ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 11.12.2023
Просмотров: 28
Скачиваний: 1
ВНИМАНИЕ! Если данный файл нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам.
Замораживание спермы барана
При круглогодовом (10 мес.) взятии сперму в течение недели от барана рекомендуется получать по 5-6 эякулятов дуплетной садкой с интервалами 10-15 мин. и промежутками между дуплетами - 48 часов.
Для замораживания сперму барана разбавляют двумя средства-ми: лактозо-желточной (ЛЖ) и лактозо-желточно-гуммиарабико-трис-цитратно-глицеритновой (ЛЖГТЦГ).
Состав лактозо-желточной среды:
Вода дистиллированная, мл - 100
Лактоза, г - 12
Желток свежего куриного яйца, мл - 20
Спермосан, тыс. Ед. - 25
Для ее приготовления в чистую стерильную колбу вносят навес-ку лактозы, заливают дистиллированной водой и закрывают пищевой алюминиевой фольгой или пергаментной бумагой, кипятят в течение 1 часа на водяной бане. После охлаждения раствора до 40° с вводят в него "спермосан-3" и желток куриного яйца.
Состав лактозо- желточно- гуммиарабико-трис-цитратно-глицериновой среды
Вода дистиллированная, мл - 100
Лактоза, г- 14,5 Гуммиарабик (порошок), г 6
Трис (оксиметил) - аминометан, мг – 600
Лимонная кислота, мг - 270
Желток свежего куриного яйца, мл - 20
Глицерин, ч. д. а., мл - 17
"спермосан-3", 1ыс. ед. - 25
Для приготовления среды в стерильную колбу вносят навеску лактозы, гуммиарабика, трис-аминометана и лимонной кислоты. Тиа-тельно перемешивают; заливают необходимым количеством горячен кипяченой воды и закрывают колпачком из фольги или пергаментной бумаги, помещают в кипящую водяную баню до полного растворения всех компонентов. Затем в колбу вносят глицерин и раствор фильтру-ют через слой стерильной ваты. После чего, закрыв колбу колпачком, раствор стерилизуют на водяной бане в течение 2-х часов. В охла-ждённый до 40° с раствор добавляют "спермосан-3" и желток курино-го яйца. Приготовленные среды можно использовать в течении 4-х часов при температуре +24-26° с.Полученную от баранов сперму используют для разбавления и замораживания с оценкой по подвижности не ниже 8 баллов и концентрацией не менее 2,5 млрд. спермиев в 1 мл.Сперму разбавляют в два приема. Вначале к одному обьёму спермы добавляют ЛЖ среды, имеющей температуру +28° с. среду вливают осторожно по стенке спермоприемника при постоянном помешивании.После этого к одному объёму получившейся разбавленной спермы добавляют один объём ЛЖГТПГ среды с температурой +24° с.Окончательное разбавление спермы получится в 3 раза. Разбав-ленную сперму разливают во флаконы и выдерживают в холодильни-ке при температуре +2-5° с в течение 2-х часов.После чего её замораживают в гранулах по 0,2 см в луночках на пластинах сухого льда или фторопластовых пластинках, укреплённых над жидким азотом.Гранулы замороженной спермы после выборочной проверки на активность собирают в алюминиевые тубы или ссыпают в канистры и хранят в жидком азоте.Для оттаивания гранул замороженной спермы на пунктах применяют специальное устройство (оттаиватель), состоящий из внешнего и внутреннего сосудов, между стенками которого заливают горячую воду с температурой +75-80° с. с нижней части внутреннего сосуда (кюветы) находится отверстие для оттока оттаявшей спермы в под-ставленный флакон.Гранулы спермы для оттаивания ссыпают в кювету и через 8-12 секунд из нижнего отверстия оттаявшая сперма начинает стекать во флакон.
Оттаивают сперму в количестве не более 15-20 доз и используют после проверки с активностью не ниже 4-х баллов в течение 15 минут.
Замораживание спермы жеребца
Для замораживания пригодна сперма с подвижность спермиев не ниже 5 баллов и концентрацией не менее 150 млн. спермиев в 1 мл.
Полученную и профильтрованную (через 4 слоя марли) сперму после оценки разбавляют б 4-5 раз одной из следующих сред: лакто-
хелато-цитратно- желточной
(ЛХЦЖ)
ИлИ лактозо-желточно-
сульфатной (ЛЖс).
