ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 11.12.2023
Просмотров: 92
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент научно-технологической политики и образования Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Костромская государственная сельскохозяйственная академия» Факультет ветеринарной медицины и зоотехнии Специальность 36.05.01 «Ветеринария»Кафедра эпизоотологии, паразитологии и микробиологииКонтрольная работа по дисциплине «Вирусология и биотехнология»Выполнила: студентка 4 группы 541-Z Специальность «Ветеринария» Суворов Анатолий Вячеславович Проверил: д.в.н., профессор Василий Владимирович Бурдейный КАРАВАЕВО 2021 Шифр: 170745Вопросы86.Технологические основы производства и получения иммунологических гамма-глобулинов…………………………………………………………………347. Общие принципы лабораторной диагностике при вирусных инфекциях...410. Особенности репродукции РНК - и ДНК-содержащих вирусов…………1028. Культивирование вирусов на естественно восприимчивых и лабораторных животных………………………………………………………….864.Уличный и фиксированный вирус бешенства. Лабораторная диагностика при бешенстве……………………………………………………………………12Список использованной литературы…………………………………………...1486. Технологические основы производства и получения иммунологических гамма-глобулиновВетеринарные гамма-глобулиновые препараты представляют собою искусственную концентрированную фракцию g-глобулинов нормальных сывороток, которая для повышенной активности усиливается специфическими иммуноглобулинами из сыворотки гиперим- мунизированных животных-доноров. Например, гамма-глобулин КРС на 90 % происходит из нормальных сывороток здоровых убойных животных и на 10 % из иммунных сывороток КРС, специфичных иммунизированных против стрептококков, сальмонеллеза, пастереллеза, колибактерий, микоплазм, возбудители вирусной диареи, парагриппа- 3 и т. д. Иногда в этот препарат включают колостральный иммуноглобулин. Глобулиновую фракцию сывороток получают с помощью осаждения нейтральной солью.
Предназначенные для очистки осаждением нормальные и гипериммунные сыворотки КРС установлен на pH 6,9-7,3 и добавляют к ним концентрированный раствор сернокислого аммония до 35-38- процентного насыщения. Через 48 часов выпавшие в осадок глобулины собирают, центрифугируют, ресуспендируют в 5 % растворе хлористого натрия и диализируют в диализационных трубках против проточной воды до полного освобождения от сульфата (3-5дней). Для повышенной степени чистоты глобулина можно провести повторное осаждение сульфатом аммония. После диализа смешивают предусмотренные для одной партии компоненты и концентрируют препарат в циркулярном выпарном аппарате до содержания глобулина 10 %. После установления изотоничности, pH (6,8-7,4) и содержания фенола (0,5 %) препарат фильтруют в стерильных условиях и разливают по флаконам [7].47. Общие принципы лабораторной диагностике при вирусных инфекциях.С целью лабораторной диагностики вирусных инфекций используют три группы методов:
Вирусологический метод. Основан на культивировании вирусов на чувствительных клеточных системах (культуре клеток, курином эмбрионе, лабораторных животных):
2. Проникновение вируса в клетку может идти двумя путями: виропексиса и слияния вирусной и клеточной мембран.При виропексисе (эндоцитозе) происходит инвагинация участка клеточной мембраны, образование внутриклеточной вакуоли, а далее вакуоль с вирусом может попадать в разные участки цитоплазмы или в ядро клетки.Процесс слияния осуществляется с помощью вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочек, которые сливаются с плазматической мембраной клетки хозяина.У парамиксовирусов имеется специальный F-белок, вызывающий слияние клеточных и вирусных мембран. Сходные белки имеются у других вирусов. У вируса гриппа это гемагглютин, который обусловливает адсорбцию его на мембране клетки.3. «Раздевание» вирионов или депротеинизация – это процесс освобождения нуклеиновой кислоты вируса от окружающей ее оболочки с последующим проникновением ее в цитоплазму или в ядро клетки. «Раздевание» вириона начинается сразу же после его прикрепления к клеточным рецепторам и продолжается в эндоцитарной вакуоли, а также в ядерных порах и околоядерном пространстве.4. Биосинтез компонентов вирусов. Нуклеиновая кислота, проникшая в клетку, несет генетическую информацию, которая конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных систем, подавляет метаболизм клетки и заставляет ее синтезировать вирусные белки и нуклеиновые кислоты, которые идут на построение вирусного потомства.Так как генетический аппарат вирусов различен, то передача наследственной информации и синтез ДНК и РНК отличаются.При инфицировании ДНК-содержащим вирусом идет транскрипция ДНК-вируса на иРНК с помощью ДНК-зависимой РНК полимеразы, которая может быть вирусной при репродукции его в цитоплазме или клеточной, если это происходит в ядре (аденовирусы и др.). Причем, если это происходит в цитоплазме (поксвирусы), то вирусная РНК-полимераза считывает часть ДНК-генома и запускает синтез мРНК, а она – образование первичных ферментов для репликации вирусной ДНК. Эти ферменты индуцируют считывание второй части исходной ДНК – появляется «поздняя» мРНК, обеспечивающая синтез структурных белков.При инфицировании РНК-содержащим вирусом РНК синтезируется с помощью РНК-полимеразы на матрице вирусной РНК; синтез вирусных белков происходит в цитоплазме, а РНК в ядре или в цитоплазме (пикорнавирусы, тогавирусы).
