Файл: Занятие 3 Тема Физиология прокариот питание бактерий. Дыхание, размножение и рост бактерий. Факторы влияющие на рост и размножение бактерий Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.pdf

Дата__________________
Занятие №3
Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Дыхание, размножение и рост бактерий. Факторы влияющие на рост и размножение бактерий
Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.
Вопросы для обсуждения:
1. Метаболизм бактерий: конструктивный и энергетический.
2. Типы питания бактерий.
3. Ферменты бактерий и их роль в метаболизме.
4. Дыхание бактерий, сущность процесса. Типы дыхания бактерий.
5. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания.
6. Рост и механизм деления бактериальной клетки.
7. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях.
8. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
9. Питательные среды, их классификация и назначение.
10. Требования, предъявляемые к приготовлению питательных сред.
11. Стерилизация. Методы стерилизации.
12. Дезинфекция. Методы дезинфекции.Асептика и антисептика.
Практические задания:
1. Изучить питательные среды и их компоненты: а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие; б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и
Плоскирева
2. Заполнить таблицу:
Классификации питательных сред (примеры
)
Таблица 1 1. По консистенции: а) б) с)
2. По составу а) б)
3. По назначению

3. Заполнить таблицу «Классификаци ферментов бактерий». Указать примеры.
Таблица 2.
Биохимическая
Генетическая
Биологическая
конститутивные ферменты
(кодируются обычно генами хромосомы)
индуцибельные ферменты (чаще кодируются генами плазмид и транспозонов)
Экзо ферменты
Эндоферменты
4. Заполнить таблицу:
Дыхательные ферменты
Наличие дыхательных ферментов у:
аэробов
факультативных
анаэробов
облигатных
анаэробов
Дегидрогиназы
НАД
Флавинзависимые дегидрогиназы
ФАД
Убихиноны
CoQ
Цитохромы
: a, b, с
(гемопротеины)
5. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации.
6. Заполнить таблицу по методам тепловой стерилизации:
Таблица 3.
№
п/п
Метод
Аппаратура
Режим
стерилизации
Стерилизуемый материал
1
Прокаливание
2
Горячий воздух
180ﹾ С, 1 час
3
Пар под давлением
0,5 ат =110°С
1,0 ат =121°С
1,5 ат =127°С
2,0 ат =132°С

4
Текучий пар
(дробная стерилизация)
5
Щадящее прогревание
(тиндализация)
7. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).
8. Записать определения:
Стерилизация - __________________________________________________
________________________________________________________________
Дезинфекция - ___________________________________________________
________________________________________________________________
Асептика - ______________________________________________________
______________________________________________________________
Антисептика - ___________________________________________________
________________________________________________________________
Подпись преподавателя _______________________

Дата__________________
Занятие №4
Тема:. Выделение чистой культуры аэробных бактерий. Идентификация аэробных бактерий.
Вопросы для обсуждения:
1. Бактериологический метод исследования, его этапы.
2. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий.
3. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения.
4.
Чистая и смешанная культура бактерий.Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования.
5. Способы определения ферментативных свойств бактерий.
6. Среды Гисса, их состав и использование.
7.
Методы определения продукции бактериями аммиака, индола и сероводорода.
8. Какие свойства бактерий необходимо изучить для определения их видовой принадлежности?
Практические задания:
1. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды.
2. Промикроскопировать мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрашенный по Граму.Внести данные в протокол бактериологического исследования.
Протокол
бактериологического исследования аэробных бактерий
(1-й день исследования)
Мазок из исследуемого материала (смесь бактерий).
Рис. 1. Смесь бактерий
(
стрелкой указать рамположительные и грамотрицательные бактерии
).
При окраске по Граму выявлены
_______________________________________________________________
Произведен посев исследуемого материала на________________
Посевы помещены в термостат при t ___ C на __________ часов.

