Файл: Занятие 3 Тема Физиология прокариот питание бактерий. Дыхание, размножение и рост бактерий. Факторы влияющие на рост и размножение бактерий Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.pdf

Дата__________________
Занятие №8
Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе.
Вопросы для обсуждения:
1. Вирусологический метод исследования, его этапы.
2. Методы культивирования вирусов.
3. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования).
4. Способы заражения куриного эмбриона.
5. Индикация вирусов в курином эмбрионе. Реакции гемагглютинации и гемадсорбции.
6. Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток.
7. Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток?
8. Индикация вирусов в клеточных культурах.
Практические задания:
1. Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов.
Рис.1.заражение на_____
___________________
Примеры:
Рис.2.заражение в______
_________________
Примеры:
Рис.3.заражение в____________
________________
Примеры:
Рис.4.заражение в_____________
_________________
Примеры:
1. Ознакомиться со схемой постановки реакции гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме.
2. Учесть результат реакции гемагглютинации
(РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.
3. Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред
(199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен).
4. Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием.
5. Написать методы индикации вирусов в культуре клеток и в курином эмбрионе.

Таблица 1.
Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса
Ингредиенты
в мл
Лунки
Контроль эритроцитов
1-я
2-я
3-я
4-я
5-я
6-я
0,85% раствор NaCl
0,9 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Аллантоисная жидкость
0,1
→
→
→
→
Полученные разведения
1 : 10 1 :2 0 1 : 40 1 : 80 1 : 160 1% взвесь эритроцитов
0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Учет результатов
-
Условные обозначения:
(+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика
(-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки»
6. Зарисовать видимые проявления РГА:
Лунки полистиролового планшета
1:20
1:40
1:80
1:160
1: 320
1: 640
Контроль
эритроцитов
Разведения аллантоисной жидкости 1:20 - 1:640
Заключение:
титр вируса гриппа 1:_______
Реакция гемагглютинации
Гемадсорбция-адсорбция эритроцитов на поверхности зараженных вирусом клеток.
7. Написать методы индикации вирусов: в клеточных культурах тканей и в курином эмбрионе:
_________________________________ ___________________________
_________________________________ ____________________________
_________________________________ ___________________________
_________________________________ __________________________
Подпись преподавателя ________________