Файл: Введение. Предмет и задачи микробиологии.doc

Скачать файл
Заказать решение

ВУЗ: Не указан

Категория: Не указан

Дисциплина: Не указана

Добавлен: 06.11.2023

Просмотров: 531

Скачиваний: 3

ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.

СОДЕРЖАНИЕ

Лечение дисбактериоза

Радиационная  стерилизация.      Лучистая  энергия губительно действует на клетки живого организма, в том числе  на различные микроорганизмы. Принцип  стерилизующего эффекта этих излучений  основан на способности вызывать в живых клетках при определенных дозах поглощенной энергии такие изменения, которые неизбежно приводят их к гибели за счет нарушения метаболических процессов. Чувствительность микроорганизмов к ионизирующему излучению зависит от многих факторов: наличия влаги, температуры и др.     Облучение объектов в конечной упаковке производят на гамма-установках, ускорителях электронов и других источниках ионизирующего излучения дозой 25 кГр (2,5 Мрад) или другими дозами в зависимости от конкретных условий (микробная обсемененность продукции до стерилизации, радиорезистентность контаминатов, величина коэффициента надежности стерилизации). Стерилизацию проводят в соответствии со "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭВ радиационной стерилизации материалов и изделий медицинского назначения" и "Сводом правил, регламентирующих проведение в странах - членах СЭВ радиационной стерилизации лекарственных средств" и утвержденными инструкциями на каждый вид изделия.     Радиационный  метод стерилизации может быть рекомендован для изделий из пластмасс, изделий одноразового использования в упаковке, перевязочных материалов, некоторых лекарственных средств и других видов медицинской продукции.     Радиоактивная стерилизация является высокоэффективной   для   крупных производств. Стерилизация фильтрованием.      Микробные клетки и споры можно рассматривать  как нерастворимые образования  с очень малым (1—2 мкм) поперечником частиц. Подобно другим включениям, они могут быть отделены от жидкости механическим путем — фильтрованием  сквозь мелкопористые фильтры. Этот метод стерилизации включен в ГФ XI для стерилизации термолабильных растворов. Такими фильтрами могут быть перегородки из неглазурованного фарфора (керамики), асбеста, стекла, пленок, пропитанных коллодием, и другого пористого материала. По конструкции их подразделяют на глубинные и мембранные фильтры с размерами пор не более 0,3 мкм. В настоящее время используют различные фильтры. Глубинные фильтры: керамические и фарфоровые (размер пор 3—4 мкм), стеклянные (около 2 мкм), бумажно-асбестовые (1 —1,8 мкм), а также мембранные (ультра) фильтры и «Владипор» (0,3 мкм) и др.Перспективными  являются также полимерные пленки   с   цилиндрическими порами —  ядерные   фильтры.     Стерилизующее фильтрование осуществляют в установках, основными частями которых являются фильтродержатель и фильтрующая среда. Используют два типа держателей: пластинчатые, в которых фильтр имеет форму круглой или прямоугольной пластины, и патроны, содержащие один или больше трубчатых фильтров. Перед фильтрованием производят стерилизацию фильтра в держателе и емкости для сбора фильтрата насыщенным водяным паром при температуре 120+2 °С или горячим воздухом при температуре 180 °С.     Стерилизующая фильтрация с помощью фильтров имеет  преимущества по сравнению с методами термической стерилизации. Для многих растворов термолабильных веществ (апоморфина гидрохлорида, викасола, барбитала натрия и др.) он является единственно доступным методом стерилизации. Стерилизующая фильтрация перспективна для стерилизации глазных капель, особенно с витаминами, которые готовят в условиях аптек в больших количествах. Использование мембранных фильтров обеспечивает чистоту, стерильность и апирогенность растворов.Стерилизация ультрафиолетовой радиацией.УФ-радиация является мощным стерилизующим фактором, способным убивать и вегетативные, и споровые формы микроорганизмов. В настоящее время ультрафиолетовая радиация широко используется в различных отраслях народного хозяйства для обеззараживания воздуха помещений, воды и других объектов. Использование их в аптеках имеет большое практическое значение и существенные преимущества по сравнению с применением дезинфицирующих веществ, так как последние могут адсорбироваться лекарственными средствами приобретая резкие запахи.     УФ-радиация — невидимая коротковолновая  часть солнечного света с длиной волны меньше 300 нм. Она вызывает фотохимическое нарушение ферментных систем микробной клетки, действует на ее протоплазму с образованием ядовитых органических пероксидов, а также приводит к фотодимеризации тиаминов.     Эффективность бактерицидного действия УФ-радиации зависит от ряда факторов: от длины волны излучателя, его дозы, вида инактивируемых микроорганизмов, запыленности и влажности среды. Наибольшей стерилизующей способностью обладают лучи с длиной волны 254—257 нм. Имеет значение величина дозы и время облучения. В зависимости от времени воздействия излучения различают стадию стимуляции, угнетения и гибели микробных клеток. Вегетативные клетки более чувствительны к УФ-радиации, чем споры. Для их гибели требуется доза, в среднем в 10 раз выше, чем для вегетативных клеток.     В качестве источников ультрафиолетовой радиации в аптеках применяют  специальные лампы БУВ (бактерицидная  увиолевая). Излучение лампы БУВ обладает большим бактерицидным  действием, так как максимум излучения лампы близок к максимуму бактерицидного действия (254 нм). В то же время образование озона и окислов азота незначительно, поскольку на долю волн, образующих эти продукты, приходится 0,5 %. Промышленностью выпускаются лампы БУВ-15, БУВ-30, БУВ-60 и др. (цифра обозначает мощность в ваттах).     В настоящее время ультрафиолетовые лампы широко используются в аптеках  для стерилизации воздуха, воды для  инъекций и воды дистиллированной, вспомогательных материалов и т. д.     