ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 10.01.2024
Просмотров: 194
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
РАЗДЕЛ VlСАНИТАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯГЛАВА 11ОСНОВЫ САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ11.1. Санитарно-микробиологическое исследование:Санитарная микробиология — наука о микрофлоре окружающей среды (воды, воздуха, почвы и др.) и связанных с ней процессах, которые могут оказывать неблагоприятное влияние на здоровье людей.С помощью санитарно-микробиологических исследований решают вопрос о наличии или степени вероятности присутствия опасных для человека микробов или их токсинов в объектах внешней среды (воде, воздухе, почве, пищевых продуктах, лекарствах, различных материалах, оборудовании и др.).Комплексное санитарно-микробиологическое исследование включает: определение косвенных показателей неблагополучия — общей микробной обсемененности (микробного числа), титра или индекса санитарно-показательных микробов, степени микробной порчи; реже прямых — обнаружение патогенных микробов или их токсинов в объекте.Микробным числом называют количество микробов в 1 мл жидкости, 1 г твердого вещества или 1 кубометре воздуха. Для определения делают мерные посевы материала на питательный агар с подсчетом выросших колоний (1 колонию обычно образует 1 клетка). Результат выражают в колониеобразующих единицах — КОЕ/мл, КОЕ/г или КОЕ/м3. Если, например, на чашке с посевом 1 мл воды, разведенной 1:1000, выросло 120 колоний, то микробное число составляет 1,2 • 105 КОЕ/мл. В соответствии с принятым стандартом (ГОСТом) водопроводная вода должна иметь микробное число менее 50. Микробное число почвы определяют аналогично после посевов 10-кратных разведений почвенной суспензии.Санитарно-показательными называют микробы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры тела человека и служат показателями санитарного неблагополучия объекта, т. е. его загрязнения выделениями человека. В качестве санитарно-показательных выбраны микробы, отвечающие следующим требованиям:постоянно и в больших количествах присутствующие в выделениях человека и ограниченного круга теплокровных животных;не имеющие других природных резервуаров или естественных сред обитания;сохраняющиеся в объектах в течение определенных сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов;не размножающиеся (интенсивно) в объектах внешней среды;
легко идентифицируемые, поддающиеся количественному определению.Например, основной показатель фекального загрязнения почвы, пищевых продуктов, рук, спецодежды персонала, воды, лабораторной посуды, предметов обихода, лекарственных средств — бактерии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бактерии. Воздух оценивают по содержанию стафилококков и стрептококков, попадающих в него вместе с другими микробами из дыхательных путей и полости рта человека. К СПМ относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги). В ходе оценки состояния объекта определяют индекс — количество СПМ в единице объема (1 литр, 1 г или 1 кубометр) материала или титр — наименьший объем (в мл), или весовое количество (в г) материала, в котором еще обнаруживаются санитарно-показательные микробы.Например, основной показатель фекального загрязнения — колиформные бактерии, их определение проводят в смывах с рук, спецодежды персонала, лабораторной посуды, в нестерильных лекарственных формах, инъекционных растворах и глазных каплях до стерилизации. Воздух оценивают по содержанию золотистого стафилококка, попадающего в него из верхних дыхательных путей, ротовой полости. Его считают показателем капельного загрязнения воздуха. Другими микробами, отражающими санитарное неблагополучие того или иного объекта, являются дрожжевые и плесневые грибы, синегнойная палочка, сальмонеллы.Точность санитарно-микробиологических исследований обеспечивается: правильным отбором, хранением и транспортировкой проб в лабораторию, использованием стандартных методов, комплексностью исследования и его повторностью.11.1.1. ВодаСреди объектов, подлежащих микробиологическому контролю, важное место отводится исследованию воды. Микробное загрязнение воды более опасно, по сравнению с химическим, так как при отсутствии у воды органолептических признаков загрязнения могут возникать массовые заражения, имеющие тяжелые последствия. В этой связи, например, для питьевой воды не устанавливают нижнего переносимого предела (ПДК, как принято для химических веществ), а считают, что она должна быть свободна от патогенов.В соответствии с действующими нормативными документами контролю подлежат:вода питьевая (централизованного и местного водоснабжения, т.е. из водопровода, колодцев, родников и скважин);
