ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 11.12.2023
Просмотров: 24
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
В ЧЕМ ЗАКЛЮЧАЕТСЯ ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАЗБАВИТЕЛЕЙ
Назначение компонентов разбавителей
В настоящее время для разбавления спермы применяют в ос-новном глюкозо- цитратно-желточные, гликокол-цитратно- желточ-ные, глюкозо-хелато-цитратные. молочные, медовые и ряд других разбавителей, которые позволяют использовать сперму в течение 2-3-х дней хранения при температуре 0°+2°с.
Глюкоза и гликокол в разбавителях служат питательным энерге-тическим материалом и, предохраняя от потери электрического заряда, предотвращают агглютинацию спермиев. Цитрат натрия является естественным буфером спермы (рН 7,8-8,0), нейтрализует молочную кислоту и другие кислые продукты распада, понижает набухание коллоидов, связывает ионы кальция, участвует $ процессе дыхания спермиев.
Торможение обменных процессов в спермиях осуществляется за счет температурного (при 0° с и минусовых температурах ) и кислот-ного анабиоза (углекислота, хелатон, органические кислоты), а также придание сперме студнеобразной консистенции при добавлении желатина или поливинилового спирта (однако последнее используется крайне редко).Повышение устойчивости спермиев к охлаждению и замораживанию проводится добавлением в разбавители лецитина (в желтке ку-риного яйца до 7 %) и глицерина (способствует витрификации, т.е. аморфному замораживанию биологических жидкостей без образования кристаллов).
Приготовление разбавителей
Разбавители готовят перед самым получением спермы. Некото-рые схемы рецептов разбавителей для краткосрочного и долговремен-ного хранения спермы Глоково-желточные разбавители готов ко пледукошим обраком.в стеклянную колбу отмеряют необходимое количество дистилики. панной волы, доводят ее до кины на рия, вы си пенивают согласно роранту глюкозу и лимоннокислый натрий, высыпают в колбу с волов. стеклянной палочкой размешивают мо полного растворения, охли клают до температуры 38-40°с. Затем берут чистое куриное яно протирают его ватным спиртовым тампоном и пробивают скорлупу с помощью обеззараженного окальнеля. Разламывают скорлупу на две половины и перекладывают желток из одной половины в другую, пока не стечет весь белок. Затем для полного удаления белка желток несколько раз перекатывают на фильтровальной бумаге. стерильных пинцетом прокалывают желточную оболочку и, придерживая её, сливают желточную массу в разбавитель из расчета 1 желток среднето куриного яйца (15,0 - 20,0) на 100 мл разавителя. Разбавитель с желтком тщательно перемешивают стеклянной палочкой
После этого на каждые 100 мл среды добавляют бактериостати-ческие вещества спермосан-3 или пенициллин, стрептомицин и стреп-тоцид; 25 тыс. ед. соответствует 0,025 г вещества. Если невозможно отвесить требуемое малое количество антибиотиков, то содержимое флакона с антибиотиками растворяют в 2 мл дистиллированной воды и после этого к среде добавляют соответствующей объём раствора данного антибиотика. Например, если во флаконе содержится 500 тыс. ед., которые растворены в 2 мл дистиллированной воды, то на 100 мл среды надо добавить 0,1-0,2 мл раствора антибиотика, тщательно перемешивая его в разбавителе.
Разбавление спермы
После приготовления разбавителя получают от производителя сперму и оценивают её на густоту и подвижность. К разбавлению допускается сперма барана с оценкой не ниже, чем Г-8, сперма быка - Г-8 и с-8, сперма жеребца - 6, хряка - 7.Перед разбавлением спермы необходимо предварительно проверить качество приготовленного разбавителя путём смешивания па предметном стекле капель спермы и разбавителя и проверки активно-сти разбавленной спермы под микроскопом. Если активность спермы не понизилась, приступают к разбавлению всей спермы. степень разбавления спермы устанавливается в зависимости от густоты и подвижности спермиев. сперму быка разбавляют в отношении 1; 10;
1:15, 1:30; 1:50; барана- 1:1; 1:2; 1:3; 1:4; хряка- 1:2; 1:3; 1:5; жеребца-1:2; 1:3; 1:4; 1:5. В целях предотвращения холодового удара в момент разбавления спермы разбавитель перед употреблением необходимо подогреть в теплой воде до температуры +25, +30°с. Рекомендуется медленно приливать разбавитель к сперме, а не наоборот. При разбавлении состав перемешивают стеклянной палочкой, с момента получения до разбавления спермы не должно проходить более 5-10 минут.