Для обеззараживания воздуха аптечных помещении используют различные бактерицидные лампы. Количество и мощность бактерицидных ламп должны подбираться с таким расчетом, чтобы при прямом облучении на 1 м объема помещения приходилось не менее 2—2,5 Вт мощности излучателя, а для экранированных    бактерицидных    ламп — 1  Вт.     Настенные и потолочные бактерицидные облучатели подвешиваются на высоте 1,8—2 м от пола, размещая их по ходу конвекционных  токов воздуха, равномерно по всему  помещению. В отсутствие людей стерилизацию воздуха проводят неэкранированными лампами из расчета 3 Вт мощности лампы на 1 м" помещения. Время стерилизации 1,5—2 ч. Удобнее пользоваться в аптеках экранированными лампами, лучи которых направлены вверх и не оказывают воздействия на глаза и кожные покровы. Наличие экранированных ламп позволяет обеззараживать воздух в присутствии персонала. В этом случае число ламп определяется из расчета 1 Вт мощности лампы на 1 м3 помещения.          При стерилизации воздуха УФ-радиацией  необходимо учитывать возможность  многочисленных химических реакций (фотораспад, фотоперегруппировка, фотосенсибилизация и др.) лекарственных веществ при поглощении ими радиации. Если натрия, кальция и калия хлориды, магния сульфат, натрия цитрат и другие вещества не поглощают излучение в области 254 нм, то барбитал натрия, дибазол, папаверина гидрохлорид, апоморфин, новокаин, анальгин поглощают его, следовательно, в этих веществах могут протекать различные фотохимические реакции. Поскольку в настоящее время этот вопрос полностью не изучен, целесообразно все лекарственные вещества, находящиеся в помещении, хранить в таре, не пропускающей УФ-радиацию (стекло, полистирол, окрашенный полиэтилен и др.).     При стерилизации воздуха УФ-радиацией  необходимо соблюдать правила техники  безопасности, чтобы избежать нежелательного воздействия на организм. При неумелом пользовании облучателями может произойти ожог конъюнктивы глаз и кожи. Поэтому категорически запрещается смотреть на включенную лампу. При изготовлении лекарственных препаратов в поле УФ-радиации надо защищать руки 2 % раствором или 2 % мазью новокаина или кислоты парааминобензойной. Также необходимо систематически проветривать помещение, так как при этом образуются окислы азота и озон.     УФ-радиацию используют и для стерилизации воды дистиллированной при подаче ее по трубопроводу, что имеет большое  значение при асептическом изготовлении лекарственных препаратов в отношении наличия микроорганизмов в нестерильных лекарственных формах. При стерилизации воды дистиллированной не происходит накопления пероксидных соединений. Под влиянием УФ-радиации инактивируются некоторые пирогенные вещества, попавшие в воду.      Лампы ультрафиолетового излучения целесообразно  использовать для обеззараживания  поступающих в аптеку рецептов и  бумаги, являющихся одним из основных источников микробного загрязнения  воздуха и рук ассистента. Ультрафиолетовую радиацию можно использовать также для стерилизации вспомогательных материалов и аптечного инвентаря, что имеет большое значение для создания асептических условий.     Химическая  стерилизация.      Этот  метод основан на высокой специфической (избирательной) чувствительности микроорганизмов к различным химическим веществам, что обусловливается физико-химической структурой их оболочки и протоплазмы. Механизм антимикробного действия веществ еще не достаточно изучен. Считают, что некоторые вещества вызывают коагуляцию протоплазмы клетки, другие действуют как окислители, ряд веществ влияет на осмотические свойства клетки, многие химические факторы вызывают гибель микробной клетки благодаря разрушению окислительных и других ферментов.     Химическая стерилизация подразделяется на стерилизацию газами и стерилизацию растворами. Газовая стерилизация.      Своеобразной  химической стерилизацией является метод стерилизации газами и аэрозолями. Для этого можно использовать газы: оксиды этилена и пропилена, оксиды (3-пропиллактона, полиэтиленоксиды, смесь этилена оксида с углерода диоксидом или метилом бромистым и др.).     Газовая стерилизация. Этот вид химической стерилизации основан на применении летучих дезинфицирующих веществ, легко удаляемых из стерилизуемого объекта, путем слабого нагревания или вакуума. Применяется для стерилизации чувствительных к нагреванию лекарственных веществ. На практике используются два вещества — окись этилена и р-пропиолактон. Их антимикробное действие основано на спонтанном гидролизе, которому указанные газы подвергаются в растворе, в результате чего образуются соединения, непосредственно действующие на микроорганизмы.     Метод стерилизации окисью этилена в смеси  с углекислым газом был включен  в фармакопею США 1965 г. и Британскую фармакопею 1963 г. Жидкая окись этилена кипит при 10,7°, хранится в стальных баллонах, легко воспламеняется, раздражающе действует на кожу. В концентрации 0,5 мг на 1 мл окись этилена становится безвредной для человека. Для еще большего уменьшения вредного воздействия применяется в смеси с углекислым газом (9+1 часть). Окись этилена используют для стерилизации как термолабильных веществ, так и инструментов, аппаратуры, пластмасс, перевязочных материалов. Обработку осуществляют в специальных аппаратах с камерами, где поочередно создают вакуум и давление, после чего производят 2—4-кратную обработку стерильным воздухом. Для стерилизации растворов достаточно 400—500 мг окиси этилена на 1 л при 20°; длительность экспозиции 6 ч. Для стерилизации растворов р - пропиолактоном применяют 0,2% объемную концентрацию газа при 37°С в течение 2 ч.     При химической стерилизации газами погибают вегетативные формы микроорганизмов  и плесневые грибы. Чувствительность различных видов микроорганизмов  к ядовитым газам весьма индивидуальна. Так, стрептококки погибают .в воздухе при концентрации этилена оксида 500 мг/м