Пробы воды очищенной для приготовления инъекционных растворов и глазных капель отбирают в стерильные флаконы в количестве 20 мл непосредственно из баллона сразу же после перегонки или из сосудов, в которых вода стерилизуется.Методика исследования. Общее микробное число. ОМЧ — количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий в 1 см3 (1 мл) воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным питательным агаром (метод глубинного посева). Инкубируют при 37 °С 24 ч, после чего при комнатной температуре еще 24 ч. Подсчитывают на 2-х чашках число выросших колоний (на поверхности и в глубине питательного агара) и рассчитывают среднее арифметическое значение. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов исследуемую воду засевают по 0,5 мл на среду Сабуро и инкубируют при комнатной температуре в течение 3 — 4 сут. Подсчитывают число выросших колоний и также рассчитывают среднее арифметическое. Результат (ОМЧ) вычисляют путем суммирования среднего арифметического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов и выражают в КОЕ/мл.Определение колиформных бактерий. Присутствие колиформных бактерий также определяют в воде всех видов. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при 37 °С в течение 24 — 48 ч (или сбраживающие глюкозу с образованием кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24 ч). Термотолерантные колиформные бактерии обладают теми же характеристиками, но дополнительно сбраживают лактозу с образованием кислоты и газа при 44,5 °С через 24 ч. Термотолерантные колиформные бактерии быстро отмирают во внешней среде, поэтому их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.Для определения колиформных бактерий в питьевой воде и воде очищенной используют метод мембранных фильтров. Исследуемую воду (3 по 100 мл) пропускают через 3 бактериальных фильтра из нитроцеллюлозы, которые затем помещают на среду Эндо и инкубируют при 37 °С 24 ч. Подсчитывают количество вы-росших на фильтрах лактозоположительных колоний, идентифицированных как колиформные бактерии.Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофагов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхностных источников и питьевой воде, подготовленной из нее, а также в сточных водах. Они являются индикаторами эффективности охраны грунтовых вод и очистки питьевой воды. Исследование проводят методом агаровых слоев по Грациа. Для титрования колифагов исследуемую воду смешивают с расплавленным и остуженным питательным агаром, куда вносят также индикаторный штамм Е. coli. Полученную смесь выливают вторым слоем на питательный агар в чашке Петри и после застывания среды чашку инкубируют при 37 °С 24 ч. В результате индикаторная культура образует равномерный сплошной рост, а при наличии колифагов в этом «газоне» образуются прозрачные бляшки («негативные колонии» бактериофага). Результат исследования выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ/мл).
Определение спор сульфитредуцирующих клостридий. Присутствие спор сульфитредуцирующих клостридий определяют в воде для оценки эффективности работы сооружений по подготовке питьевой воды. Для этого испытуемую воду вносят в расплавленную и остуженную среду Вильсона —Блера. Среда содержит тиосульфат (гипосульфит) и бесцветную соль железа. В результате прорастания спор, размножения клостридий и восстановления ими сульфита образуется сульфид железа, который придает среде черный цвет.При использовании воды из поверхностных водоисточников, а также в крупных населенных пунктах питьевую воду исследуют ежедневно. В случае повторного обнаружения колиформных бактерий и/или колифагов проводят определение в воде возбудителей бактериальных и вирусных кишечных инфекций.Ввиду того что очистка и обеззараживание воды, а также существующие методы санитарно-микробиологического исследования воды по ряду причин могут быть неэффективными, наилучшим способом обеспечения безопасности воды считается охрана водоисточников от микробного загрязнения.11.1.2. ПочваЗнания состава и значения микрофлоры почвы для человека, влияния на нее различных условий необходимы для корректной санитарно-микробиологической оценки почв (в плане ее эпидемической безопасности).Санитарно-микробиологическое исследование почвы регламентируется инструкциями по предупредительному и текущему санитарному надзору.Предупредительный надзор осуществляют:а) при планировке, строительстве и реконструкции вновь заселяемых участков и населенных мест;б) при выборе участков для строительства лечебно-профилактических и аптечных учреждений, санаториев, детских учреждений;в) при решении вопросов водоснабжения и канализации населенных территорий;г) при санитарной оценке пляжей, мест коллективного отдыха и т.д.Текущий санитарный надзор осуществляют:а) при оценке санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению после загрязнений (например, почву детских садов, больниц, зон отдыха исследуют 2 раза в год);б) при контроле за почвенными и биотермическими методами обезвреживания сточных вод и отбросов (1—4 раза в месяц); Т а б л и ц а 11.2
