ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 16.07.2024
Просмотров: 402
Скачиваний: 0
берут две гранулы, помещают их в стерильный флакон и погружают в теплую воду (38-40°С) для оттаивания.
Для замораживания сперму после разбавления охлаждают до температуры 2-4°С в течение 4-5 ч, а затем разливают в лунки (0,1-0,2 или 0,5 мл) охлажденной в жидком азоте фторопластовой пластины. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 5-10 см в течение 1,5-2 мин, а затем погружают ее в жидкий азот на 1-2 мин. После замораживания спермы пластину вынимают из жидкого азота, гранулы спермы собирают в сачок или контейнер.
На пунктах искусственного осеменения гранулы спермы хранят в сосудах Дьюара. Уровень азота в них должен быть значительно выше контейнеров с замороженной спермой в гранулах. Перед осеменением гранулы достают охлажденными до -196°С пинцетом, оттаивают их, оценивают активность спермиев и используют для осеменения коров при активности спермиев не ниже 4 баллов.
Замораживание спермы в облицованных гранулах. По этому методу замораживания используют свежеполученную сперму, разбавленную средами №1 и 2. Приготовленные среды наливают в стерильные полиэтиленовые емкости по 200-400 мл, которые подсоединяют к специальному устройству для разбавления спермы.
После получения спермы ее разбавляют средой №1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной температуре 5-10 мин. Затем разбавляют сперму средой №2 до требуемой концентрации (15 млн. в дозе). Разбавление производят с помощью специального устройства, позволяющего дозировано вводить среды в отдаленную часть одноразового полиэтиленового спермоприемника со спермой. Спермоприемник соединяют с тонкой полимерной трубкой диаметром 3,8-4,0 мм, с толщиной стенки 120 мкм и выдавливают в нее разбавленную сперму с помощью автомата ПРЖ на отдельные дозы по 0,25-0,33 мл и герметизируют путем термической сварки. Облицованные гранулы помещают в алюминиевые контейнеры, которые закрывают пробками. Контейнеры закрепляют в обоймы специального устройства для эквилибрации и замораживания спермы. Это устройство помещают в холодильник для охлаждения до 2-5°С. После 5-6-часовой выдержки при такой температуре обойму аппарата с контейнерами погружают в ем-
65
кость с жидким азотом на 8-10 мин. Активность спермиев после замораживания спермы проверяют через 24 ч. Из каждого контейнера берут по одной грануле и опускают в воду с температурой 40°С для оттаивания. Гранулу вытирают марлевой салфеткой, с помощью ножниц ее вскрывают и определяют активность спермиев. Для дальнейшего хранения допускают сперму с активностью не ниже 4 баллов.
Замораживание спермы в соломинках (пайеттах). При замораживании используют полипропиленовые трубочки емкостью 0,25 мл. Сперму разбавляют лактозо-фруктозо-раффинозо- магниево-глицерино-желточной средой (ЛФРМГЖ) с таким расчетом, чтобы в соломинке (пайетте) содержалось после оттаивания не менее 15 млн. подвижных спермиев. Каждую соломинку маркируют с указанием наименования предприятия, клички и номера быка, даты получения спермы. После разбавления сперму расфасовывают по 0,25 мл.
Для этого используют машину, которая автоматически наполняет спермой соломинки и закупоривает их с обоих концов стерильными шариками. Один шарик используется как пробкапоршень, а другой герметизирует соломинку. Штативы с соломинками кладут в пластмассовые коробки, которые ставят для охлаждения в холодильник при температуре 4°С на 3-4 ч. После охлаждения оценивают подвижность спермиев и для замораживания допускают сперму с оценкой не ниже 8 баллов. Хранят ее в жидком азоте при температуре -196°С. Для осеменения используют сперму не раньше 14-20 дней после замораживания. Оттаявшую сперму вновь замораживать нельзя.
Проверка активности замороженной спермы. Для проверки активности спермы, сохраненной при температуре 2-4°С, открывают термос, достают из него флакон, осторожно перемешивают в нем сперму (путем вращения флакона), берут каплю спермы на исследование, а флакон со спермой быстро помещают в термос со льдом. Каплю спермы наносят на предметное стекло и рядом с ней каплю 2,9% раствора натрия лимоннокислого, смешивают, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом при температуре 38-40°С.
Каплю спермы хряка, сохраненной при температуре 16-20°С, для оценки наносят на предметное стекло, добавляют к ней каплю 2,9% раствора натрия лимоннокислого, накрывают по-
66
кровным стеклом и исследуют под микроскопом при температуре 40-42°С через 3-5 мин после нагревания.
Замороженную сперму быка оценивают после оттаивания. Замороженную сперму в гранулах (по 0,1-0,2 мл) помещают в теплый (38-40°С) 2,9% раствор натрия лимоннокислого объемом по 1 мл, после чего берут каплю для оценки. Исследуют сперму при температуре 38-40°С.
Гранулы замороженной спермы объемом 0,5 мл оттаивают во флаконе, погруженном в воду температурой 38-40°С и исследуют под микроскопом, как указано выше.