2-й день исследования
3. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах. Заполнить таблицу1.
Таблица 1.
Характеристика колоний
№
Свойства колоний
Колонии
№ 1
№ 2
1 Размер (мм)
2 Форма
3 Края
4 Прозрачность
5
Расположение по отношению к поверхности питательной среды
6 Поверхность
7 Пигмент
8 Структура
4. Промикроскопировать окрашенные по Граму мазки из изолированных колоний типов №1 и №2. Заполнить таблицу 2. Зарисовать препараты чистых культур.
Таблица 2.
Характеристика свойств бактерий, образующих колонии № 1 и № 2
Свойства бактерий из колоний
№1 и №2
Колонии
№ 1
№ 2
Морфологические
Тинкториальные
Рис.1. Препарат-мазок из к-ры №1
Рис.2. Препарат-мазок из к-ры №2 3-й день исследования
5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур.
Культура № 1.Макроскопические признакики:
______________________
Микроскопия мазка: __________________________________________
Культура № 2. Макроскопические признкики
_______________________
Микроскопия мазка: __________________________________________
Вывод:
Выделены чистые культуры бактерий. Чистые культуры № 1 и № 2 были пересеяны в среды Гисса или «пестрого ряда» (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит) и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Посевы инкубировались в термостате при t __ С _____ часа.
4-й день исследования
6. Изучить ферментативные свойства чистых культур №1 и №2. Определить вид выделенных культур бактерий с помощью дифференциально-диагностических таблиц.
7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (1,2,3 и 4 дни).
Таблица 3.
Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов бактерий рода
Вacillus
Вид
Ферментацияия
Образование
Под
ви
ж
н
ос
ть
Ок
си
даза
К
аталаз
а
Г
лю
к
озы
лактозы
сахар
озы
м
ал
ьтоз
ы
ман
и
и
та
и
н
дола
H
2
S
сп
ор
B. cereus
К
К/-
К/-
К
-
-
+
+
+
+
+
B. subtilis
К
К/-
К/-
К
К
-
-
+
+
+
+
Таблица 4.
Характеристика некоторых свойств энтеробактерий
Вид
Ферментация
Образование
Под
ви
ж
н
ос
ть
Ок
си
даза
К
аталаз
а
Г
лю
к
озы
лактозы
сахар
озы
мальтоз
ы
ман
и
и
та
и
н
дола
H
2
S
E. coli
КГ
КГ
-
КГ
КГ
+
-
+
-
+
S. typhi
К
-
-
К
К
-
+
+
-
-
Таблица 5.
Свойства культур № 1 и № 2
№ пп
Ферментация
( К, КГ или (-)
Образование
(+ / -)
Под
ви
ж
н
ос
ть
(+
/
-)
Нали
ч
и
ес
п
ор
(+
/
-
)
Предположительный
вид
бактерий
глю
к
озы
лактозы
сахар
озы
мальтоз
ы
ман
и
и
та
и
н
дола
H
2
S
№1
№2
Заключение:
на основании изученных морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств выделенных бактерий можно предположить, что культура №1 относится к виду ____________________, а культура № 2 представляет собой вид ____________________. Для окончательной идентификации исследование нужно

продолжить.
Подпись преподавателя ________________
Дата__________________
Занятие №5
Тема: Анаэробные бактерии. Выделение чистой культуры и идентификация анаэробных бактерий.
Грибы. Систематика и классификация грибов
Особенности культивирования и идентификации грибов
Вопросы для обсуждения:
1. Принципы идентификации анаэробных бактерий.
2. Методы создания анаэробных условий для культивирования облигатных анаэробов.
3. Анаэростат, принцип его работы.
4. Среда Китта-Тароцци, ее назначение.
5. Среда Вильсон-Блера, ее применение.
6. Методы выделения чистой культуры облигатных анаэробов.
7. Какие свойства изучают у облигатных анаэробов для определения их видовой принадлежности?
8. Грибы как особое царство микроорганизмов. Систематика и классификация грибов.
9. Структура и химический состав клеток грибов.
10. Морфология и строение грибов.
11. Размножение грибов. Принципы культивирования.
12. Культуральные и ферментативные свойства грибов рода Candida,.
Практические задания:
1.
Изучить характер роста анаэробных бактерий (посев почвы) в среде Китта-Тароцци.
1. Без прогрева.
Рост 24 ч при 37
о
С
___________________
1. Прогрев при 80 0
С, 25 мин.
Рост 24 ч при 37
о
С
___________________
2. Приготовить мазки и окрасить их по Граму, микроскопировать и зарисовать.
Рис. 1. Препарат-мазок из среды
Китта-Тароцци.
3.
Произвести пересев смешанной культуры из среды Китта-Тароцци в высокие