СУЛЬФАНИЛАМИДЫ

Группа хинолонов/фторхинолонов

Симптомы

Диагноз ВИЧ-инфекции



Положительный результат реакции, подтверждающий первоначальный диагноз- отсутствие гемолиза, отрицательный результат- наличие гемолиза.
Реакция радиального гемолиза
Ставят в лунках геля из агара. После внесения в лунки геля гемолитической сыворотки вокруг них в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза. Таким образом можно определить активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови у больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом.
Реакция иммунного прилипания
Основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. При положительном результате происходит соединение и агглютинация эритроцитов и тромбоцитов.
7 вопрос: Реакции с использованием меченых антител или антигенов.
1) Реакция иммунофлюоресценции-РИФ (метод Кунса)- основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, мечеными флюорохромами, способны светиться в УФ- лучах люминесцентного микроскопа (прямой метод)

Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основных разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс- диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.
2) Иммуноферментный анализ (ИФА)_- выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом- меткой.

После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и его продукты деградации вызывают химическую модификацию хромогена. При этом хромоген меняет свой цвет- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. Наиболее распространен метод твердофазный ИФА, когда один из компонентов реакции (антиген или антитела) сорбирован на твердом носителе, например, в лунках микропанелей из полистирола. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, для определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.
3) Радиоиммунологический анализ (РИА)_
высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген- антитело с применением антигенов или антител, меченых радионуклидом.