Для оттаивания спермы в облицованных гранулах их извлекают из жидкого азота пинцетом и помещают в воду температурой 38-40°С на 5-10 с до появления тонкого стерженька льда. Оценку активности спермиев производят под микроскопом при температуре 38-40°С. Для этого вскрывают гранулу, наносят на предметное стекло каплю спермы, добавляют к ней раствор натрия лимоннокислого и исследуют. Перед осеменением животных соломинки (пайетты) с замороженной спермой оттаивают в стерильном полиэтиленовом мешочке, помещенном в теплую воду (38-40°С) в течение 12-14 с. Для оценки оттаянной спермы в пайеттах производят смешивание ее из одной соломинки с равным количеством 2,9% натрия лимоннокислого. Для этого один конец соломинки обрезают ножницами и опускают в раствор, а затем этими же ножницами обрезают и второй ее конец. Полученную смесь спермы и раствора перемешивают соломинкой и с ее помощью берут каплю для оценки. Для искусственного осеменения коров и телок замороженную сперму после оттаивания допускают с оценкой активности спермиев не ниже 4 баллов.
Замораживание спермы жеребца. Перед замораживанием сперму жеребца разбавляют в 4 раза лакто-хелато-цитратно- желточной (ЛХЦЖ) или лактозо-желточно-сульфатной (ЛЖС) средой.
Состав среды ЛХЦЖ: лактоза – 11 г; желток – 0,8 г; 4,2% раствор двууглекислой соды – 0,2 мл; 35,7% раствор цитрата натрия – 0,25 мг; хелатон – 100 мг; глицерин – 3,5 мл; вода дистиллированная – 100 мл.
Состав среды ЛЖС: лактоза – 10 г; сульфат аммиака – 150 мг; желток – 1,6 г; глицерин – 3,5 мл; вода дистиллированная 100 мл.
После разбавления сперму охлаждают до 0°С и выдерживают
67
при этой температуре 2 ч. Охлажденную сперму разливают
валюминиевые пакеты по 13 мл, плотно закрывают. Пакеты со спермой замораживают в охлажденном газе над жидким азотом
вспециальном устройстве, после чего их переносят в хранилище с жидким азотом. Оттаивание производят путем погружения алюминиевого пакета на 1-2 мин в водяную баню при температуре 3840°С. После чего их вытирают стерильной марлей, обеззаражива-
ют 96% спиртом, обрезают стерильными ножницами край пакета и стеклянной палочкой берут каплю спермы, добавляют к ней каплю 2,9% раствора натрия лимоннокислого и оценивают активность спермиев. Подвижность спермиев в оттаявшей сперме должна быть не ниже 2 баллов.
Техника безопасности при работе с сосудами Дьюара. При работе с жидким азотом надо закрывать незащищенные участки тела, так как он вызывает обморожение. Работать следует в защитных очках, на руки надевать брезентовые или кожаные рукавицы. Незащищенный участок тела, на который попал жидкий азот, быстро обливают водой. При заливке жидким азотом неохлажденного сосуда нельзя заглядывать в горловину сосуда, так как при этом может произойти выброс жидкого азота вследствие образования большого количества газа.
Повышение концентрации азота в воздухе вызывает головную боль, головокружение и потерю сознания. Поэтому помещения, где хранят жидкий азот, оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией. При обморочном состоянии пострадавшего немедленно выносят на свежий воздух. Нельзя плотно закрывать сосуды Дьюара. При транспортировке сосудов с азотом их следует хорошо фиксировать. При перевозке автотранспортом сосуды заливают наполовину гидравлической емкости. Во избежание взрыва сосуды отогревают в изолированном помещении. Для предотвращения накопления взрывоопасной смеси в емкости содержание кислорода следует контролировать с помощью переносного газоанализатора ГХП-3 на пунктах – 1 раз в 6 месяцев. После накопления кислорода в количестве 15% сосуд необходимо опорожнить в месте, очищенном от предметов органического происхождения: дерева, бумаги, тряпок (особенно промасленных), навоза и пр.
Оттаивание замороженного семени
Семя нужного хряка извлекают из сосуда Дьюара и помещают
68
в кювету из пенопласта, заполненную жидким азотом, а затем оттаивают небольшими порциями с помощью специальных устройств, которые позволяют быстро подводить большое количество теплоты без превышения температуры теплоносителя сверх физиологически допустимых пределов (+42°С). Кроме того, устройства позволяют отделять образующуюся жидкую фазу таяния от твердой, что ускоряет передачу тепла и предотвращает многократное охлаждение и нагревание жидкой фазы.
Устройства питаются от стандартных ультратермостатов, снабженных достаточно мощными насосами, например: UТU-4,
UТ-2, IТЖ-0-03 и т.д.
Перед оттаиванием семени задают температуру в термостате +42°С и включают его на нагрев. Перед оттаиванием гранул семени включают насос ультратермостата и прогревают оттаиватель в течение 1-2 мин. Затем небольшими порциями по 10-20 гранул специальной ложкой переносят гранулы из кюветы с жидким азотом в устройство. Оттаянное семя собирают в градуированный сосуд с воронкой. Набирают оттаянного семени до объема 25-5 мл (1 доза). После оттаивания семя оценивают по общепринятой методике на подвижность. Для использования пригодно семя, содержащее не менее 30% прямолинейно-поступательно движущихся живчиков.
