Файл: 1. 1 Описторхоз рыб и его распространение на территории Республики Казахстан.rtf
Добавлен: 11.12.2023
Просмотров: 77
Скачиваний: 2
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
СОДЕРЖАНИЕ
1.1 Описторхоз рыб и его распространение на территории Республики Казахстан
1.3 Возбудитель описторхоза рыб и его устойчивость к ряду физических и химических факторов
2.1 Объекты, методы и материалы
2.1.1 Методы паразитологических исследований
2.1.2 Органолептические методы исследования
2.1.3 Физико-химические методы исследования
2.1.4 Методы определения химического состава мяса рыбы
2.1.5 Санитарно-микробиологические методы исследования
Интенсивность реакции обозначали следующим образом: - реакция отрицательная; ± следы окрашивания капли; + реакция слабоположительная; ++ реакция положительная (бурое окрашивание всей капли, более интенсивное по краям); +++ реакция резко положительная (интенсивное темно-бурое окрашивание всей капли).
Определение рН. К 5 г фарша мяса рыбы добавляли 50 мл дистиллированной воды и настаивали в течение 30 мин при периодическом перемешивании, затем пропускали через бумажный фильтр. Фильтрат использовали для исследования. Определяли рН рН-метром (Hanna рН 211). Учитывали, что у рыбы свежей фильтрат слегка опалесцирует (рН до 6,9); у рыбы сомнительной свежести фильтрат слегка мутноватый (рН 7,0-7,2); у рыбы несвежей фильтрат мутный, запах неприятный (рН 7,3 и выше).
Реакция на пероксидазу. В бактериологическую пробирку вносили 2 мл водной вытяжки (1: 100) из жаберной ткани и добавляли 5 капель 0,2% -ного спиртового раствора бензидина. Содержимое пробирки встряхивали, после чего вносили две капли 1% -ного раствора перекиси водорода.
2.1.4 Методы определения химического состава мяса рыбы
Для определения химического состава мяса рыб использовали пробы свежей снулой рыбы (из спинной мускулатуры карасей двухлеток), выловленных из озера Большое в районе Узынколь.
Определение массовой доли воды высушиванием при 100-105 С. Метод основан на испарении воды из продукта при тепловой обработке и определении изменении массы его взвешиванием.
Навеску спинной мускулатуры от 1,5 до 2 г, взвешенную с абсолютной погрешностью не более 0,001 г, помещали в чистую высушенную и тарированную бюксу со стеклянной палочкой, при помощи которой распределяли навеску продукта в бюксе ровным тонким слоем. Бюксу закрывали притертой крышкой, взвешивали на аналитических весах и высушивали в сушильном шкафу при 100-105 градусах до постоянной массы. Первое взвешивание проводили через З ч после начала сушки, последующие - через 30-40 мин. Постоянная масса считалась достигнутой, если разница между двумя взвешиваниями не превышала 0,001 г. В бюксу предварительно вносили 5-10 г песка и навеску продукта тщательно перемешивали.
Массовую долю Х3 в процентах вычисляли по формуле Х3 = (mrm2) 100/mi-m, где m - масса бюксы с песком г, т\ - масса бюксы с навеской и песком до высушивания, г; т2 - масса бюксы с навеской и песком после высушивания, г.
За окончательный результат принимали среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не превышало 0,5%.
Определение массовой доли белка по Къельдалю. Метод основан на окислении органического вещества при сжигании его в серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом титрования.
Навеску мышечной ткани массой 0,6-1 г взвешивали с абсолютной погрешностью не более 0,0005 г, помещали в колбу для сжигания вместимостью 100 см, добавляли несколько мелких кристаллов медного купороса и приливали 10-20 см3 серной кислоты плотностью 1840 кг/м. Колбу осторожно нагревали в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы становилось однородным, прекращали нагревание, давали остыть, добавляли 0,5 г сернокислого калия и продолжали нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не становилась прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. По окончании сжигания содержимое колбы охлаждали и количественно переносили в отгонную колбу вместимостью 500-750 см. Приемником служила коническая колба вместимостью 250-300 см, с 25-30 см серной кислоты 0,05 моль/дм. Конец трубки холодильника погружали в раствор серной кислоты. В отгонную колбу осторожно, по стенкам, избегая смешивания жидкостей, приливали 50-70 см раствора гидроокиси натрия 330 г/дм, бросали кусочек лакмусовой бумаги и быстро закрывали ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, осторожно перемешивали содержимое и нагревали. Реакция жидкости в колбе должна быть резко щелочной. После закипания жидкости в колбе приемник опускали так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора и продолжали отгонку до тех пор, пока не отгонится не менее 2/3 жидкости. Конец отгонки определяли по лакмусовой бумаги. Если отгонка закончена, капля дистиллята не должна вызывать посинения красной лакмусовой бумаги. По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывали водой в приемную колбу и содержащийся в ней избыток серной кислоты оттитровывали раствором гидроокиси натрия 0,1 моль/дм в присутствии метилового красного. Одновременно проводили контрольный анализ без навески исследуемого образца.
2.1.5 Санитарно-микробиологические методы исследования
Использовали окрашивание раствором розоловой кислоты (аурина).
Кусочки мышц с личинками освобождали от жира. На ткань наносили капли розоловой кислоты, а через 2 мин - 0,1 н раствор гидроксида калия, равномерно распределяя его по ткани. Избыток жидкости с препарата снимали фильтровальной бумагой. Накрывали покровньм стеклом и микроскопировали. В этих опытах ткань рыбы окрашивалась в розовый цвет, живые личинки совершенно не окрашивались; мертвые личинки становились розовыми.
