ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 06.11.2023
Просмотров: 158
Скачиваний: 3
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Цистатины были открыты в 1984 году. Они синтезируются в серозных клетках околоушных и подчелюстных слюнных желез. Всего обнаружено 8 типов, из них 6 белков охарактеризовано – это цистатин S, удлиненные его формы – S-HSP-12, SA, SN, SAI, SAIII. Цистатины – это кислые белки с молекулярной массой 9,5-13 кДа. Они ингибируют активность цистеиновых протеиназ, к которым относятся катепсины В, Н, L и другие протеиназы, у которых в активном центре присутствует остаток цистеина.
Помимо ингибирующей активности цистатин SAIII содержит 4 остатка фосфосерина и предполагается, что они вовлекаются в связывание фосфорнокальциевых соединений с эмалью зуба. Часть этих белков находится в приобретенной пелликуле зуба. Высокая адгезивная способность цистатинов SАI и SAIII связана с тем, что они имеют сходство в аминокислотной последовательности с фибронектином и ламинином. Через ингибирование активности цистеиновых протеиназ слюнные цистатины выполняют свою антимикробную и антивирусную функцию. Кроме того, они защищают белки слюны от энзиматического расщепления ферментами микроорганизмов.
Альбумин. В смешанной слюне этот белок определяется в небольшом количестве, его происхождение пока остается неясным.
Из слюнных желез в слюну поступают биологически активные соединения, к ним относятся фактор роста эпидермиса, фактор роста нервов, фактор роста мезодермы, эритропоэтин, ренин и некоторые другие.
Ферменты слюны. В смешанной слюне представлены пять оcновных групп ферментов: карбоангидразы, эстеразы, протеолитические, переноса и смешанная группа. Всего определяется активность более 100 ферментов. По происхождению ферменты делятся на три группы: секретируемые паренхимой слюнной железы, образующиеся в процессе ферментативной деятельности бактерий и образующиеся в процессе распада лейкоцитов в полости рта. В связи с обнаружением в слюне и ротовой жидкости человека секретируемых из крови ферментов (пепсиноген, трипсиноген) было обнаружено, что слюна и кровь содержат несколько изоформ амилазы, доказано их происхождение из разных желез-продуцентов и существенные изменения при многих гастроэнтерологических заболеваниях. Полученные результаты свидетельствуют о гетерогенности -амилазы ротовой жидкости и слюны и о повышении саливадиагностической информативности определения в них не только общей амилолитической активности, но и s- и p--амилазы с применением высокоселективного ингибитора s--амилазы человека.
Гликозидазы: -амилаза и лизоцим.
Слюнная -амилаза расщепляет 1-4 гликозидные связи в крахмале и гликогене. По своим иммунохимическим свойствам и аминокислотному составу слюнная альфа-амилаза очень сходна с панкреатической. У обеих определяется 94% сходства в аминокислотной последовательности, но кодируются они различными генами (АМУ1 и АМУ2). Амилаза является сложным белком с четвертичной структурой. Ее изоферменты из 11 белков можно объединить в 2 семейства. Белки семейства А имеют молекулярную массу 62 кДа и содержат остатки углеводов, а изоэнзимы В лишены углеводного компонента и имеют М.м. 56 кДа. В смешанной слюне идентифицирован фермент, который путем дегликозилирования изоамилаз А превращает их в семейство В. Амилаза выделяется с секретом паротидной железы, где концентрация ее составляет 648-803 мкг/мл и не зависит от возраста, но меняется в течение суток и в зависимости от чистки зубов и приема пищи.
Лизоцим гидролизует гликозидную связь между С-1 N-ацетилмурамовой кислоты и С-4 N-ацетилглюкозамина, которые формируют полисахарид клеточной стенки бактерий. Фермент представляет собой одну полипептидную цепь из 129 аминокислотных остатков и массой 14,6 кДа. Стабильность фермента обеспечивают четыре поперечных дисульфидных мостика. Лизоцим определяется также в десневой жидкости, слезах, курином белке, что обеспечивает формы неспецифической антибактериальной защиты. Активность этого фермента в ротовой полости может уменьшаться при тяжелых формах пародонтита.
Другие гликозидазы. В смешанной слюне определяется активность нескольких гликозидаз – это -L-фукозидаза, - и -гликозидаза, - и -галактозидаза, -D-маннозидаза, -глюкуронидаза, -гиалуронидаза, нейраминидаза, -N-ацетилгексозаминидазы. Все они имеют различное происхождение и свойства. -L-фукозидаза выделяется с секретом околоушной железы и расщепляет -1,2 связи в коротких олигосахаридных цепях. -N-ацетилгексозаминидаза содержится в секретах больших слюнных желез, а также образуется смешанной культурой микрофлоры полости рта.