Для (+) РНК-нитевых вирусов (флави-, пикорна-, тогавирусы) функцию информационной РНК выполняет сам геном, который является матрицей для новых молекул РНК, на основе которых в рибосомах синтезируются вирусные белки.У (-) РНК-вирусов (орто-, парамиксо-, рабдовирусы) геном не выполняет функцию информационной РНК, не обладает инфекционностью, но вирусы имеют РНК-полимеразы, необходимые для синтеза РНК, комлементарных геному, т.е. мРНК, которые обеспечивают синтез вирусных белков.Иначе осуществляется репликация РНК-содержащих ретровирусов (онкогенные, ВИЧ), в составе которых есть обратная транскриптаза или ревертаза- способен индуцировать синтез цепи вирусной ДНК на матрице вирусной РНК. Этот процесс называется обратной транскрипцией. На матрице одной ДНК-цепи синтезируется комплементарная ей вторая; образовавшаяся двунитевая ДНК переносится в ядро. Клеточная ДНК подвергается сплайсингу (под влиянием эндонуклеаз) с образованием рекомбинантов с этой вирусной ДНК. Возникает ДНК-провирус. С помощью клеточной ДНК-зависимой РНК-полимеразы интегрированный в ДНК клетки ДНК-провирус считывается с последующим синтезом вирусных (+)РНК и мРНК, которые определяют образование вирусных структурных белков и ферментов. Продолжающийся синтез цепей ДНК обеспечивает новые вирионы геномом.Затем происходит самосборка и выход вирусных частиц [5].28. Культивирование вирусов на естественно восприимчивых и лабораторных животных.Вирусы различных групп могут быть культивированы в организме восприимчивых домашних или лабораторных животных. Наиболее широко, втом числе в лабораторных условиях, применяют культивирование вирусов набелых крысах, кроликах, белых мышах, хомяков, цыплят. У молодых мышейэкспериментально воспроизводят грипп, флавивирусные инфекции, ящур и т .д. Они восприимчивы ко многим вирусам, их легко разводить и с ними удобноработать. Лучше использовать мышей инбредных линий, так как они почтиодинаково реагируют на тот или иной вирус. У крыс так же создают инбредные линии, но эти животные более устойчивы к определенным вирусным инфекциям, чем мыши. Онкогенность некоторых вирусов широко изучают на золотистых хомячках. Ту или иную инфекцию иногда изучают на животных нескольких видов, обладающих разной чувствительностью к данному вирусу, что позволяет дифференцировать вирусы, вызывающие клинически сходные симптомы болезни (например, ящур, везикулярный стоматит, везикулярная экзантема и везикулярная болезнь свиней).
Предназначенные для очистки осаждением нормальные и гипериммунные сыворотки КРС установлен на pH 6,9-7,3 и добавляют к ним концентрированный раствор сернокислого аммония до 35-38- процентного насыщения. Через 48 часов выпавшие в осадок глобулины собирают, центрифугируют, ресуспендируют в 5 % растворе хлористого натрия и диализируют в диализационных трубках против проточной воды до полного освобождения от сульфата (3-5дней). Для повышенной степени чистоты глобулина можно провести повторное осаждение сульфатом аммония. После диализа смешивают предусмотренные для одной партии компоненты и концентрируют препарат в циркулярном выпарном аппарате до содержания глобулина 10 %. После установления изотоничности, pH (6,8-7,4) и содержания фенола (0,5 %) препарат фильтруют в стерильных условиях и разливают по флаконам [7].47. Общие принципы лабораторной диагностике при вирусных инфекциях.С целью лабораторной диагностики вирусных инфекций используют три группы методов:
-
Быстрые (экспресс) методы – прямое обнаружение возбудителя в клиническом материале (от больного). -
Вирусологический метод – выделение вируса из клинического материала и его идентификация. -
Серологический метод – определение прироста (динамики) антител к вирусу (за определенный период заболевания) в парных сыворотках больного.