столбики МПА с глюкозой (0,5 %) методом разведения для получения изолированных колоний.
4. Дополнить схемы выделения чистой культуры анаэробных бактерий с использованием методов Цейслера и Вейнберга.
Метод Цейсслера
1 день 2 день 3 день 4 день 5 день
К-Т
Метод Вейнберга
1 день 2 день 3 день 4 день 5 день
К-Т
К-Т
5. Изучить культуральные свойства анаэробных бактерий в сахарном МПА и среде
Вильсона-Блера.
6. Произвести учет ферментативных свойств клостридий в средах Гисса и внести данные в таблицу.
Таблица 4.
Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов клостридий
Наименование
вида
Ферментация углеводов
Расположение
спор
Отношение к
О
2
глюкоза лактоза мальтоза
1 Cl. botulinum
2 Cl. tetani
3 Cl. perfringens
Вывод:
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
7. Промикроскопировать препараты-мазки, приготовленные из чистой культуры
К-Т

Candida albicans и окрашенные по Граму, зарисовать.
Рис. 1. Candida albicans в мазке-препарате из чистой культуры.
Окраска по Граму
8. Изучить культуральные свойства Candida albicans на плотной Сабуро.
(выпуклые, с матовой поверхностью, белый пигмент, запах дрожжей)
Посев по Голду
Посев из разведений
Рис. 2. Культуральные свойства грибов р. Candida а b
Рис. 3. Ростовая трубка: а) Candida albicans; b) Candida tropicalis a. Изучить филаментацию видов гриба рода Candida в жидкой среде с добавлением сыворотки крови.
Рис. 4. Филаментация C. albicans

9. Произвести учет ферментативных свойств грибов рода Candida и определить их вид, пользуясь таблицей.
Таблица
Биохимические свойства некоторых видов грибов рода Candida
Виды грибов
Глюкоза
Лактоза Мальтоза Сахароза Галактоза Трегалоза
C. albicans
+
-
+
-
+
+
C. tropicalis
+
-
+
+
+
+
C. pseudotropicalis
+
-
-
-
-
-
C. crusei
+
-
-
-
-
-
C. guilliermodii
+
-
+
+
+
+
C. parapsilosis
+
-
-
-
+
-
Ключевые признаки в идентиификации грибов рода Кандида: ____________________
__________________________________________________________________________
10. Изучить морфологию плесневых грибов:
Род Мукор
Род Aspergillus
Род Реnicillum
Изучить рост плесневых грибов на питательных средах:

Подпись преподавателя
_____________________
Дата__________________
Занятие №6
Контрольная точка №1.
Тема: «Морфология, структура и культивирование микроорганизмов (бактерий и
грибов) ».
I. Практические задания:
1.
Микроскопировать препараты - мазки с помощью иммерсионного объектива и определить морфологические свойства бактерий (Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Bacillus anthracis, смесь бактерий), дрожжеподобных грибов рода Candida.
2.
Микроскопировать препараты капсулы Klebsiella pneumoniae, спор бацилл или клостридий.
3.
Дать характеристику культуральным свойствам бактерий на мясо-пептонном агаре в чашках Петри.
4.
Произвести учет ферментативных свойств исследуемых культур бактерий.
5.
Охарактеризовать среды для культивирования анаэробных бактерий (Китта-
Тароцци, Вильсон-Блера).
6.
Дать характеристику культуральным свойствам грибов рода Кандида на агаре
Сабуро в чашках Петри
II. Тестовый контроль знаний.
III. Устный опрос
1. Принципы микроскопии. Основные методы микроскопирования. Методы окраски.
Изучение морфологии и отдельных структур микроорганизмов.
2. Систематика микроорганизмов (прокариоты, грибы, простейшие, вирусы). Принципы классификации. Понятие о виде как основной таксономической единице.
Таксономические категории. Номенклатура. Основные отличия прокариотов от эукариотов.
3. Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактерии с дефектом синтеза клеточной стенки: протопласты, сферопласты, L – формы.
4. Капсулы. Жгутики. Пили. Химический состав и функциональное значение этих образований у бактерий. Методы выявления. Патогенные представители.
5. Споры и спорообразование. Химический состав и функциональное значение спор.
Методы выявления. Патогенные представители.
6. Метаболизм бактерий. Ферменты бактерий и их роль в обмене веществ.
Конститутивные и индуцибельные, экзо- и эндо- ферменты. Практическое использование биохимической активности бактерий.
7. Типы и механизмы питания бактерий. Транспорт питательных веществ в клетку.
8. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы.
9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения популяции бактерий в стационарных условиях.
Периодическое культивирование.
Непрерывное культивирование, его значение в биотехнологии.
10. Основные принципы и методы культивирования бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение. Классификация питательных сред и требования, предъявляемые к ним.
11. Бактериологический метод исследования, его этапы. Выделение чистых культур аэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида.
12. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий. Изучаемые свойства.
Ключевые признаки в идентификации вида.

