Реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) для диагностики токсоплазмоза предложена J. Kramar (1961). В качестве антигена в реакции используют убитые эндозоиты токсоплазм. Сущность РНИФ состоит в выявлении специфических антител в исследуемой сыворотке с помощью токсоплазменного антигена и маркированных флтооресцоином антител к иммуноглобулинам человека. При наличии в испытуемой сыворотке специфических противотоксоплазменных антител образуется комплекс антиген— антитело, который адсорбирует меченные флюоресцеином антитела к гамма-глобулинам человека. Образование в реакции трехкомпонентной системы сопровождается появлением по периферии токсоплазм яркого зелено-желтого свечения, хорошо контрастирующего» с телом возбудителя. Такой результат реакции определяется как положительный. При полном отсутствии флюоресценции токсоплазм результат реакции расценивается как отрицательный. Учет реакции производят под иммерсионной системой (объектив 90) в люминесцентном микроскопе. В зависимости от интенсивности свечения токсоплазм результат реакции обозначают 4+, 3 + , 2+ и 1 + . Положительной считают реакцию при интенсивности свечения токсоплазм на 4+ и 3+. Для количественной оценки положительных сывороток определяют титр специфических антител. Антитела, определяемые в РНИФ, появляются к концу 1-й недели после заражения токсоплазмами и сохраняются длительное время. РНИФ специфична и по чувствительности приближается к РСФ. По уровню титров она уступает РСФ лишь на 1—2 порядка и значительно превосходит РСК. Однако необходимо учитывать, что у больных системной красной волчанкой, ревматоидным артритом и другими заболеваниями, при которых наблюдается образование антиядерных антител, РНИФ с токсоплазменным антигеном может давать ложноположительные результаты, так как антинуклеарные антитела могут фиксироваться на токсоплазмах. РНИФ с токсоплазменным антигеном является одним из основных методов серологической диагностики токсоплазмоза в нашей стране. В настоящее время выпускаются отечественные стандартные унифицированные компоненты, необходимые для постановки РНИФ. J. Remington (1968) разработал тест, позволяющий в РНИФ выявлять антитела класса IgM. Для их обнаружения используют токсоплазменный антиген (формалинизированные токсоплазмы) и маркированную флюоресцеином антисыворотку, содержащую антитела к IgM человека.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) для диагностики токсоплазмоза предложена L. Jacobs и М. Lunde (1957). Для постановки реакции используют растворимый антиген, фиксированный на эритроцитах барана. Сущность РНГА заключается в выявлении специфических антител в исследуемой сыворотке с помощью токсоплазменного антигена, сорбированного на эритроцитах барана. При наличии в исследуемой сыворотке специфических противотоксоплазменных антител происходит взаимодействие между токсоплазменным антигеном и специфическими к нему антителами и наступает агглютинация эритроцитов. Такой результат реакции определяется как положительный. При полном отсутствии агглютинации эритроцитов реакция расценивается как отрицательная. Результат реакции учитывают визуально и в зависимости от степени агглютинации эритроцитов обозначают 4 + , 3 + , 2+ и 1 + . Положительной считают реакцию на 2-К. Для количественной оценки положительных сывороток определяют титры специфических антител. Антитела, определяемые в РИГА, обнаруживаются несколько позже, чем антитела, определяемые в РСФ (на 11—18-й день после заражения токсоплазмами). Их титр постепенно нарастает, некоторое время остается на одном уровне, а затем снижается. Низкие титры специфических противотоксоплазменных антител могут сохраняться несколько лет. РНГА специфична и не уступает по чувствительности РНИФ.

---

Титры сывороток в РНГА значительно выше, чем в РСК, и в среднем на 2—3 разведения выше, чем в РНИФ. Техника постановки реакции и учет ее результатов просты. Основным затруднением для широкого использования РНГА является отсутствие стандартного токсоплазменного эритроцитарного диагностикума (ТЭД). В настоящее время проведена лабораторная апробация отечественного ТЭД, в котором использованы формалипизированные таннизированные эритроциты барана, сенсибилизированные токсоплазменным антигеном. (И. П. Кондрахин, 2004)

Микроскопическая диагностика.

Посмертно. Из патологического материала делают по 2 мазка. При исследовании абортированного плода делают мазки из сердца, легких, печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, мышц глаза и экссудата грудной и брюшной полостей.

