ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 29.11.2023
Просмотров: 27
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
на качественный состав микрофлоры оказывает влияние различных факторы. в воду могут попадать патогенные микроорганизмы возбудителя дизентерии холеры гепатита А сальмонеллы летоспиры возбудители туляремии и другие. хотя вода не является благоприятной средой для размножения патогенных микроорганизмов они способны определённое время сохраняться в ней.
по характеру пользования выделяет питьевую воду централизованного и местного водоснабжения забором из открытых водоёмов или подземных источников воду плавательных бассейнах лёд медицинские хозяйственные и другие.
особого внимания санитарные точки зрения требует сточные воды.
основаниями для санитарного-микробиологических исследований воды являются:
-
выборы источника централизованного хозяйства на питьевого водоснабжения и контроль за ним -
контроль эффективности обеззараживание питьевой воды централизованного водоснабжения -
наблюдение за санитарной эпидемиологические состояния воды открытых водоёмов -
контроль эффективности обеззараживания воды плавательных бассейнов -
расследование водных вспышек инфекционных болезней
Требования к качеству воды и разных объектов методы исследования и критерии оценки результатов предоставленных в нормативных актах государственных стандартах ГОСТ санитарных правилах и нормах методических указаниях при исследовании воды централизованного водоснабжения руководствуется документами ГОСТ р51232-98 вода питьевая общие требования к организации методам контроля качества мук 4.2.1.018-01 санитарно микробиологический анализ питьевой воды СанПиН 2.1.4.1.074-01 питьевая в атаке гигиенические требования к качеству воды централизованного водоснабжения контроль качества.
Общие калиформные бактерии грамотрицательные оксиды отрицательные не образующие спор палочки способные расти на дифференциальных вакцизных средах ферментирующего актосной кислоты альдегиды и газа при температуре 37 + -1° c в течение 24-48 часов
термотолерантный калиморфные бактерии входят в число ОКБ обладает всеми их признаками кроме того способны ферментировать лактозы кислоты альдегиды и газы при температуре 44 + -0,5°c в течение 24 часов
сульфитредуцирующие клостридии анаэробные палочковидные микроорганизмы редуцирующие сульфат натрия на железо сульфид на макаре при температуре 44 + -1° в течение 16-18 часов
колифаги бактериальные вирусы способные лизировать e.coli формировать при температуре 37°c через 18-20 часов зоны лизиса бактериального газона бляшки на питательном агаре.
Отбор хранения транспортировка проб
Пробу отбирают стерильные ёмкости плотно закрытые пробками силиконовыми резиновыми или из других материалов и защищённые колпачками из плотной бумаги или алюминиевой фольгой.
если воду отбирают после обеззараживания химическими реагентами то для нейтрализации в ёмкость до стерилизации вносят натрия серного потокислый и с расчёта 10 мг на 500 мл воды.
при исследовании воды из распределительной сети отбор проб и с крана производят после его обжигания и последующего спуска воды не менее 10 минут на полностью открытом кране при отборе проб напор воды уменьшает водой воды набирают столько чтобы пространство между пробкой и поверхностью воды было достаточно пробка не должна смачиваться водой при транспортировке.
отобранную пробу маркирует заполняет направление с указанием места даты времени забора цели исследования фамилии специалистов отбиравшего пробы доставляет при температуре 4-10 градусов по Цельсия срок начала исследования от момента отбора проб не должен превышать 6 часов. если пробу нельзя охладить их исследовать в течение 2 часов после забора.
если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения анализ проводить нельзя.
Определение общего числа микроорганизмов
метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов способных на питать на магаре образовывать колоний при температуре 37° в течение 24 часов и видимые с увеличением в 2 раза.
из каждой пробы делают посев не менее двух объёмов по 1 мл глубинным методом.
пробы в отличие тщательно перемешивается и по 1 мл вносится в 200 стерильные чашки Петри слегка приоткрывая крышки в каждую чашку вливают расплавленные или остужённый питательный агар 45 49° c в количестве 12 мл на чашку диаметром 90-100 мм содержимое быстро перемешивается избегая образования пузырьков воздуха и попадания агара края и крышки чашки после застывания агара чашки помещают в термостат вверх дном и инкубирует при 37° 24 часа.
После термостатирования подсчитывают все выросшие колонии учитывает только те чашки на которых выросла не более 300 изолированных колоний.
количество колоний на обеих частях суммируют и делят на два находят среднее арифметическое.
результаты выражают числом колонии образующих единицы в одном миллилитре исследуемой воды.
если почёт кого они невозможен то в протоколе отмечает сплошной рост.
определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации
Метод основан на фильтрации установленного объёма воды через мембранные фильмы выращивание посевов на среди эндо и последующим идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.
при исследовании питьевой воды анализирует три объёма по 100 мл.
воду фильтрует через мембранный фильтры. Фильтры с помощью пломбированного пинцета осторожно переносит на среду эндо не переворачивая фильтр и избегая пузырьков между средой и фильтром.
чашки инкубируют при 37° 24 часа. если на фильтрах нет роста или вырос линии характерной колонии выдаёт отрицательный результат ОКБ и ТКБ не обнаружены в 100 мл.
если выросли колонии тёмно-красный красный с металлическим блеском или без него с отпечатком на обратной стороне фильтра отсчитывают число кого не каждого типа отдельно ставят тесты для определения ОКБ и ТКБ.
для подтверждения ОКБ исследуют не менее 3-4 колоний каждого типа. для подтверждения ТКБ следует все типичные колония но не более 10.