Разбавитель можно хранить при комнатной температуре ( +20, +25°c) не более 6 часов, а при 0°с - в течение суток. Разбавление спермы барана проводят в спермоприемнике, доливая к сперме разбавитель.
После смешивая спермы с разбавителем тот час же берут каплю спермы для оценки. Если подвижность спермиев снизилась, сперму бракуют, а разбавитель готовят заново. следует помнить, что иногда снижение подвижности бывает временным, а через 1-1,5 часа движе-ние спермиев полностью восстанавливается.
ДОЛГОВРЕМЕННОЕ ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ
Порядок работы
Гибель спермиев вне организма при активном обмене вешеств происходит в результате истощения запасов энергетических веществ и предного денет вия станс окаливают полавино в обмена, Кроме того,
отрицательное действие оказывают попавшие в сперму микробы и резкие колебания температуры.
Поэтому для сохранения спермы необходимо во всех случаях переводить её в неактивное обратимое состояние, т. е. в состояние анабио-за путем снижения или полного прекращения обменных процессов.
Основным методом длительного сохранения спермы быка, барана и жеребца является замораживание её в жидком азоте при температуре - 196° с, когда обмен веществ у спермиев практически прекращается.
Для замораживания спермы необходимо соблюдать следующие
условия:
-
Сперму, разбавленную специальными средствами ( с глице-рином) выдерживают в течении 4-5 часов при температуре 0, +4° с для охлаждения и эквилибрации (уравновешивание сред), после чего замораживают в жидком азоте по принятой технологии. -
В течении всего срока хранения замороженной спермы необходимо поддерживать постоянную температуру - 196° с.
-
Для перевозки и хранения замороженной спермы используют двустенные металлические сосуды различной емкости с вакуумной порошковой изоляцией (сосуды Дьюара, сД). суточный расход жидкого азота в них колеблется от 1 до 3%. При работе с сосудами Дьюара необходимо соблюдать нужные технологические приёмы технику безопасности. -
Перед осеменением животных на пунктах искусственного осе-менения, оттаянную сперму необходимо проверить на активность. Нельзя преждевременно оттаивать сперму или повторно её замораживать. -
Замороженную сперму быков можно доставлять в хозяйства 4 раза в год и использовать по мере надобности. Раз в месяц необходимо пополнять жидким азотом сосуды, в которых хранится сперма.
Замораживание спермы быка в гранулах
Во многих хозяйствах нашей страны в последние годы концен-трированную сперму быка замораживают в мелких гранулах ( 0,2 мл) по упрощенной технологии.Свежеполученную сперму после её оценки разбавляют в зависимости от концентрации в 2-4 раза средой следующего состава:
Воды дистилированной-100 мл
Лактозы-11.5 г
Глицерина-5 мл
Желтка курнных яиц -20мл
Пенициллина и стрептомицина- по 30 тыс. Е.Д.
Сразу перед разбавлением подогревают до +30, +35° с. Разбав-ленную сперму минут 10-15 выдерживают при температуре комнаты, а затем помешают в холодильник с температурой около 0° (+2, +4° с) на 4-6 часов. После охлаждения и эквилибрации сперму замораживают путём разливки в луночки фторопластовой пластины, укрепленной над жидким азотом в специальных емкостях. Пластину со спермой выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 5-10 см, в течение 1,5-2 минут, погружают в жидкий азот на 1-2 минуту. После чего пластинку поднимают, а гранулы ссыпают в полотняные мешоч-ки или металлические канистры, которые опускают на хранение в сосуды Дьюара.
На пунктах искусственного осеменения каждую гранулу замороженной спермы (разовая доза) оттаивают в 1 мл тёплого (+38, +40°c) 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия. Каплю оттаянной спермы оценивают под микроскопом на активность и допускают к осеменению с оценкой не ниже 4 баллов.