Жидкий материал наносят стерильной пипеткой на предметное стекло, размазывают и сушат на воздухе. Экссудат грудной и брюшной полостей предварительно центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин и мазки готовят из осадка. При исследовании плаценты делают разрез котиледона и делают мазки-отпечатки. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют этиловым спиртом в течение 10-15 мин, окрашивают по Романовскому (1-2 капли краски азур-эозина на 1 см³ дистиллированной воды рН 7,0-7,2) в течение 30-60 мин (зависит от качества краски), промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и исследуют под иммерсионной системой микроскопа. При микроскопии препаратов эндозоиты токсоплазмы имеют форму дольки апельсина (полумесяца) с заостренным передним концом. Цитоплазма эндозоитов окрашивается в голубой цвет различной интенсивности, ядро - в красный или красно-фиолетовый. В клетках разных органов путем размножения эндозоитов (до нескольких десятков) формируются псевдоцисты, не имеющие собственной оболочки. Наличие эндозоитов характерно для острой стадии токсоплазменного процесса. В мазках из головного мозга, сетчатки глаза и мышечных органах обнаруживают цисты шарообразной формы около 100 мкм в диаметре, окружены плотной оболочкой. В них могут находиться сотни и тысячи цистозоидов. Цисты могут быть и вне клеток. Наличие цист характерно для хронического течения токсоплазмоза. Результат микроскопического исследования считают положительным при обнаружении в мазках эндозоитов или цист токсоплазмы.

---

Возбудитель выделяют методом слепых пассажей на белых мышах. Материал растирают в ступке со стерильным песком и заливают физиологическим раствором в соотношении 1:3 или 1:5. Плаценту предварительно обрабатывают тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, подсушивают сухими стерильными тампонами, затем вырезают кусочки размером 0,5х0,5 см, фламбируют их на пламени горелки и растирают в ступке. В полученную суспензию добавляют антибиотики из расчета 1000 ЕД пенициллина и 0,05 г стрептомицина на 1 см³ суспензии. Суспензию выдерживают 1 час при комнатной температуре. Перед заражением суспензию встряхивают, когда частички осядут на дно, набирают надосадочную жидкость и вводят 2-3 белым мышам весом 20-23 г внутрибрюшинно или подкожно в дозе 0,5-1 см³. Суспензию можно набирать шприцом через стерильный ватный тампон. Место инъекции обрабатывают 7%-ной настойкой йода на 96° этиловом спирте.

С целью обогащения материала цистами применяют метод искусственного переваривания в желудочном соке. Патологический материал (кусочки внутренних органов, плаценты, мышц) тщательно измельчают, 50 г фарша помещают в колбу емкостью 1 см³ и заливают 10 объемами (по массе) искусственного желудочного сока следующего состава: пепсин - 1,3 г, натрий хлорид - 2,5 г, кислота соляная концентрированная - 3,5 см³, вода дистиллированная - 500 см³. Колбу помещают в термостат при 36°С на 1 или 1,5 часа, периодически встряхивая. Полученную массу центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, осадок промывают стерильным физиологическим раствором, ресуспендируют в двойном объеме этого же раствора и после добавления антибиотиков выдерживают 1 час при комнатной температуре и вводят внутрибрюшинно 2-3 белым мышам в дозе 1 см³. При наличии в материале токсоплазм животные гибнут в течение 7-10 дней. У павших от токсоплазмоза мышей в брюшной полости образуется экссудат, в котором содержится большое количество эндозоитов токсоплазмы. Возбудитель обнаруживают также в мазках-отпечатках из печени, селезенки, легких, почек, лимфатических узлов. Если в указанные сроки белые мыши, зараженные исходным материалом, не заболевают, их убивают на 10-й день, из паренхиматозных органов готовят суспензию (см. п.3.2.), которой заражают 2-3 белых мышей (второй пассаж). Если мыши не гибнут, аналогично проводят третий пассаж. При вскрытии мышей могут обнаружить в экссудате и паренхиматозных органах эндозоитов, а в головном мозге - цисты токсоплазмы. Для подавления резистентности белых мышей во втором и третьем пассажах им рекомендуется вводить гидрокортизон внутримышечно в дозе 0,05 см

---

³ 1 раз в день в течение 3 дней подряд перед заражением. Результат исследования считают положительным в случае обнаружения и дифференциации токсоплазм в патологическом материале.Токсоплазм необходимо дифференцировать от саркоцист, безноитий, лейшманий, неоспор, энцефалитозоон. Дифференциация основана на изучении морфологии возбудителей, их локализации, патогенности для белых мышей, круга хозяев.