каждую колонии следует на оксидазную активность принадлежность к окраске по граму, ферментацию лактозы.
для определения оксидазной активности бумажки СИП-оксидаза смачивают дистиллированной водой. часть колонии стеклянной палочкой наносят на подготовленную фильтровальную бумагу штрихом.
Реакция считается положительной если в течение 1 минуты появятся синие фиолетово-коричневое окрашивание штриха. при отрицательной реакции цвета штриха не меняется.
при положительной реакции эту колонию из дальнейшего исследования исключают.
из оксидазоотрицательной колонии делают мазок окрашивают по Граму и микроскопируют. при наличии грамм отрицательных аспорогенных палочек определяют ферментацию лактозы. оставшуюся часть колонии засевают параллельно в две пробирки с лактозной средой. для подтверждения ОКБ инкубирует при 37°, 48 часов ТКБ 44° 24 часа.
первичный учёт возможен через 4-6 часов. при наличии кислоты и газа дают положительный ответ. при отсутствии кислоты и газа или при наличии только кислоты пробирки для окончательного ответа на ТКБ оставляют до 24 часов на ОКБ до 48 часов.
при отсутствии ОКБ и ТКБ на всех фильтрах результат выписывают не обнаружено КОЕ ОКБ в 100 мл и не обнаружено КОЕ ТКБ в 100 мл.
При подтверждении ОКБ и ТКБ колонии подсчитывают на всех фильтрах и выражает результат анализа в 100 мл воды.
вычисление производят по формуле x = a x 100 / v
где x - число колоний в 100 мл
V - профильтрованный объём воды через фильтр на который велся учёт
А - число подсчитанных на этих фильтрах колоний в сумме
определение ОКБ ТКБ титрационным методом
этот метод может быть использован
-
при отсутствии материалов и оборудования необходимых для выполнения анализа методом мембранной фильтрации -
при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ -
в случае преобладания в воде посторонной посторонний микрофлоры препятствующие получению на фильтрах изолированных колоний ОКБ
метод основан на накоплении бактерий после посева воды определённых объёмов жидкую питательную среду с последующим пересевом на среду эндо идентификации по культуральным и биохимическим свойствам. при исследовании воды качественным методом текущие надзор производственной контроль засевают 3 объёма по 100 мл.
при исследовании воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе производит посев три объёма по 100 мл три объёма по 10 мл три объёма по 1 мл
Каждый объём засевает в ЛПС лактозно-пептонную среду посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной ЛПС, посев 1 мл производит в 10 мл среды обычной концентрации посевы инкубируют при 37° 48 часов. через 24 часа проводит предварительный учёт. из ёмкости где есть рост и образования газа проводят высев из сектора среды эндо для получения изолированных колоний. на одной чашке делается посев не более чем из 3 объёмов.
ёмкости без наличия роста и газа оставляют в термостате и просматривают через 48 часов.
посевы без признаков роста считают отрицательным и дальнейшим исследованию не подлежат.
из ёмкости где отмечен рост делают высев из сектора среды эндо. посевы инкубируют при 37°, 18-20 часов.
при наличии роста нас среде и колонии типичных для лактозаположительных бактерий: тёмно-красных или красных с металлическим блеском или без него выпуклые с красным центром или отпечатком на питательной среде дают положительный ответ на присутствие ОКБ в данном объёме.
если в среде накопления отмечено только помутнение или принадлежность к лактозоположительным колония вызывается сомнение у исследователей то проводит подтверждающие тест оксидазный окраску по грамма расщепление лактозы до кислоты и газа.
Отрицательный ответ даёт если:
-
в среде накопления нет признаков роста -
на секторе и среды эндо нет роста -
на среди эндо выросли не характерные для калиморфных бактерий колонии -
все колонии оказались оксидазоложительными -
все колония оказались грамположительными -
если на среде с лактозой не отмечено газообразования.
при исследовании 3 объёмов по 100 мл результаты оцениваются качественно и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из 3 объёмов делается запись обнаружены в 100 мл
при исследовании количественным методом определяют наиболее верное число ОКБ и ТКБ по таблице отрицательном ответы наличие ОКБ во всех исследованных объёмах в этой заключении не обнаружено 100 мл
определение спор сульфитредуцирующих клостридий
метод основан на выращивание посева в железа сульфид на агаре в условиях приближённых к анаэробных и при подсчёте сват чёрных колоний
Пробу воды 20 мл прогревает на водяной бане в пробирках при температуре 75 + -5° c 15 минут для исключения вегетативных форм.
при исследовании хлорированной воды подогревании пробы можно не производить.
определение проводят методом фильтрования в пробирках методом фильтрования в чашках и методом прямого посева.
при определении прямым посевом стерильные пробирки вносят
-
по 10 мл в 2 стерильные пробирки или -
по 5 мл в 4 стерильные пробирки
посева засевают горчим железо-сульфитным агаром в количестве превышающем объём воды в два раза. среду заливает по стенке пробирки избегая образования пузырьков воздуха. после этого пробирки быстро охлаждают. посевы инкубируют при 44°с 16-18 часов.
учитывают те посевы где получены черные изолированные колонии.
результаты анализа выражают числом КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
при отсутствии роста чёрных колоний дают ответ не обнаружено в 20 мл воды.
определение колифагов
определение колифагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении колифагов в среде обогащения культуре E.Coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.Coli на питательном агаре.
Определение колифагов проводят прямым методом, качественным и количественным.