замораживание спермы быкя в соломинках (пайетах)
Для этого метода используют полипропиленовые трубочки ви костью 0,25 мл. Сперму разбавляют пактово-фруктозо-раффиного-нагнисво-глицерино-желточной средой с таким расчетом, чтобы » панете содержалось не менее 15 млн. подвижных спермиев. Каждую соломинку маркируют с указанием наименования предприятия, клиники и номера быка, даты получения спермы. Для разбавления используют машину, автоматически заполняющую спермой соломинки и закупоривающую их с обеих концов стерильными шариками.Олин шарик используется как пробка поршень, а другой гермети-зирует соломинку. Можно соломинки заполнять спермой вакуумным способом, для чего применяют специальную вакуумную камеру. Для замораживания допускают сперму с оценкой по подвижности не ниже 8 баллов. Заполненные пайеты раскладывают на штативе; последние ставят для охлаждения в холодильник при температуре +4° с на 3-4 чася.После чего замораживают в газообразном азоте при температуре -120 - 130° с в течение 5 минут. Замороженную сперму хранят в специальном хранилище в жидком азоте при температуре - 196° с.
Криоконсервацию спермы в соломинках осуществляют на авто-матической линии нового поколения в парах жидкого азота. В зави-симости от потребностей племпредприятия предусматривается авто-матическая система, рассчитанная на 420, 2400, 5250 соломинок по 0,
25 мл. Система позволяет контролировать температурный режим не только в камере, но и в соломинке; отражает и сохраняет все данные замораживания. Имеется возможность визуализации замораживания семени в реальном времени. Режим замораживания в автоматической системе происходит в следующей последовательности.После завершения процесса замораживания открыть крышку морозильной камеры и расфасовать соломинки согласно кличкам производителей в предварительно подготовленные стаканы или тубы.Следить на экране компьютера за повышением температуры, она не должна быть выше -106°С. В случае повышения температуры закрыть крышку замораживателя и включить вентилятор, опустить температуру до -142°C.
После окончания цикла замораживания пустые рамки погрузить в морозильную камеру, закрыть вентили на сосуде. Нажать кнопку «Сброс азота» (желтая, на блоке внизу) и выбрать на экране компьютера значок «Пуск нагрева». Дождаться окончания нагрева до 45°С.
Выключить систему - отжать кнопки «Сброс азота», «Вентилятор», «Нагревание» и отпустить красную кнопку on/ off.Для оттаивания спермы в соломинках необходимо использовать водяную баню или специальный оттаиватель, термометр, анатомиче-ский пинцет длиной 25-30 см, ножницы, стерильные марлевые сал-фетки, полотенце, тампонницу с тампонами, пропитанными 96°-ным спиртом-ректификатом, микроскоп с нагревательным столиком, предметные и покровные стекла, 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия и защитные очки.После очистки и дезинфекции рабочего стола раскладывают весь необходимый инструмент, включают водяную баню или оттаива-тель и нагревательный столик с микроскопом, на который кладут чистые предметные и покровные стекла.Как только температура водяной бани или оттаивателя достир-нет рабочего диапазона (38-40°С), надевают защитные очки, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подтягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекают одну соломинку, энергично стряхивают с нее остатки жидкого азота и быстро переносят в оттаи-ватель или водяную баню. Сперму в соломинках оттаивают в водяной бане или оттаивателе при температуре 38-40°С в течение 8-10 с. Соломинку после оттачеле ния насухо протирают марлевой салфеткой и, держа за конец, встряхи-вают, чтобы воздушный пузырек опустился к пробке. Острыми ножни-пами или специальным приспособлением отрезают пробку с одного конна соломинки, заправляют соломинку в шприи для осеменения, надевают санитарный чехол, затем, аккуратно нажимая на порщень шприца, выдавливают каплю спермы на предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, стеклянной палочкой добавляют каплю 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, перемешива-ют, накрывают покровным стеклом и оценивают по подвижности. От-таянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.Процесс оттаивания семени в соломинках происходит в определенной последовательности.