ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 16.04.2021
Просмотров: 14260
Скачиваний: 135
Параллельно проводят определение с раствором Государственного стандартного образца
рутина. Для этого к 2 мл раствора Государственного стандартного образца рутина прибавляют 8 мл
цитратно - борного реактива и далее поступают, как указано выше.
Содержание C27H30O16 х 3Н2О (рутина) в граммах (X) в одном драже или одной таблетке
вычисляют по формуле:
D1 х 0,1 х 100 х V3 х б D1 х V3 х б
Х = ------------------------- = -------------------,
D0 х а х V2 х 1000 D0 х а х V2 х 100
где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора; Dо - оптическая плотность раствора
Государственного стандартного образца рутина; 0,1 - содержание рутина в 1 мл раствора
Государственного образца в миллиграммах; 100, V2 и V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска
препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже
или одной таблетки в граммах; 1000 - пересчет в граммы.
Примечания. 1. Приготовление раствора Государственного стандартного образца рутина: 0,0250
г рутина, предварительно высушенного при температуре 135 град. С до постоянной массы,
растворяют в 10 мл горячего метилового или горячего абсолютного спирта, переносят в мерную
колбу вместимостью 250 мл с помощью сухого ацетона и доводят объем раствора тем же ацетоном до
метки.
1 мл раствора Государственного стандартного образца содержит 0,1 мг рутина. Раствор годен в
течение 6 мес при хранении в хорошо укупоренной банке оранжевого стекла при температуре от 5 до
10 град. С.
2. Приготовление цитратно - борного реактива: к 10 г лимонной кислоты, высушенной при
температуре 60 град. С в течение 2 ч, прибавляют 10 мл сухого ацетона (раствора А).
К 0,8 г борной кислоты прибавляют 100 мл сухого ацетона (раствор Б). Оба раствора
пересыщены, и перед употреблением их фильтруют.
Непосредственно перед употреблением смешивают 4 мл раствора А и 4 мл раствора Б.
11. Определение альфа - токоферола ацетата (витамина Е)
Точную навеску порошка растертых драже (не более 1 г) или 2 таблетки, растертые в порошок,
количественно переносят 10 миллилитрами воды в коническую колбу вместимостью 100 мл и
нагревают на водяной бане при температуре от 60 до 70 град. С при перемешивании в течение 5 мин.
Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин
на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое колбы
охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят 50 мл воды в делительную воронку
и извлекают 150 мл эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии проводят
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают
порциями по 50 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином).
Промытые эфирные извлечения медленно фильтруют в колбу для отгона через бумажный фильтр, на
который помещено около 8 г безводного натрия сульфата, фильтр с натрия сульфатом промывают 3
раза эфиром порциями по 10 мл, который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют в токе азота или
под вакуумом на водяной бане, нагретой не выше 40 град. С.
Остаток тотчас же растворяют в абсолютном спирте до получения концентрации около 60 мкг в
1 мл (раствор А).
15 мл раствора А переносят в колбу для гидрирования вместимостью 50 мл, прибавляют около
0,2 г палладиевого катализатора, перемешивают и гидрируют в течение 15 мин в приборе,
изображенном на рис. 5 (см. определение ретинола ацетата и ретинола пальмитата). По окончании
гидрирования в колбу прибавляют около 0,3 г силикагеля марки КСМ или ШСМ, перемешивают и
фильтруют; 2 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют
15 мл абсолютного спирта, 1 мл 0,5% спиртового раствора о - фенантролина, 1 мл 0,2% спиртового
раствора железа окисного хлорида, доводят объем раствора тем же спиртом до метки, перемешивают
и оставляют в защищенном от света месте.
Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют
оптическую плотность раствора красновато - оранжевого цвета на спектрофотометре при длине
волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используют абсолютный спирт. Параллельно проводят
контрольный опыт на реактивы. Из величины оптической плотности испытуемого раствора
вычитают величину оптической плотности контрольного опыта.
Содержание альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 1 мл находят по калибровочному
графику.
Содержание C31H52O3 (альфа - токоферола ацетата) в одной таблетке или драже в граммах (X)
вычисляют по формуле:
С х V х б С х V х б
Х = --------------------- = ---------------,
а х 2 х 1000 х 1000 а х 2000000
где С - содержание альфа - токоферола в 25 мл, найденное по калибровочному графику, в
микрограммах; V и 2 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество
таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1000, 1000 - пересчет в
граммы.
Примечания. 1. Построение калибровочного графика: 0,1000 г Государственного стандартного
образца альфа - токоферола ацетата растворяют в 30 мл абсолютного спирта, прибавляют 3 мл 50%
раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при
температуре кипения смеси. Извлекают неомыляемый остаток эфиров для наркоза, как указано выше,
эфир отгоняют на водяной бане в токе азота.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
Остаток растворяют в абсолютном спирте, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл,
доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.
1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем
раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.
Из полученного раствора отбирают 1, 2, 3, 4, 5 мл раствора в мерные колбы вместимостью 25
мл и проводят реакцию с растворами о-фенантролина и железа окисного хлорида, как указано выше.
Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют
оптическую плотность растворов от оранжевого до красновато - оранжевого цвета на
спектрофотометре при длине волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, как указано выше.
Из величин оптической плотности растворов Государственного стандартного образца
вычитают величину оптической плотности контрольного опыта на реактивы. Строят калибровочный
график, откладывая по оси абсцисс количества альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 25 мл
раствора, а по оси ординат - соответствующие им оптические плотности.
2. Приготовление реактивов: 0,5% раствор о-фенантролина и 0,2% раствор железа окисного
хлорида готовят на абсолютном спирте. Растворы годны в течение 1 мес при хранении в банках
оранжевого стекла с притертыми пробками при комнатной температуре.