Состав ЛХЦЖ: лактоза - 10 г. желток - 1,6 г, 4,2 %-ный раствор двууглекислой соды - 0, 2 мл, 35,7 % раствор цитрата натрия - 0,25 мг, хелатон - 100 мг, глицерин - 3,5 мл, вода дистиллированная.
Состав ЛЖс: лактоза 10 г, сульфат аммиака - 150 мг. желток -
1,6 г, глицерин -3,5 мл, вода дистиллированная.
Раздавленную сперму охлаждают в холодильнике до близкой к
0° с (+2 -4° с) и выдерживают при такой температуре 2 часа. После чего в виде гранул или в алюминиевых пакетах в холодном газе над поверхностью жидкого азота.При замораживании в виде гранул сперму наносят по 0,2 мл в лунки на поверхности сухого льда. Через 5 минут гранулы замороженной спермы собирают и упаковывают в алюминиевые тубы по 125-130 штук (это составляет разовую дозу в 25 мл). Тубы с гранулами помещают на хранение в жидкий азот.
При замораживании спермы в парах жидкого азота, её предварительно разливают по 25 мл в охлажденные алюминиевые пакеты.Замораживают сперму в сосудах Дьюара или стационарных хранилищах с помощью специальных устройств, которые позволяют автома-тически держать сперму на заданном расстоянии над жидким азотом.Устройство состоит из пенопластового поплавка, съёмного держателя (металлического сита) для ёмкостей со спермой и металлического кольца-испарителя для увеличения интенсивности испарения азота.Пакеты со спермой помещают в держатели, которые вместе с поплавком переносят на поверхность жидкого азота. Испаритель опускают в экидкий азот и контейнер закрывают крышкой (расстояние от пакета ло жидкого азота - 20 мм). Через 5 минут пакеты с замороженной спермой переносят в хранилище с жидким азотом. Для оттаивания гранулированной спермы тубы вынимают из жидкого азота, вскрывают, я гранулы быстро пересыпают ровным слоем в коническую колбу. Колбу погружают в водяную баню пои температуре 38-40° с, слегка взбалтывая круговыми движениями в те-чение 1-2 минут до полного исчезновения гранул.
Для оттаивания спермы, замороженной в алюминиевых пакетах, их быстро переносят пинцетом из жидкого азота на 1-2 минуты в во-ляную баню при температуре 40° с. Пакет, вынутый из воды, протирают стерильной марлей, затем спиртовым тампоном, обрезают стерильными ножницами край пакета и после проверки качества сперму используют для осеменения кобыл. Подвижность в оттаявшей сперме должна быть не ниже 2-х баллов. Доза для осеменения (25 мл) содержит не менее 300 млн. подвижных спермиев.
Техника безопасности при работе с жидким азотом
При работе с жидким азотом необходимо соблюдать правила
техники безопасности во избегании несчастных случаев. Работать нужно в защитных очках, кожаных рукавицах или перчатках.
Попадание жидкого азота на незащищенные участки кожного покрова вызывает ожог (обморожение). При попадании жидкого азота на открытый участок тела, его необходимо быстро смыть водой. При заливке сосуда азотом нельзя заглядывать в горловину, т. к. может произойти выброс жидкого азота вследствие образования большого количества газа.
-
Помещение, где находится сосуд с жидким азотом должно быть проветриваемое, т. к. повышение концентрации азота вызывает у людей головную боль и даже отравление. сосуд в помещении не должен находиться около источников тепла. -
При эксплуатации сосуда Дьюара нельзя плотно закрывать его горловину, т. е. накапливающиеся газы будут повышать давление внутри сосуда и он может взорваться. Во время транспортировки сосуды Дьюара с жидким азотом необходимо хорошо закреплять во избежание их падения и возможного взрыва. В целях предотвращения накопления в сосуде взрывоопасной смеси от обогащения жидкого азота кислородом производят контроль его с помощью переносного газоанализатора ГХП-3. Такой анализ проводят в хранилищах раз в год, а в сосудах на пунктах - раз в 6 месяцев. После накопления кислорода в количестве 15% сосуд выносят на улицу и опорожняют.