РИА применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в очень небольших количествах.
4) Иммуноблоттинг- высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Используют для диагностики ВИЧ и других инфекций.
8 вопрос: Молекулярно- биологические методы диагностики.
1) Полимеразная цепная реакция (ПЦР)- позволяет обнаружить микроб в ис­следуемом материале (воде, продуктах, ма­териале от больного) по наличию в нем ДНК микроба без выделения последнего в чистую культуру.
Для проведения этой реакции из исследу­емого материала выделяют ДНК, в которой определяют наличие специфичного для дан­ного микроба гена. Обнаружение гена осу­ществляют его накоплением. Для этого необ­ходимо иметь праймеры комплементарного З'-концам ДНК исходного гена. Накопление (амплификация) гена выполняется следую­щим образом. Выделенную из исследуемого материала ДНК нагревают. При этом ДНК распадается на 2 нити. Добавляют праймеры. Смесь ДНК и праймеров охлаждают. При этом праймеры, при наличии в смеси ДНК искомо­го гена, связываются с его комплементарными участками. Затем к смеси ДНК и праймера добавляют ДНК-полимеразу и нуклеотиды. Устанавливают температуру, оптимальную для функционирования ДНК-полимеразы. В этих условиях, в случае комплементарности ДНК гена и праймера, происходит присоединение нуклеотидов к З'-концам праймеров, в резуль­тате чего синтезируются две копии гена. После этого цикл повторяется снова, при этом ко­личество ДНК гена будет увеличиваться каждый раз вдвое. Проводят реакцию в специальных приборах — амплификаторах.

ПЦР применяется для диагностики вирусных и бактериальных инфекций.


2) Рестрикционный анализ. Данный метод основан на применении фер­ментов, носящих название рестриктаз. Рестриктазыпредставляют собой эндонуклеазы, которые расщепляют молекулы ДНК, разрывая фосфатные связи не в произвольных местах, а в определенных последовательностях нуклеотидов. Особое значение для методов мо­лекулярной генетики имеют рестриктазы, кото­рые узнают последовательности, обладающие центральной симметрией и считывающиеся одинаково в обе стороны от оси симметрии. Точка разрыва ДНК может или совпадать с осью симметрии, или быть сдвинута относи­тельно нее.

В настоящее время из различных бактерий выделено и очищено более 175 различных рестриктаз, для которых известны сайты (участки) узнавания (рестрикции). Выявлено более 80 различных типов сайтов, в которых может про­исходить разрыв двойной спирали ДНК.
В геноме конкретной таксономической еди­ницы находится строго определенное (генети­чески задетерминированное) число участков узнавания для определенной рестриктазы.
Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать определенной рестриктазой, то это приведет к образованию строго опреде­ленного количества фрагментов ДНК фикси­рованного размера.
Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью электрофореза в агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быстрее, чем более крупные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окрашива­ют бромистым этидием и фотографируют в УФ-излучении. Таким образом, можно полу­чить рестрикционную карту определенного вида микробов.
Сопоставляя карты рестрикции ДНК, вы­деленных из различных штаммов, можно оп­ределить их генетическое родство, выявить принадлежность к определенному виду или роду, а также обнаружить участки, подвергну­тые мутациям.
Этот метод используется также как началь­ный этап метода определения последователь­ности нуклеотидных пар (секвенирования) и метода молекулярной гибридизации.


3) Метод молекулярной гибридизации- позволяет выявить степень сходства раз­личных ДНК. Применяется при идентифи­кации микробов для определения их точного таксономического положения.
Метод основан на способности двухцепочечной молекулы ДНК при повышенной температуре (90 °С) в щелочной среде денатурировать, т. е. расплетаться на две нити, а при понижении температуры на 10 °С вновь восстанавливать исходную двухцепочечную структуру. Метод требует наличия молекулярного зонда. Зондом называется одноцепочечная мо­лекула нуклеиновой кислоты, меченная ра­диоактивными нуклидами, с которой сравнивают исследуемую ДНК.
Для проведения молекулярной гибридизации исследуемую ДНК расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют на специальном фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий радиоактивный зонд. Создаются ус­ловия, благоприятные для образования двойных спиралей. В случае наличия комплементарности между зондом и исследуемой ДНК, они образу­ют между собой двойную спираль.