12. Определение кальция пантотената
Определение содержания кальция пантотената проводят микробиологическим методом с
Saccharomycodes ludwigii KM в качестве тест - микроорганизма.
Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или таблеток, покрытых оболочкой,
растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, помещают в мерную колбу
определенной вместимости, прибавляют небольшое количество воды, взбалтывают, доводят объем
раствора водой до метки и фильтруют (основной раствор). Из полученного основного раствора
готовят последовательно разведения с таким расчетом, чтобы содержание в нем кальция пантотената
было около 0,01 мкг в 1 мл.
Готовят растворы рабочих стандартных и испытуемых образцов в конических колбах
вместимостью 50 мл по следующей схеме.
----------T-----------------------------T------------T-----------¬
¦
N колбы
¦
Количество рабочего
¦
Количество
¦
Количество
¦
¦
¦
раствора кальция пантотената
¦
воды, мл
¦
основной
¦
¦
¦
(0,01 мкг/мл) или испытуемого
¦
¦
среды, мл
¦
¦
¦
образца, мл
¦
¦
¦
+---------+-----------------------------+------------+-----------+
¦
1
¦
0
¦
5,0
¦
5,0
¦
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
¦
2
¦
0,5
¦
4,5
¦
5,0
¦
¦
3
¦
1,0
¦
4,0
¦
5,0
¦
¦
4
¦
1,5
¦
3,5
¦
5,0
¦
¦
5
¦
2,0
¦
3,0
¦
5,0
¦
¦
6
¦
3,0
¦
2,0
¦
5,0
¦
¦
7
¦
4,0
¦
1,0
¦
5,0
¦
L---------+-----------------------------+------------+------------
Общий объем растворов в колбах 10 мл.
Определение проводят не менее двух раз. Колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют
насыщенным водяным паром в паровом стерилизаторе при 1 ати (0,1 МПа) 15 мин. После
охлаждения в каждую колбу вносят по 2 капли разведенной взвеси тест - культуры. Засеянные колбы
инкубируют при температуре от 29 до 30 град. С 48-72 ч. Для прекращения роста дрожжевой
культуры все колбы подвергают обработке текучим паром в течение 5 мин. После этого колбы
охлаждают и интенсивность роста тест - культуры в колбах с растворами рабочего стандартного и
испытуемого образцов измеряют на фотоэлектроколориметре - нефелометре при длине волны около
540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Содержание C18H32CaN2O10 (кальция пантотената) в одном драже или одной таблетке в
граммах (X) вычисляют по формуле:
С х б х К
Х = -------------,
а х 1 000 000
где С - среднеарифметическое содержание кальция пантотената, найденное по стандартной кривой
из 6 возрастающих концентраций растворов испытуемого образца, в микрограммах; К - коэффициент
разведения; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б -
средняя масса одного драже в граммах; 1 000 000 - пересчет в граммы.
Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного образца кальция пантотената:
0,0500 г кальция пантотената в пересчете на 100% вещество по содержанию азота растворяют в 25%
спирте в мерной колбе вместимостью 50 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки
(основной раствор).
1 мл основного раствора содержит 1 мг кальция пантотената.
Раствор годен в течение 2 мес при хранении в банке с притертой пробкой при 4-6 град. С.
1 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем
раствора водой до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.
мл и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу
вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки (рабочий раствор).
Рабочий раствор содержит 0,01 мкг кальция пантотената в 1 мл.
2. Построение стандартной кривой: на оси абсцисс откладывают содержание кальция
пантотената в колбах стандартного ряда, а на оси ординат - соответствующие им значения процента
светопропускания. По полученным точкам строят стандартную кривую.
3. Поддержание тест - культуры: S. ludwigii KM поддерживают на скошенном сусло - агаре,
приготовленном из солодового сусла, доведенного до 7 град. Б (Баллинга) с помощью сахарометра, с
добавлением 1,5% агара микробиологического. Инкубацию ведут при температуре от 29 до 30 град. С
в течение 48 ч. Тест - культуру хранят при температуре от 4 до 6 град. С, пересевают не реже одного
раза в месяц.
4. Приготовление основной среды. Состав среды:
сахарозы 40 г
аммония сульфата (х.ч.) 6 г
магния сульфата (х.ч.) 1,4 г
натрия хлорида (х.ч.) 1 г
калия фосфата однозамещенного (х.ч.) 2 г
калия фосфата двузамещенного (х.ч.) 0,2 г
тиамина хлорида 0,002 г
кислоты никотиновой 0,002 г
пиридоксина гидрохлорида 0,0002 г
биотина (ТУ 64-5-94-84 ч.д.а. или ч.) 0,000002 г
воды до 1 л
рН среды до стерилизации 5,5-5,7 (потенциометрически).
Сахарозу предварительно обрабатывают углем активированным осветляющим. Для этого к 100
мл 20% раствора сахарозы прибавляют 5 г угля, встряхивают в течение 40 мин и фильтруют через
бумажный фильтр.
5. Приготовление посевного материала: небольшое количество 48-часовой культуры S. ludwigii
KM переносят петлей в 10 мл среды, состоящей из 5 мл основной среды и 5 мл воды. Инкубацию
ведут в течение 2 сут. Затем от 0,2 до 0,5 мл этой суспензии переносят в 15 мл раствора натрия
хлорида изотонического 0,9%; мутность используемой суспензии для засева должна быть 96-98% по
шкале светопропускания фотоэлектроколориметра - нефелометра при длине волны около 540 нм в
кювете с толщиной слоя 10 мм.
СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей
Приладожья, Поморья и Прионежья –
Постоянно действующий третейский суд.