несенсибилизированному больному может не сопровождаться явлениями несовместимости, но обязательно приведёт к образованию антирезусных антител (сенсибилизации). При последующих трансфузиях этому больному резусположительной крови возникает несовместимость по Rh-фактору. Развитие резус-несовместимости опасно и при переливании резусположительной крови резус-отрицательной женщине, сенсибилизированной к резус-фактору во время беременности.
Искусственная иммунизация добровольных доноров
Процедуру проводят для получения антирезусной сыворотки и приготовления различных реагентов.
Современные правила переливания крови