ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.02.2024
Просмотров: 28
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Микрофлора тела человека
Кафарская Л.И.
Роль нормальной микрофлоры
•
Микрофлора играет важную роль в
поддержании здоровья на
оптимальном уровне.
•
В настоящее время микрофлора
рассматривается как метаболически
активный орган.
•
Микрофлора и слизистые находятся в
тесном взаимодействии, оказывая
взаимное влияние
Микрофлора тела человека
• Постоянная часть –
облигатная, индигнная, аутохтонная
(постоянно входящие в состав нормофлоры и играющие важную роль в метаболизме хозяина).
• Факультативная часть –
транзиторная
(часто встречается у здоровых, состав не постоянный).
Функции нормальной микрофлора
•
Создание колонизационной резистентности
(КР), механизма, предотвращающего заселение экзогенными микроорганизмами и их избыточный рост.
• Синтез веществ (органические кислоты, перекись), подавляющих рост экзогенных микробов.
• Конкуренция за места прикрепления на слизистых и за источники питания.
• Стимуляция гуморального и клеточного иммунитета, локального иммунитета
Функции нормальной микрофлора
• Регуляция газового состава кишечника и других полостей организма.
• Продукция энзимов, участвующих в метаболизме белков, жиров, углеводов.
• Детоксикация экзогенных и эндогенных субстратов и метоболитов (естественный биосорбент).
• Образование свободных метаболитов
• Образование желчи
Функции нормальной микрофлора
• Повышение резистентности эпителиальных клеток к мутагенам (канцерогенам).
• Морфокинетическая
• Антимутагенная
• Канцеролитическая
• Хранилище микробных плазмидных и хромосомных генов
• Обеспечение цитопротекции.
История культурального метода
На протяжении многих лет, со времен Пастера и Коха для исследования микрофлоры применяются классические культуральные методы.
Получены фундаментальные данные о составе микрофлоры тела человека
Выделены и идентифицированы более 500 видов микроорганизмов
В последние годы, проведен мониторинг качественного и количественного изменения по возрастам.
ПЦР конвенциональная – качественный метод
Высокая специфичность,
чувствительность, высокая скорость,
прямое определение возбудителя
Проводится в несколько этапов.
Необходимость стадии
электрофореза
ПЦР в реальном времени
Молекулярно-генетические методы
исследования микрофлоры
•
Для детекции и количественного
определения большого
количества
родов и групп
микроорганизмов.
•
используются
группоспецифические,
подгруппоспецифические
праймеры.
•
Группа C. leptum
•
5’ GCACAAGCAGTGGAGT 3’
•
Видоспецифические праймеры
–
детекция определенных видов
микроорганизмов.
Молекулярно-генетические методы исследования микрофлоры
•
Создание праймера
2-х этапный процесс
–
«записать»
нуклеотидную
последовательность
и синтез праймера.
•
Определение
нуклеотидной
последовательности
Секвенирование.
Новые методы изучения микрофлоры
• В 1999 году группа ученых из (Франция) и
Университета Ридинга (Великобритания) применили для исследования микробной популяции кишечника метод секвенирования генов 16S РНК
• Идеальный маркер для идентификации микроорганизмов ген, кодирующий 16S рибосомальную РНК.
• Этот ген есть в геноме всех бактерий и архей, но отсутствует у эукариот и вирусов, имеет как консервативные участки, одинаковые у всех прокариот, так и видоспецифичные.
• Нуклеотидные последовательности 16S РНК всех известных бактерий общедоступны (ген банк).
Новые методы изучения микрофлоры
•
Только 24% полученных
последовательностей 16S РНК
принадлежали известным ранее
микроорганизмам. Три четверти
представителей микрофлоры не
культивируются.
Микрофлора кож и
Аэробные коринеформные бактерии
•
Corynebacterium
– подмышечные впадины,грудная клетка, промежность, кожа носа.
•
Brevibacterium
– на руках, стопах ног.
Анаэробные коринеформные.
• Propionibacterium acnes –
на крыльях носа, головы спины(сальные железы).
• На фоне гормональной перестройки играют значительную роль в возникновении юношеских acne vulgaris
Микрофлора кожи
Коринеформные
–
обнаруживают чаще в
кожных складках.
Микрофлора кожи
•
Propionibacterium
.
Облигатно
анаэробные
грамположительные
неспоробразующие .
•
Обнаруживаются в
глубоких слоях кожи.