легко идентифицируемые, поддающиеся количественному определению.Например, основной показатель фекального загрязнения почвы, пищевых продуктов, рук, спецодежды персонала, воды, лабораторной посуды, предметов обихода, лекарственных средств — бактерии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бактерии. Воздух оценивают по содержанию стафилококков и стрептококков, попадающих в него вместе с другими микробами из дыхательных путей и полости рта человека. К СПМ относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги). В ходе оценки состояния объекта определяют индекс — количество СПМ в единице объема (1 литр, 1 г или 1 кубометр) материала или титр — наименьший объем (в мл), или весовое количество (в г) материала, в котором еще обнаруживаются санитарно-показательные микробы.Например, основной показатель фекального загрязнения — колиформные бактерии, их определение проводят в смывах с рук, спецодежды персонала, лабораторной посуды, в нестерильных лекарственных формах, инъекционных растворах и глазных каплях до стерилизации. Воздух оценивают по содержанию золотистого стафилококка, попадающего в него из верхних дыхательных путей, ротовой полости. Его считают показателем капельного загрязнения воздуха. Другими микробами, отражающими санитарное неблагополучие того или иного объекта, являются дрожжевые и плесневые грибы, синегнойная палочка, сальмонеллы.Точность санитарно-микробиологических исследований обеспечивается: правильным отбором, хранением и транспортировкой проб в лабораторию, использованием стандартных методов, комплексностью исследования и его повторностью.11.1.1. ВодаСреди объектов, подлежащих микробиологическому контролю, важное место отводится исследованию воды. Микробное загрязнение воды более опасно, по сравнению с химическим, так как при отсутствии у воды органолептических признаков загрязнения могут возникать массовые заражения, имеющие тяжелые последствия. В этой связи, например, для питьевой воды не устанавливают нижнего переносимого предела (ПДК, как принято для химических веществ), а считают, что она должна быть свободна от патогенов.В соответствии с действующими нормативными документами контролю подлежат:вода питьевая (централизованного и местного водоснабжения, т.е. из водопровода, колодцев, родников и скважин);
вода плавательных бассейнов;
вода открытых водоемов (из рек, водохранилищ);
сточные воды;
вода, очищенная для приготовления лекарств;
вода для приготовления инъекционных растворов и глазных капель.
Предупредительный надзоросуществляют:
при решении вопросов водоснабжения и канализации населенных территорий;
при санитарной оценке бассейнов, пляжей, мест коллективного отдыха и т.д.
Текущий санитарный надзоросуществляют:
при оценке качества питьевого водоснабжения населенных мест;
при оценке санитарного состояния поверхностных вод для установления степени влияния биологической контаминации на способность воды к самоочищению;
при контроле над обезвреживанием сточных вод;
по эпидемическим показаниям для выяснения возможного пути передачи инфекционных заболеваний (проводят обнаружение санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов).
Контроль воды осуществляют в соответствии с имеющимися нормативами (табл. 11.1).
Отбор проб. Пробы воды питьевой из разводящей сети городского водопровода отбирают работники центра госсанэпиднадзора. Для отбора проб используют стерильные флаконы емкостью 500 мл с притертой резиновой, корковой или каучуковой пробкой. Предварительно проводят обжигание кранов пламенем горящего тампона, смоченного спиртом, и спускают воду в течение 10—15 мин при полностью открытом кране. Бумажный колпачок с пробкой снимают с флакона непосредственно перед ее заполнением, не касаясь руками горлышка флакона и пробки.
Пробы воды из бассейнов в ходе их эксплуатации отбирают не менее чем в двух точках (глубокой и мелкой части) с 25 — 30 см от поверхности в количестве одного литра один раз в месяц.
Пробы воды очищенной, используемой для приготовления лекарственных форм (кроме лекарств для инъекций и глазных капель) отбирают в количестве 500 мл в стерильные бутылки, закрытые ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, у которой предварительно обжигают кончик с помощью ватного тампона, смоченного спиртом.
Т а б л и ц а 11.1
| Требования к микробиологической чистоте воды | |||
| Наименование объекта контроля | Определяемые показатели микробиологической чистоты | Требование | Нормативный документ |
| Вода питьевая | 1. Микробное число (КОЕ/мл) | Не более 50 | СанПиН 2.1.4.559-96 |
| 2 — 3. Общие и термотолерантные колиформные бактерии (в 3 пробах по 100 мл воды) | Отсутствие | ||
| 4. Колифаги (в 100 мл воды) | « | ||
| 5. Споры сульфитредуцирующих клостридий (в 20 мл воды) | « | ||
| Вода плавательных бассейнов | 1. Микробное число (КОЕ/мл) | Не более 1000 | СанПиН 2.1.2.568-96 |
| 2. Представители Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus | Отсутствие | ||
| 3. Колифаги (БОЕ/ 100 мл воды) | Не более 2 | ||
| 4. Патогенные микроорганизмы | Отсутствие | ||
| Вода очищенная | 1. Микробное число (КОЕ/мл) | Не более 100 | ФС42-2619-97 |
| 2. Представители Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus | Отсутствие | ||
| Вода для инъекционных растворов | Микробное число (КОЕ/мл) | Не более 15 (обеспечивает апирогенность) | ФС42-2620-97 |
