Файл: Устройство светового микроскопа и правила работы с ним.docx
ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 06.12.2023
Просмотров: 82
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Рисунок 4. Координатная шкала.
Координаты микрообъекта на препарате состоят из двух цифр, которые записываются через косую черту - значение по оси Х / значение по оси У (рис. 5).
Например: 7,6/10,8.
Рисунок 5. Определение координат микрообъекта.
4. Определение линейной меры микрообъекта с помощью координатного столика, препаратоводителя и шкалы нониуса.
Цель : Научиться определять размер объекта по шкале нониуса.
В лабораторных микроскопах, оснащенных координатным столиком, предусмотрена возможность определения линейных размеров (длины/ширины) микрообъектов с помощью шкалы нониуса. Допустимы точные измерения от 0,1мм и приблизительные – до 0.05 мм.
С этой целью в окулярные тубусы микроскопа должны быть установлены окуляры с перекрестием либо с указателем (поинтер). Аккуратно поворачивая винты координатного перемещения образца (коаксикальной рукоятки), добиваются совпадения точки измеряемого объекта, принимая ее за исходную точку отсчета, с перекрестием. При этом фиксируется показание шкалы нониуса.
Далее перемещением препаратоводителя по оси Х или по оси У (продольным либо поперечным перемещением) передвигаются к конечной точке отсчета, после чего устанавливают и фиксируют новые показания шкалы.
Подсчитав разность установленных показаний, находят соответствующие линейные размеры исследуемого объекта.
5. Измерение ширины и длины объекта с помощью окуляра-микрометра и объекта-микрометра.
Зачастую перед лаборантом также стоит задача установить линейные размеры отдельных микроэлементов и частиц исследуемого препарата. Для выполнения подобной задачи микроскоп необходимо оснастить специальным окуляром со шкалой или сеткой – окуляром-микрометром (рис.6), и калибровочной линейкой-слайдом – объектом-микрометром (рис.7). С помощью данных аксессуаров можно определить длину и ширину объекта в микрометрах (микронах).
*Заметка 1. Независимо от того, используется монокулярный, бинокулярный или тринокулярный микроскоп, для выполнения микрометрических измерений необходим лишь один микрометрический окуляр. Т.е. в случае бино- или тринонасадки, нет необходимости в установке еще одного микрометрического окуляра во второй окулярный тубус. Более того, это было бы даже серьезной ошибкой, так как не позволило бы лаборанту видеть единую цельную картинку шкалы.
Окуляр-микрометр представляет собой специальный окуляр, в котором в плоскости полевой диафрагмы окуляра (в плоскости промежуточного изображения) установлено дополнительное стеклышко с разметкой – шкалой для выполнения микрометрических измерений, вычисления длины и ширины частиц, величины зерна, глубины слоя (азотирования, цементации), размера микродефектов.
Рисунок 6.
Окуляр-микрометр
аппарат для определения размеров микроскоп, объектов. Представляет собой круглую стекляннуюпластинку со шкалой длиной 5 мм, разделенную на 50 делений (цена одного деления равна 10 мкм). Дляизмерения объекта нужно сделать следующее: 1) на диафрагму окуляра помещают О.-м. делениями вниз; 2) верхнюю линзу окуляра ввинчивают так, чтобы получилось хорошее изображение шкалы; 3) объект-микрометр(см.) располагают на столике микроскопа; 4) наблюдая в микроскоп, совмещают начальнуючерту шкал обоих микрометров; 5) находят совпадение линий на обеих шкалах и определяют цену деленияО.-м. - сколько делений О.-м. приходится на одно деление объект-микрометра (при данной оптике и длинетубуса); 6) измеряют объект, умножая число делений О.-м. на его цену. Если объектив или окуляр меняют, необходимо вновь рассчитать цену деления О.-м. по объект-микрометру.