Микрофлора кож и
Микрококки
• Staphylococcus aureus
– нос, промежность, подмышечные области.
• Staphylococcus epidermidis
– кожа рук, ног, лба.
• Micrococcus luteus
– в кожных складках, бедрах, чаще в пубертатный период.
• Анаэробны кокки –
Peptosreptococcus –
кожа лба.
Микрофлора кожи
Стафилококки
Микрофлора кожи
Стафилококки –
электронная микроскопия
Микрофлора кожи
•
Эпидермальный
стафилококк
–
рост на
кровяном агаре
без гемолиза.
Микрофлора кожи
•
Микрококки
на
кровяном агаре
колонии,
продуцирующие
желтый пигмент.
Микрофлора кожи
Бациллы-
транзиторно
Микрофлора кожи
Бациллы
гемолиз
на кровяном агаре.
Микрофлора кожи
Микрофлора наруж ны х слуховы х проходов.
• Коагулозонегативные стафилококки,
• Коринебактерии.
При патологических процессах –
• Псевдомонады, протеи, эшерихии.
Микрофлора респираторного
тракта
Ротовая полость
• Стрептококки – Streptococcus salivarius.
• Стафилококки –
S. aureus
,
S. epidermidis
,
анаэробные кокки в слюне.
• Haemophilus inffluenzae – часто у здоровых.
• Облигатноанаэробные неспорообразующие
анаэробы(превотеллы, порфиромонасы)
• Лактобактерии, лептотрихии.
• Грибы рода Candida
Микрофлора респираторного
тракта
•
Стрептококки
•
на кровяном агаре.
Микрофлора респираторного тракта
Стрептококки
( Streptococcus
mutans)
Микрофлора респираторного
тракта
Стрептококки –
электронная
микроскопия.
Гемофильные палочки
Микрофлора носоглотки
•
Небны е миндалины -
гемолитические
стрептококки (S.pyogenes),
S.pneumoniae, анаэробные кокки,
H.influenza, неспорообразующие
анаэробы
•
Нос -
S. aureus
,
S. epidermidis
,
непатогенные нейссерии,иногда
коринебактерии.
• Трахея, бронхиолы, альвеолы-
стерильны.
Необходимые условия формирования
нормальной микрофлоры
Наличие внешних
источников здорового
бактериального
представительства
(мать и родственники,
близко контактирующие
с ребенком
Грудное вскармливание
(противомикробные
компоненты грудного
молока)
Селективное заселение
представителей
нормальной
микрофлоры из
множества
микроорганизмов
окружающей среды.
Противомикробные соединения
Иммуноглобины: slgA, SlgG, SlgM
Лактоферрин, лактоферрин В и Н
Лизоцим
Лактопероксидаза
Антитела
к-казеин и α-лактальбумин
Хаптокоррин (Haptocorrin)
Муцины
Лактадхерин (Lactadherin)
Свободный секреторный компонент
Олигосахариды и
пребиотики
Жирные кислоты
Материнские лейкоциты и цитокины
sCD14
Комплемент и дополнительные рецепторы
β- дефензин-1
Бифидофактор
Устойчивые/стимулирующие соединения
Цитокины II-10 и TGFβ
Антиидиотипические антитела
Соединения развития иммунитета
Макрофаги
Нейтрофилы
Лимфоциты
Цитокины
Факторы роста
Гормоны
Молочные пептиды
Полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью
Нуклеотиды
Молекулы адгезии
Противовоспалительные соединения
Цитокины: II-10 и TGFβ
Антагонист рецептора II-1
TNFα и рецепторы II-6
sCD14
Молекулы адгезии
Полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью
Гормоны и факторы роста
Остеопротегерин
Полиненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью
Гормоны и факторы роста
Соединения с иммунологическими свойствами
в грудном молоке
Кишечник-часть иммунной системы.
В реализации иммунных механизмов на
уровне интестинального тракта
принимают участие три ключевых и
одновременно взаимосвязанных
компонента:
-
Нормальная микрофлора
.
-
Лимфоидная ткань, ассоциированная со
слизистой
оболочкой кишечника
-
Цитокины
, как фактор межклеточного
взаимодействия.