13. Морфологические и культуральные свойства грибов рода кандида.
Дата__________________
Занятие №7
Тема: Вирусы. Классификация. Морфология и строение вирионов.
Взаимодействие вируса с клеткой.
Противовирусные химиопрепараты.
Вирусы бактерий (фаги).
Вопросы для обсуждения:
1. Общая характеристика царства вирусов.
2. Классификация вирусов.
3. Форма и размер вирионов. Структура простых и сложных вирионов.
4. Капсиды вирионов, типы симметрии.
5. Вирусный геном, его структура. Вирусы с позитивной и негативной полярностью.
6. Неструктурные вирусные белки.
7. Стадии взаимодействия вируса с клеткой: продуктивная и интегративная формы.
8. Особенности репликации ДНК- и РНК-содержащих вирусов.
9. Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).
10. Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий.
11. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.
12. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой.
13. Лизогенные бактерии. Фаговая конверсия.
14. Практическое использование вирусов бактерий.
Практические задания:
1. Изучить классификацию вирусов, морфологию и строение вирионов с помощью таблиц.
2. Зарисовать структуру простого и сложного вириона.
Рис. 1. Схема строения простого Рис. 2. Схема строения сложного вириона. вириона.
3. Подписать типы симметрии капсидов:

4. Изучить стадии взаимодействия вируса с клеткой
1._________________________
2. ________________________
3.________________________
4. ________________________
5.________________________
6.________________________
5. Заполнить таблицу №1. Табл.1
Эклипс-фаза для следующих вирусов:
Тип вируса
+ РНК
ДНК
Ретровирус
Обратная
Транскрипция нет нет (кроме вируса гепатита В)
Транскрипция
Синтез вирусных белков
Репликация вирусного генома
Пример заполнения таблицы для «-»РНК-вируса:
Транскрипция
РНК зависимая РНК-полимераза
“-” РНК
----------------
“+” РНК
Синтез вирусных белков
+РНК
-------R -------
белки
Рибосома
Репликация вирусного генома
Вирусная РНК-полимераза
“-” РНК
----------------
“+” РНК
Вирусная РНК-полимераза
----------------
“-” РНК

6. Назовите основные мишени для действия противовирусных препаратов, заполнить таблицу № 2.
Табл. 2
№
Механизм действия препарата:
Стадия репродукции вируса
1. ингибитор вирусной нейраминидазы (озельтамивир)
2. ингибиторы депротеинизации (ремантадин);
3. ингибиторы обратной транскриптазы ретровирусов
(азидотимидин, зидовудин)
4. ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот
(рибавирин, ацикловир)
5. ингибиторы вирусных протеаз (саквинавир)
7. Определить фаговары культур золотистого стафилококка, и дать заключение об источниках (источнике) инфекции.
Результаты определения фаговаров культур золотистого стафилококка
:
Культура № 1 Культура № 2 Культура № 3
Культура № 1 ___________________________________________________
Культура № 2 ___________________________________________________
Культура № 3
___________________________________________
Фаготипирование S. aureus.
Заключение по результатам фаготипирования культур
_____________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________