Пробы воды очищенной для приготовления инъекционных растворов и глазных капель отбирают в стерильные флаконы в количестве 20 мл непосредственно из баллона сразу же после перегонки или из сосудов, в которых вода стерилизуется.Методика исследования. Общее микробное число. ОМЧ — количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий в 1 см3 (1 мл) воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным питательным агаром (метод глубинного посева). Инкубируют при 37 °С 24 ч, после чего при комнатной температуре еще 24 ч. Подсчитывают на 2-х чашках число выросших колоний (на поверхности и в глубине питательного агара) и рассчитывают среднее арифметическое значение. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов исследуемую воду засевают по 0,5 мл на среду Сабуро и инкубируют при комнатной температуре в течение 3 — 4 сут. Подсчитывают число выросших колоний и также рассчитывают среднее арифметическое. Результат (ОМЧ) вычисляют путем суммирования среднего арифметического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов и выражают в КОЕ/мл.Определение колиформных бактерий. Присутствие колиформных бактерий также определяют в воде всех видов. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при 37 °С в течение 24 — 48 ч (или сбраживающие глюкозу с образованием кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24 ч). Термотолерантные колиформные бактерии обладают теми же характеристиками, но дополнительно сбраживают лактозу с образованием кислоты и газа при 44,5 °С через 24 ч. Термотолерантные колиформные бактерии быстро отмирают во внешней среде, поэтому их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.Для определения колиформных бактерий в питьевой воде и воде очищенной используют метод мембранных фильтров. Исследуемую воду (3 по 100 мл) пропускают через 3 бактериальных фильтра из нитроцеллюлозы, которые затем помещают на среду Эндо и инкубируют при 37 °С 24 ч. Подсчитывают количество вы-росших на фильтрах лактозоположительных колоний, идентифицированных как колиформные бактерии.Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофагов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхностных источников и питьевой воде, подготовленной из нее, а также в сточных водах. Они являются индикаторами эффективности охраны грунтовых вод и очистки питьевой воды. Исследование проводят методом агаровых слоев по Грациа. Для титрования колифагов исследуемую воду смешивают с расплавленным и остуженным питательным агаром, куда вносят также индикаторный штамм Е. coli. Полученную смесь выливают вторым слоем на питательный агар в чашке Петри и после застывания среды чашку инкубируют при 37 °С 24 ч. В результате индикаторная культура образует равномерный сплошной рост, а при наличии колифагов в этом «газоне» образуются прозрачные бляшки («негативные колонии» бактериофага). Результат исследования выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ/мл).
Определение спор сульфитредуцирующих клостридий. Присутствие спор сульфитредуцирующих клостридий определяют в воде для оценки эффективности работы сооружений по подготовке питьевой воды. Для этого испытуемую воду вносят в расплавленную и остуженную среду Вильсона —Блера. Среда содержит тиосульфат (гипосульфит) и бесцветную соль железа. В результате прорастания спор, размножения клостридий и восстановления ими сульфита образуется сульфид железа, который придает среде черный цвет.При использовании воды из поверхностных водоисточников, а также в крупных населенных пунктах питьевую воду исследуют ежедневно. В случае повторного обнаружения колиформных бактерий и/или колифагов проводят определение в воде возбудителей бактериальных и вирусных кишечных инфекций.Ввиду того что очистка и обеззараживание воды, а также существующие методы санитарно-микробиологического исследования воды по ряду причин могут быть неэффективными, наилучшим способом обеспечения безопасности воды считается охрана водоисточников от микробного загрязнения.11.1.2. ПочваЗнания состава и значения микрофлоры почвы для человека, влияния на нее различных условий необходимы для корректной санитарно-микробиологической оценки почв (в плане ее эпидемической безопасности).Санитарно-микробиологическое исследование почвы регламентируется инструкциями по предупредительному и текущему санитарному надзору.Предупредительный надзор осуществляют:а) при планировке, строительстве и реконструкции вновь заселяемых участков и населенных мест;б) при выборе участков для строительства лечебно-профилактических и аптечных учреждений, санаториев, детских учреждений;в) при решении вопросов водоснабжения и канализации населенных территорий;г) при санитарной оценке пляжей, мест коллективного отдыха и т.д.Текущий санитарный надзор осуществляют:а) при оценке санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению после загрязнений (например, почву детских садов, больниц, зон отдыха исследуют 2 раза в год);б) при контроле за почвенными и биотермическими методами обезвреживания сточных вод и отбросов (1—4 раза в месяц); Т а б л и ц а 11.2
| Требования к микробиологической чистоте почв | ||||
| Категория почвы | Титр БГКП* | Титр нитрифицирующих бактерий | Титр клостридий | Индекс термофильных микроорганизмов** |
| Чистая | ≥1,0 | ≥0,1 | ≥0,001 | 102-103 |
| Загрязненная | 0,9-0,01 | 0,09-0,001 | 0,009-0,0001 | 103-105 |
| Сильно загрязненная | ≤0,0009 | ≤0,0009 | ≤0,00009 | 1 • 105—4 • 106 |