4) Риботипирование и опосредованная транскрипцией амплификация рибосомальной РНК
. Последовательность нуклеотидных основа­ний в оперонах, кодирующих р-РНК, отлича­ется консервативностью, присущей каждому виду бактерий. Эти опероны представлены на бактериальной хромосоме в нескольких ко­пиях. Фрагменты ДНК, полученные после об­работки ее рестриктазами, содержат последо­вательности генов р-РНК, которые могут быть обнаружены методом молекулярной гибри­дизации с меченой р- РНК соответствующего виды бактерий. Количество и локализация копий оперонов р- РНК и рестрикционный состав сайтов как внутри р- РНК-оперона, так и по его флангам варьируют у различных вида бактерий. На основе этого свойства построен метод риботипирования, который позволяет производить мониторинг выделенных штам­мов и определение их вида. В настоящее вре­мя риботипирование проводится в автомати­ческом режиме в специальных приборах.

Опосредованная транскрипцией амплифика­ция р- РНК используется для диагностики сме­шанных инфекций. Этот метод основан на обнаружении с помощью молекулярной гиб­ридизации амплифицированных р-РНК, спе­цифичных для определенного вида бактерий.

Исследование проводится в три этапа:


1. Амплификация пула р- РНК на матрице, вы­деленной из исследуемого материала ДНК при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы.
2. Гибридизация накопленного пула р- РНК с комплементарными видоспецифическим р- РНК олигонуклеотидами, меченными флюорохромом или ферментами.
3. Определение продуктов гибридизации методами денситометрии, иммуноферментного анализа (ИФА).
 Реакция проводится в автоматическом ре­жиме в установках, в которых одномоментное определение рРНК, принадлежащих различ­ным видам бактерий, достигается разделе­нием амплифицированного пула рРНК на несколько проб, в которые вносятся компле­ментарные видоспецифическим рРНК мече­ные олигонуклеотиды для гибридизации.

Занятие № 22
тема: Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных заболеваний.

Иммунобиологические препараты.
1 вопрос: Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных болезней.
Иммунотерапия- это использование иммунобиологических препаратов для лечения инфекционных заболеваний.
Иммунопрофилактика- это использование иммунобиологических препаратов для предупреждения инфекционных заболеваний.

Основной целью иммунопрофилактики и иммунотерапии является разработка средств и методов специфической профилактики, лечения и диагностики инфекционных и неинфекционных болезней, сопровождающихся иммунными нарушениями или возникающих в результате нарушений функций иммунной системы. Средства и методы иммунопрофилактики и терапии используют в борьбе с инфекционными болезнями, аутоиммунными и аллергическими заболеваниями, первичными и вторичными иммунодефицитами, в онкологии, трансплантологии и других областях медицины.

2 вопрос: Классификация иммунобиологических препаратов.
Иммунобиологические препараты по современной классификации А.А.Воробьева делятся на группы:

1) Препараты, получаемые из живых или убитых микробов (бактерий, вирусов, грибов) и микробных продуктов и используемые для специфической профилактики и лечения. К ним относятся: живые и убитые вакцины, анатоксины, бактериофаги, пробиотики или эубиотики.
2) Иммуноглобулины и иммунные сыворотки.
3) Иммуномодуляторы для иммунокоррекции, лечения и профилактики иммунодефицитов различной этиологии.
4) Диагностические препараты для выявления антител и антигенов, для постановки кожных проб при аллергиях и иммунопатологических состояниях, для индикации и идентификации микробов в объектах внешней среды, в санитарии и промышленной микробиологии.
3 вопрос: Назначение иммунобиологических препаратов.
Основное назначение профилактических и лечебных иммунобиологических препаратов с учетом их патогенетического действия таково:

1) активация деятельности иммунной системы;

2) подавление (супрессия) иммунных процессов;

3) нормализация работы отдельных звеньев иммунной системы.

Активировать или нормализовать работу иммунной системы нужно при первичных и вторичных иммунодефицитах, при необходимости создания иммунитета к различным микробам или к аллергенам.

К подавлению иммунной системы прибегают при пересадке органов и тканей, а также при аутоиммунных процессах.

В некоторых случаях, когда нарушается нормальный иммунный процесс в результате ослабления какого- либо звена иммунитета, в организм вводят уже готовые иммуномодуляторы (например, интерлейкины)

Смотрите также файлы