Молекулярно-генетические методы в
изучении микрофлоры
Использование молекулярно-генетических методов коренным образом изменило наши представления о составе микрофлоры
Интестинальная микрофлора представлена преимущественно облигатно анаэробными группами микроорганизмов
Большинство видов микроорганизмов относится к некультивируемым микроорганизмам
Преобладающие группы бактерий
1 доминирующая группа до 43%
Clostridium coccoides group
Clostridium, Eubacterium, Ruminococcus,
Coprococcus, Dorea, Lachnospira,
Roseburia and Butyrivibrio
2- доминирующая
Clostridium leptum группа 19-25%
Anaerqfilum Clostridium,Eubacterium,Ruminococcus
3- группа
Cytophaga-Flavobacter-Bacteroides
1- минорная группа
Bifidobacterium около 5-10%
2 – минорная группа
Lactobadllus, Lactococcus, Enterococcus,
Streptococcus Leuconostoc
Особенности микрофлоры у здоровых детей раннего
возраста.
Бифидобактерии
облигатная флора
детей раннего возраста.
К концу 2 недели жизни обнаружены у
40-60% новорожденных.
Доминируют у 96%-100% клинически
здоровых детей, на грудном
вскармливании, у 75% на
искусственном.
У взрослых бифидобактерии
составляют менее 10% микробиоты.
Их присутствие жизненно важно.
Важнейшая функция создание КР,
препятствуют транслокации
условнопатогенных из кишечника.
Концентрация 109-1010 мт
От 1до 4 видов бифидобактерий
B. longum, B. adolescentis, B.
breve, B. pseudocatenulatum
Микрофлора кишечника
Лактобактерии.
•
Облигатная флора . К
концу 1-го месяца жизни
обнаружены у 57%детей,
находящихся на грудном
вскармливании
•
В мере взросления их
количество увеличива-
лось.
•
Содержание в большей
степени зависит от
вводимых кисломо-
лочных продуктов.
•
Количество 106 –108 в 1 г.
Микрофлора кишечника
Бактероиды.
•
Неспоробразующие
грамотрицательные анаэробы.
• Способны отщеплять остатки фукозы от поверхности клеток хозяина используя в качестве источника энергии или как строительный материал для синтеза различных молекул, включая богатые фукозой капсулы
• В 8 месяцев – 80%
• В 10 месяцев у 100%.
• Высокочувствительны к действию кислорода, необходимо снижение О-В в кишечнике. Концентрация 109-1010 в 1 г.
Особенности микрофлоры у здоровых
детей раннего возраста.
«
Условно бактероиды» - многочисленная группа грамотрицательных, палочковидных анаэробных бактерий.
Роды: Bacteroides, Alistipes, Porphiromonas,
Prevotella
Содержание резко повышается и достигает концентрации взрослых 10 9-10
КОЕ/г. к 6-7 месяцам.
Данные микроорганизмы стимулируют формирование иммунной системы ребенка, ускоряя созревание IgA- и IgG-секретирующих клеток
«Биологический реактор» производство энергии
Особенности микрофлоры толстого кишечника у
клинически здоровых детей раннего возраста.
Лецитиназонегативные клостридии у
45,7% в конце 1-го месяца жизни, у 80-
100% к концу 1 года.
Лецитиназопозитивные у 30-40%.
Производят бутират нутритивный фактор для колоноцитов.
Стимулируют пролиферацию кишечного эпителия.
К клостридиям пока отнесены
Сегментированные фрагментарные филаментозные бактерии, не культивируются
грамположительные, неспорообразующие палочковидные, анаэробы.
В 10 месяцев у 33,3%, в 1 год 46,5% в количестве Lg 10,0+0,4.
облигатно анаэрбные, кокки.
Встречаются у 33% -53,9% до 1 года.
Концентрация Lg 9,9+0,5.
Сегментированные филаментозные бактерии,
некультивируются
Особенности микрофлоры толстого кишечника у
клинически здоровых детей раннего возраста
К клостридиям отнесены
Segmented filamentous bacteria (SFB) –
некультивируемая группа микроорганизмов, грамположительные, пока
отнесены к клостридиям Находятся в тесном контакте с
эпителицитами тонкого кишечника (в инвагинациях мембраны)
Просеквенированы геномы нескольких изолятов
•
Играют ключевую
роль в постнатальном
созревании иммунной
функции толстой
кишки
•
Стимулируют Тн17
лимфоциты.
Микрофлора кишечника
Клостридии.
Clostridium difficile.
•
Присутствуют в
небольшом количестве.
Их популяция
•
Резко возрастает при
использовании
некоторых
антибиотиков-
клиндамицин. Вызывают
псевдомембранозный
колит