Цена деления самого окуляра-микрометра составляет 0,1мм. При наблюдении же в микроскоп цена деления зависит от конкретной комбинации окуляра и объектива, а также от длины тубуса микроскопа. Так, в идеальных условиях при выборе 100х объектива мы бы получили цену деления 0,001мм (1 микрометр). Методом интерполяции нетрудно было бы получить, что:
-
100х объектив и 10х окуляр-микрометр => цена деления 0,001мм=1мкм -
40х объектив и 10х окуляр-микрометр => цена деления 0,0025мм -
20х объектив и 10х окуляр-микрометр => цена деления 0,005мм -
10х объектив и 10х окуляр-микрометр => цена деления 0,01мм -
4х объектив и 10х окуляр-микрометр => цена деления 0,025мм
Однако же, при производстве объективов принято считать допустимую погрешность увеличения в пределах 2-2.5%. Так, 100х объектив по факту может оказаться 97.5х или 102.5х. Но лаборанту не будет это известно до тех пор, пока не будет выполнена калибровка. По этой причине лаборанты вынуждены самостоятельно выполнять калибровку окуляра-микрометра для каждого объектива с помощью такого аксессуара, как объект-микрометр. И так как каждый объектив может иметь определенную погрешность увеличения, то ни о какой интерполяции на практике не может быть и речи.
Объект-микрометр представляет собой специальное предметное стекло (пластину) со шкалой. В большинстве случаев, шкала выполнена в виде линейки длиной 1мм, разделенной на десятые и сотые доли. Цена деления такой линейки равна 0.01мм. Но встречаются и модели с ценой 0.1мм, а также есть необычные калибровочные слайды со специальными оригинальными сетками, окружностями, перекрестиями и т.п.
Рисунок 7. Объект-микрометр - предметное стекло с микрометрической сеткой (калибровочная линейка), предназначенное для калибровки микроскопа либо цифровой камеры для микроскопа при вычислении линейных размеров объекта, исследуемого под микроскопом.
Итак, разместив объект-микрометр на предметном столике микроскопа, можно легко и просто выполнить калибровку окуляра-микрометра. Настроив резкость (фокус) при заданном объективе в микроскопе четко видны две сетки: сетка окуляра-микрометра и сетка объекта-микрометра. Поворачивая окуляр-микрометр в окулярном тубусе, и перемещая калибровочный слайд в плоскости предметного столика с помощью препаратоводителя, необходимо добиться того, чтобы штрихи-деления сеток окуляра и калибровочной линейки находились параллельно друг другу (рис.8).
Рисунок 8. Штрихи-деления сеток окуляра (окуляр-микрометр) и калибровочной линейки (объект-микрометр).
Определив, сколько делений шкалы объекта-микрометра укладывается в шкале окуляра-микрометра для объективов большого и среднего увеличения, или, наоборот, для объективов малого увеличения, можно вычислить и непосредственно цену деления окуляра-микрометра по совершенно несложной математической формуле:
Цок= N*Цоб/K,
где Цок - цена деления окуляра-микрометра, Цоб – цена деления объектива-микрометра, N – число делений объектива-микрометра, K – число делений окуляра-микрометра.
Если лаборант все время работает за одним микроскопом, то ему вполне достаточно единожды выполнить подобную поверку-калибровку для каждого объектива, запротоколировать у себя полученные данные и использовать их в дальнейшем.
*Заметка 2. Учтите, что в случае, если микроскоп оснащен специальными объективами с механизмом коррекции на толщину покровного стекла, то все сравнительные микроскопические измерения следует выполнять при одинаковой настройке такого корректирующего устройства.
*Заметка 3. Кстати, определять линейные размеры микроэлементов образца также можно и с помощью специальной цифровой камеры для микроскопа и соответствующего программного обеспечения. Объект-микрометр также используется для калибровки цифровой камеры для каждого объектива отдельно согласно инструкции к камере.
Задание для самоподготовки.
-
Изучить теоретический материал изложенный в данных МУ. -
Подготовить ответы на следующие вопросы:-
Что такое микроскоп? -
Что такое «разрешающая способность»? -
Что такое «полезное» и «бесполезное» увеличения микроскопа? -
Основные части оптической системы микроскопа, их функции. -
Основные части механической системы микроскопа, их функции. -
Как определить «общее увеличение микроскопа»? -
Что такое окуляр-микрометр и объект-микрометр? Их назначение.
-
-
Оформить протокол лабораторной работы.