Оттаянное и пригодное для осеменения семя разбавляют изотоническим (2,9%) раствором лимоннокислого натрия и используют для осеменения (если выживаемость менее 4 ч, семя выбраковывают).
Контрольные вопросы
1.Какими способами определяют резистентность спермы?
2.Как определяют редуцирующую способность спермы?
3.Как замораживают сперму Быка, барана, жеребца, хряка?
4.Как замораживают сперму в гранулах и фторопластовых пластинках?
5.Расскажите метод замораживания спермы в облицованных гранулах.
6.Как замораживают сперму в соломинках (пайеттах)?
7. Какими методами определяют активность замороженной спермы
убыка, жеребца?
8.В чем состоят правила техники безопасности при работе с со судами
Дьюара?
9. Расскажите технику оттаивания замороженной спермы.
69
Занятие 10. Оперативные методы подготовки самцов-пробников
Цель занятия: овладеть методикой выполнения операции по подготовке самцов-пробников для выявления половой охоты у самок.
Материалы и оборудование : самцы, достигшие половой зрелости, набор хирургических инструментов, шовный материал: шелк или капрон №6, 7, 2% раствор рометара, 2% раствор новокаина, инъекционные шприцы на 10-20 мл, инъекционные иглы, стерильные марлевые тампоны, трициллин, стрептоцид, 5% настойка йода, повальный ремень.
Задание : изучить методику выполнения операции по подготовке самца-пробника.
Половая охота – строго специфическая реакция самки на самца, поэтому ее можно достоверно определить лишь с помощью пробника. В тех случаях, когда определяют время осеменения по признакам течки или полового возбуждения, при осеменении обнаруживается более 30% животных, у которых охота еще не наступила. При этом неизбежны пропуски половой охоты. Даже при 4-5-кратном визуальном наблюдении за стадом пропуски половой охоты у коров достигают 20%, а при отсутствии признаков полового возбуждения (ареактивный цикл) – 40% и более.
Пробник безошибочно выявляет охоту, что исключает частые случаи ее пропуска, кроме того, он является мощным естественным стимулятором, обусловливающим полноценное проявление стадии возбуждения полового цикла вскоре после родов.
К тому же правильно организуемая проба самок после их осеменения позволяет надежно ставить диагноз на беременность и бесплодие. Пробников готовят из числа бычков, предназначенных для выращивания на мясо (откорм). Из таких бычков в возрасте 8-10 мес. отбирают самых лучших, развитых, а главное, активных в половом отношении. Отобранные животные должны быть здоровыми и специально проверенными на бруцеллез, туберкулез, трихомоноз и кампилобактериоз.
Быков-пробников целесообразно использовать в течение одного, максимум полутора лет, а затем реализовать на мясо. Быки-
70
пробники быстрее растут, чем кастрированные животные, и от них получают больше мяса и шкуры лучшего качества. К моменту выбраковки быки-пробники достигают массы более 500 кг. На быков-пробников не требуется никаких дополнительных затрат, в то время как польза от них очень большая, главной из которой является высокая эффективность профилактики бесплодия. Разработано много надежных оперативных способов подготовки быков-пробников. Оперировать быков можно любых, но легче, быстрее и удобнее всего это делать в 8-10-месячном возрасте. Готовят быков-пробников из расчета один пробник на 150-200 коров.
Вазэктомия быков. Из всех многочисленных способов подготовки быков-пробников вазэктомия является самой простой и быстро выполнимой операцией, доступной в условиях любого хозяйства. Она заключается в иссечении спермиопроводов. В результате этого самец сохраняет способность к половому акту, но оплодотворения не наступает, так как эякулят содержит только секреты придаточных желез. Поэтому вазэктомированные быки не могут быть производителями ни при естественном, ни при искусственном осеменении. Их используют только как пробников.
В физиологическом отношении вазэктомированные самцы – лучшие пробники. При их использовании у самок нормально проявляются все процессы, связанные с актом спаривания, благодаря чему укорачивается половая охота, ускоряется процесс овуляции, усиливаются моторика матки и другие функции, что и обусловливает повышение оплодотворяемости самок. Существует несколько способов вазэктомии быков, которые следует вначале отработать на свежих половых органах, а затем на животных.
Впервые эту операцию описал А. Я. Краснитский (1946), который делал два разреза на задней стороне шейки мошонки.
Способ Шипилова. В отличие от способа А. Я. Краснитского делают разрезы на передней (а не на задней) стороне шейки мошонки. В этом случае не рассекаются волокна мышц поднимателя семенника, что значительно облегчает нахождение и извлечение спермиопровода. Вазэктомию делают через один или два разреза.
Взятого для операции бычка в возрасте 8-10 мес. с хорошо выраженными вторичными половыми признаками фиксируют в спинном положении. Для этого используют деревянный станок типа «козел» длиной 2,5 м, высотой 1 м и шириной в верхней части 65 см. Такой станок можно использовать для фиксации бычков
71