Остальные имеют бактериальное происхождение и наиболее активны в кислой среде.
Пероксидазы. В цельной смешанной слюне определяются две разных группы слюнной пероксидазы. Ферменты с изоэлектрической точкой в щелочной среде образуются в околоушной и подчелюстной слюнных железах, и представлены множественными формами с молекулярной массой 78, 80 и 28 кДа. Это гемопротеиды, однако в своем составе содержат и углеводы (4,6%). Энзимы находятся в комплексе с одним из белков, богатых пролином.
Бактерии зубной бляшки, мелкие слюнные железы и эпителиальная выстилка слизистой оболочки полости рта вообще лишены этого фермента.
Данная пероксидаза катализирует окисление роданидов (тиоцинатов, -SCN) в присутствии Н2О2 с образованием НOSCN и гипотиоцината (-OSСN). Антибактериальная активность последнего в 10 раз выше, чем у Н2О2. Из гипотиоцианта в дальнейшем спонтанно генерируются активные формы кислорода, которые разрушают липиды клеточных мембран микроорганизмов. Наибольшее окисление роданидов протекает при рН=5-6. При этом создается опасность деминерализации твердых тканей зуба.
Миелопероксидазапоступает в слюну преимущественно из азурофильных гранул полиморфноядерных лейкоцитов. Этот фермент, образуя энзим-субстратный комплекс с пероксидом водорода, окисляет анионы галогена (Cl-, Br-, I-) и образует ионы гипохлорита (-OCl), хлоридиума (Cl+) и молекулы хлора. При взаимодействии гипохлорита с Н2О2 образуется активная форма кислорода – синглентный (1О2), обладающая антибактериальным и антивирусным эффектами. Повышение уровня миелопероксидазы в слюне отражает, в основном, процесс развития лейкоцитарно-эндотелиального дисбаланса в его крайнем выражении, прорыве гисто-гематического барьера и имбибиции тканей пародонта активированными лейкоцитами, активно высвобождающими миелопероксидазу в окружающую среду. Значение изменений активности миелопероксидазы для диагностики тяжести поражения пародонта подтверждается и наличием зависимости ее содержания в слюне от степени тяжести пародонтита. При этом регистрируется отчетливая зависимость между тяжестью пародонтита и профилем активности фермента в слюне. Отражая степень лейкоцитарной инфильтрации в ткань и степень поражающего эффекта на тканевые структуры, активность миелопероксидазы в слюне может считаться одним из критериев, позволяющих оценить прогрессирование деструктивных процессов в тканях пародонта.
Щелочная и кислая фосфатазы отщепляют неорганический фосфат от органических соединений. Кислая фосфатаза в смешанную слюну попадает с секретом больших слюнных желез, а также бактерий, лейкоцитов и эпителиальных клеток. В слюне определяется до 4 изоферментов кислой фосфатазы.
Щелочная фосфатаза, оптимум рН которой 9,1-10,5, также определяется в смешанной слюне. Активность фермента очень низка в секретах слюнных желез и ее происхождение в слюне связывают с клеточными элементами.
Активность обоих энзимов в слюне, как правило, увеличивается при пародонтите, гингивите. Противоречивые данные об изменении скорости гидролиза фосфорных эфиров получены при кариесе. Вместе с тем выявлено, что повышенная растворимость эмали при использовании реминерализующей терапии совпадает с высокой активностью щелочной фосфатазы.
В слюне определяется невысокая активность протеиназ и их ингибиторов, оптимум рН которых находится и в кислой и в слабощелочной среде. К ним относятся калликреин и другие трипсиноподобные протеиназы, катепсины D, В, а также 1-ингибитор протеиназ, 2-макроглобулин и другие. Основная их функция – регулируемый ограниченный протеолиз белков с образованием активных форм белка или активных олигопептидов.
Нуклеазы ротовой жидкости (ДНК-аза, РНК-аза) участвуют в расщеплении нуклеиновых кислот. Биологическая роль данных ферментов заключается в деградации полинуклеотидов бактерий и вирусов, что играет существенную роль в защите организма от проникновения инфекционного фактора через полость рта.
В слюне также содержатся ферменты, участвующие в свертывании крови и фибринолизе: плазмин, активаторы плазминогена, ингибиторы фибринолиза, факторы обладающие тромбопластической активностью. Полагают, что все эти энзимы играют роль в образовании фибрина и регенерации ран слизистой полости рта.