Вирусологический метод. Основан на культивировании вирусов на чувствительных клеточных системах (культуре клеток, курином эмбрионе, лабораторных животных):
-
Забор исследуемого материала. -
Выбор и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности. -
Заражение ее по принципу цитотропизма. -
Индикация (обнаружение) вируса. -
Идентификация вируса проводится на основании:
2. Проникновение вируса в клетку может идти двумя путями: виропексиса и слияния вирусной и клеточной мембран.При виропексисе (эндоцитозе) происходит инвагинация участка клеточной мембраны, образование внутриклеточной вакуоли, а далее вакуоль с вирусом может попадать в разные участки цитоплазмы или в ядро клетки.Процесс слияния осуществляется с помощью вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочек, которые сливаются с плазматической мембраной клетки хозяина.У парамиксовирусов имеется специальный F-белок, вызывающий слияние клеточных и вирусных мембран. Сходные белки имеются у других вирусов. У вируса гриппа это гемагглютин, который обусловливает адсорбцию его на мембране клетки.3. «Раздевание» вирионов или депротеинизация – это процесс освобождения нуклеиновой кислоты вируса от окружающей ее оболочки с последующим проникновением ее в цитоплазму или в ядро клетки. «Раздевание» вириона начинается сразу же после его прикрепления к клеточным рецепторам и продолжается в эндоцитарной вакуоли, а также в ядерных порах и околоядерном пространстве.4. Биосинтез компонентов вирусов. Нуклеиновая кислота, проникшая в клетку, несет генетическую информацию, которая конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных систем, подавляет метаболизм клетки и заставляет ее синтезировать вирусные белки и нуклеиновые кислоты, которые идут на построение вирусного потомства.Так как генетический аппарат вирусов различен, то передача наследственной информации и синтез ДНК и РНК отличаются.При инфицировании ДНК-содержащим вирусом идет транскрипция ДНК-вируса на иРНК с помощью ДНК-зависимой РНК полимеразы, которая может быть вирусной при репродукции его в цитоплазме или клеточной, если это происходит в ядре (аденовирусы и др.). Причем, если это происходит в цитоплазме (поксвирусы), то вирусная РНК-полимераза считывает часть ДНК-генома и запускает синтез мРНК, а она – образование первичных ферментов для репликации вирусной ДНК. Эти ферменты индуцируют считывание второй части исходной ДНК – появляется «поздняя» мРНК, обеспечивающая синтез структурных белков.При инфицировании РНК-содержащим вирусом РНК синтезируется с помощью РНК-полимеразы на матрице вирусной РНК; синтез вирусных белков происходит в цитоплазме, а РНК в ядре или в цитоплазме (пикорнавирусы, тогавирусы).
Для (+) РНК-нитевых вирусов (флави-, пикорна-, тогавирусы) функцию информационной РНК выполняет сам геном, который является матрицей для новых молекул РНК, на основе которых в рибосомах синтезируются вирусные белки.У (-) РНК-вирусов (орто-, парамиксо-, рабдовирусы) геном не выполняет функцию информационной РНК, не обладает инфекционностью, но вирусы имеют РНК-полимеразы, необходимые для синтеза РНК, комлементарных геному, т.е. мРНК, которые обеспечивают синтез вирусных белков.Иначе осуществляется репликация РНК-содержащих ретровирусов (онкогенные, ВИЧ), в составе которых есть обратная транскриптаза или ревертаза- способен индуцировать синтез цепи вирусной ДНК на матрице вирусной РНК. Этот процесс называется обратной транскрипцией. На матрице одной ДНК-цепи синтезируется комплементарная ей вторая; образовавшаяся двунитевая ДНК переносится в ядро. Клеточная ДНК подвергается сплайсингу (под влиянием эндонуклеаз) с образованием рекомбинантов с этой вирусной ДНК. Возникает ДНК-провирус. С помощью клеточной ДНК-зависимой РНК-полимеразы интегрированный в ДНК клетки ДНК-провирус считывается с последующим синтезом вирусных (+)РНК и мРНК, которые определяют образование вирусных структурных белков и ферментов. Продолжающийся синтез цепей ДНК обеспечивает новые вирионы геномом.Затем происходит самосборка и выход вирусных частиц [5].28. Культивирование вирусов на естественно восприимчивых и лабораторных животных.Вирусы различных групп могут быть культивированы в организме восприимчивых домашних или лабораторных животных. Наиболее широко, втом числе в лабораторных условиях, применяют культивирование вирусов набелых крысах, кроликах, белых мышах, хомяков, цыплят. У молодых мышейэкспериментально воспроизводят грипп, флавивирусные инфекции, ящур и т .д. Они восприимчивы ко многим вирусам, их легко разводить и с ними удобноработать. Лучше использовать мышей инбредных линий, так как они почтиодинаково реагируют на тот или иной вирус. У крыс так же создают инбредные линии, но эти животные более устойчивы к определенным вирусным инфекциям, чем мыши. Онкогенность некоторых вирусов широко изучают на золотистых хомячках. Ту или иную инфекцию иногда изучают на животных нескольких видов, обладающих разной чувствительностью к данному вирусу, что позволяет дифференцировать вирусы, вызывающие клинически сходные симптомы болезни (например, ящур, везикулярный стоматит, везикулярная экзантема и везикулярная болезнь свиней).