Определяли также путем высевания на мясопептонный агар в 2 параллельные чашки, определяли путем посева на среду Кесслер и последующим пересевом положительных проб на плотную дифференциальную среду Эндо; S. Aureus определяли путем посева на солевой рыбопептонный бульон и последующим пересевом на элективную среду - желточно-солевой агар; бактерии рода Salmonella определяли при посеве на среду обогащения (селенитовый бульон) с последующим пересевом в чашки Петри на плотную дифференциально-диагностическую среду - висмут-сульфит агар; бактерии L. monocytogenes определяли путем посева на селективную среду для предварительного обогащения (бульон Фразера) и последующего пересева на селективно-диагностическую среду ПАЛ.
Изучение микробиологических показателей показало, что из мяса рыбы с ИИ более 51 экз. выделена культура кишечной палочки серотипа О19 в одной пробе, а также отмечено превышение КМА-ФАнМ в одной пробе, что превышает допустимую норму по СанПиН 2.3.2.1078-01. Выделение условно-патогенных микроорганизмов из опытных проб рыб, пораженных описторхозом, по-видимому, можно объяснить их проникновением вместе с личинками во время их проникновения через кожный покров рыб, их миграции и в связи с этим ослаблением общей резистентности организма рыб.
2.2 Методы обезвреживания рыбы, пораженной описторхозом
Тепловые обработки являются самыми надежными:
варить рыбу в течение 15-20 минут с момента закипания воды, кусками не более 150г. (крупные экземпляры разрезать на куски);
жарить небольшими кусками весом не более 100 г. в распластанном виде кожицей вниз под крышкой на слабом огне в течение 20-25 минут с каждой стороны в обильном количестве масла;
солить мелкую рыбу в течение 14 дней, крупную (свыше 25 см) в течение 40 суток с добавлением 2 кг соли на 10 кг рыбы, или 200 г соли на 1 кг рыбы, а при плюсовой температуре из расчета 3,5 кг соли на 10 кг рыбы, но вялить 2-3 недели в зависимости от климатических условий (если дождливая погода - то вялить более 3-х недель) с последующим вымачиванием;
вялить по вкусу с предварительным посолом - в течение 2-х недель (вяление рыбы не является способом обезвреживания, если не выдержана технология засола);
горячее копчение при температуре 70-80о в течение 2,5 ч, не рекомендуется солить и вялить язя в домашних условиях,
использованный разделочный инвентарь прокипятить в течение 3-5 минут и хорошо промыть с использованием моющих средств,
Личинки описторхид погибают при низкой температуре (минус 40 градусов в толще рыбы) в течение 7 часов; замораживание рыбы весом до 1 кг при температуре минус 28 градусов в течение 41 часа, при температуре минус 35 градусов в течение 10 часов. Поэтому домашний холодильник (минус 15 градусов - температура в морозильной камере) не убивает личинки паразита, поэтому не рекомендуется использовать камеры бытовых холодильников для обезвреживания даже мелкой рыбы.
3. Исследования по сравнительной оценке методов индикации, определения жизнеспособности и дифференциальной диагностики метацеркарий o. felineus
Стоить отметить также, что большинство из исследованных нами рыб были инвазированы другими метацеркариями трематод, а именно: Paracaenogonimus ovatus (сем. Prohemistomidae), Bolbophoras confiisus (сем. Posthodiplostomidae).
Видовую принадлежность метацеркарий определяли по Сударикову В.Е. (2002). Их нужно дифференцировать исходя из анатомо-морфологических признаков, имея в виду, что до наших исследований не указывалось на наличие этих трематод. Принцип дифференциации указанных видов трематод основан на строении метацеркарий, размеру и форме цист, размеру и форме метацеркарий, освобожденных из цисты.
При обнаружении личинок в рыбе, в том числе при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определять их жизнеспособность. Нами проведена сравнительная оценка ряда методов определения жизнеспособности личинок описторхисов.
По морфологическим признакам. Метацеркарий трематод, выделенных из тканей рыбы с помощью препаровальной иглы, помещали в каплю теплой воды или физраствора (37-40 градусов) на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и исследовали под малым и большим увеличением микроскопа. Явное нарушение целости оболочек цист, грубые изменения внутреннего строения личинки, распад ее содержимого, разрушение экскреторного пузыря являются признаками гибели метацеркарий. Отсутствие указанных показателей свидетельствует о наличии живых личинок.
Метод механического воздействия. Как известно, метацеркарий обладают способностью совершать движения, находясь в цисте. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений личинки свидетельствует о ее жизнеспособности. В этой связи движение личинок стимулировали слабым придавливанием метацеркарий покровным стеклом.
Метод химического воздействия. Вызвать движение личинок можно желчью животных или трипсином. На выделенных метацеркарий наносили несколько капель химического реагента так, чтобы полностью покрыть личинок. Для ускорения эксцистирования предметное (часовое) стекло с личинками слегка подогревали над пламенем спиртовки. Через несколько секунд под воздействием химического раздражителя начинался выход личинок из цист и их активное движение, что служило показателем жизнеспособности. Процесс эксцистирования личинок контролировали под микроскопом. При отсутствии в течение 30 мин всякой двигательной реакции следует учитывать как гибель личинок.
Заключение
Проведенными исследованиями определено, что процент обнаружения метацеркарий в разных группах мышц неодинаков и составляет в среднеспинных мышцах - 51,52%, переднеспинных - 28,84%, верхнехвостовых 15,94%, грудных - 1,52%, брюшных - 1,33% и нижнехвостовых - 0,85%.
Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме (в большинстве случаев) с поражением метацеркариями других трематод, что необходимо учитывать при постановке диагноза на описторхоз.