Липиды. Их общее содержание невелико. Оно колеблется и считается, что большая их часть поступает с секретом околоушной и подчелюстной желез и только 2% из плазмы и клеток. Количество общих липидов в нестимулированном секрете околоушной железы не превышает 60-70 мг/л. Часть липидов представлена свободными насыщенными и ненасыщенными высшими жирными кислотами – пальмитиновой, стеариновой, олеиновой, эйкозапентаеновой. Кроме того, в слюне присутствует свободный холестерин и его эфиры (около 28% от общего количества), триацилглицеролы (примерно 50%) и, в очень небольшом количестве, глицерофосфолипиды.
Углеводы в слюне находятся в комплексе с белками. Уровень глюкозы в слюне в норме составляет 0,06-0,17 ммоль/л.
Слюна содержит также мочевину (1,7-6,7 ммоль/л), лактат, пируват, тиоцинаты (роданиды), нитраты, нитриты. Последние два поступают в слюну с пищей, водой, табачным дымом, где при участии нитратредуктазы бактерий нитраты превращаются в нитриты, которые в свою очередь могут вступить в реакцию со вторичными аминами (аминокислоты, нуклеотиды, лекарственные препараты) с образованием канцерогенных нитрозосоединений. Эта реакция протекает в кислой среде, а ускоряют ее тиоцианаты. Показано, что при лейкоплакии слизистой полости рта у курильщиков и лиц, занятых в табачном, производстве в слюне растет количество нитритов и активность нитратредуктазы. Кроме того, содержание роданидов в слюне у курильщиков в 2-10 раз превышает таковое у некурящих людей (в норме – 0,5-1,2 ммоль/л), их уровень также может увеличиваться при воспалении пародонта.
В слюне определяется подавляющее большинство стероидных гормонов – эстрогены, андрогены, прогестерон, глюко- и минералокортикоиды. Уровень половых гормонов у женщин меняется в зависимости от фазы менструального цикла. Исследование стероидных гормонов в слюне используется для оценки влияния контрацептивов на эндокринную систему женщины. По гормональному профилю слюны можно судить о приеме стероидных анаболиков.
Одним из защитных механизмов полости рта, обеспеченных компонентами ротовой жидкости, наряду с указанными выше (иммуноглобулины, пероксидазы, протеазы, нуклеазы, факторы гемостаза и фибринолиза и другие), служит образование приобретенной пелликулы зуба, которая лежит под слоем зубного налета. Это очень тонкая органическая пленка, являющаяся структурным элементом поверхностного слоя эмали. Она не исчезает в процессе жевания и может быть удалена лишь при воздействии сильных абразивных агентов. Пелликула появляется после прорезывания зубов и в ее образовании участвуют главным образом белки ротовой жидкости. Муцины, имея кислый характер и высокое сродство к гидроксиапатиту эмали, притягиваются к поверхности зуба, также как и кислые белки, богатые пролином, - эти протеины составляют основную структурную часть пелликулы. Она, выступая в роли ионообменника, регулирующего поступление ионов кальция и фосфата, препятствует избыточному их осаждению из перенасыщенной солями слюны. Жевание и наличие микроорганизмов в полости рта создают основу для прикрепления бактерий к белкам пелликулы и инициирует рост зубного налета. Ограничение роста последнего и повреждающего действия микроорганизмов на твердые ткани зуба связано с присутствием белков слюны, таких как гистатины и цистатины, которые обладают антибактериальным и антивирусным действием, что определяется их способностью ингибировать активность многих протеаз ряда вирусов и бактерий. Разрушение пелликулы под действием микрофлоры приводит к обнажению эмали, нарушению минерализации и может закончиться кариозным процессом.
Буферная емкость слюны – это способность нейтрализовать кислоты и основания (щелочи), обычно расценивается как защитный механизм полости рта, функционирующий по принципу саморегуляции. Буферные свойства слюны определяются ее клиренсом и буферными системами, а также зависят от характера ее секреции (стимулированная или нестимулированная). Клиренс слюны характеризует скорость растворения и удаления из полости рта углеводов и кислот. Скорость секреции слюны – важнейший фактор, определяющий скорость самоочищения полости рта. При высокой скорости клиренса слюны кривая Стефана (изменения рН зубной бляшки, развивающиеся после поступления в полость рта углеводов) имеет пологую форму, т.е. снижение рН зубной бляшки незначительное. При низком клиренсе кривая Стефана глубокая из-за сильного снижения рН зубной бляшки.