Сроки исследования:

-микроскопического, серологического, копрологического - до 3 дня;

-биологического - до 30 дней. (Министерство с/х Рф, 1999)

7. 
   МЕРЫ БОРЬБЫ И ПРОФИЛАКТИКИ ТОКСОПЛОЗМОЗА
   

Больных животных убивают. Мясо проваривают, а субпродукты уничтожают. Животных, подозреваемых в заболевании, изолируют и за ними наблюдают; сыворотки исследуют в РСК. Если титр антител снизится до 1:10 и 1:5, то таких животных переводят в группу здоровых. Кровь собак и кошек периодически проверяют РСК, положительно реагирующих уничтожают.

Санитарные мероприятия особенно тщательно проводят в период отела коров, окота овец и опороса свиноматок. Немедленно уничтожают мертворожденные и абортиванные плоды, а так же нежизнеспособный молодняк. В помещениях проводят тщательную дезинвазию и дератизацию согласно временной инструкции, а стонки, где находились больные животные дезинвазировать 2-3%-ным раствором хлорной извести, 3%-ным раствором карболовой кислоты или едкого натра, или 5%-ным раствором креалина. Нельзя скармливать собакам, кошкам, свиньям и пушеым зверям мертвые плоды Их необходимо глубоко закапывать. Разделывать туши и вскрывать трупы строго в резиновых перчатках.

Под особым наблюдением должен находиться слаборазвитый молодняк, лучше его отделять от основного поголовья вместе с матерью и обеспечить за ним лучший уход и содержание. Следует учитывать, что латентный токсоплазмоз при неблагоприятных условиях содержания животных может перейти в острый, при котором у беременных самок происходит внутриутробное заражение плода. На фермы не допускают плотоядных животных, особенно кошек.

Профилактика для кошек:

1) Не кормить кошек сырым или недожаренным мясом. Если сырое мясо все же используется для кормления, его нужно предварительно или обработать гамма-облучением для того, чтобы убить паразита в кистах;

2) Убирать кошачий туалет ежедневно, чтобы предотвратить споруляцию ооцист;

---

3) Если кошка ловит мышей, не позволять ей заносить жертву в дом;

4) Ежегодно проводить серологические исследования и ПЦР анализ на токсоплазмоз;

5) Не допускать, чтобы кошка была в помещениях, где производятся продукты питания или хранятся корма;

6) Доноры крови животных должны быть обследованы до переливания;

7)Не допускать копрофагии у собак (потребление кошачьего кала);

8) Для уничтожения паразита в кошачьем туалете использовать химическую дезинфекцию 10% аммиаком в течение 10 минут, обрабатывая все поверхности и испражнения, или воспользоваться термической обработкой (погрузить в кипящую мыльную воду);

9) Контролировать наличие беспозвоночных насекомых, которые могут выступать в качестве механических переносчиков (постельный клещ, дождевые черви, тараканы и т. д.) (Е.И. Анисимова, А.М. Субботин, С.В. Полоз, 2013).

Профилактика для людей:

1) приготовление мясных блюд при достаточно высокой температуре (температура внутри кусочков мяса должна быть выше 67 ° С, микроволновая печь не убивает возбудителя);

2) тщательно мыть овощи и фрукты перед едой;

3) обрабатывать паром варочные поверхности и посуду после того как они были в контакте с сырыми фруктами, мясом или немытыми овощами;

4) беременным женщинам или людям с ослабленным иммунитетом следует избегать контакта с кошачьим туалетом, но если это не удается сделать, необходимо использовать перчатки и тщательно мыть руки после очистки кошачьего туалета .

5) Детские песочницы должны быть закрытыми для того, чтобы предотвратить свободный доступ кошек к песку, а, следовательно, не допустить дефекацию инфицированных кошек в песочницу


ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе я, поставленные цели и задачи, выполнил, а именно:

- Дал определение заболевания и привёл историческую справку о возбудителе;

- Описал морфологию и биологию возбудителя;

- Описал эпизоотологическую ситуацию по токсоплазмозу;

- Описал патогенез и клиническую картину;

- Описал патологоанатомические изменения;

- Описал методы диагностики токсоплазмоза;

- Раскрыл основные методы борьбы и профилактики с токсоплазмозом.

В ходе мной проделанной работы, можно предположить, что причинами распространения паразитарных заболеваний являются нарушение ветеринарных и зоогигиенических норм при содержании и кормлении животных.

---

Смотрите также файлы

• " Расчет электрического привода механизма подъема башенного крана".docx

• Тест начат 19052023, 13 11 Состояние Завершены.pdf

• В межрайонную ифнс россии 31 по Республике Башкортостан от Горбуновой Антонины Георгиевны.doc

• Реферат по дисциплине Физическая культура и спорт на тему Роль физической культуры и спорта в развитии общества.docx

• Практическое задание 16 Беспалова Е. А. Заполните таблицу Разделы клинической психологии.docx