Файл: Morfo.pdf

6.Полисахариды капсулы синтезируются бактериями при действии внеклеточных ферментов на дисахариды, или их компоненты образуются внутри клетки, а затем секретируются на поверхность клетки.

7.Капсула – это необязательная структура, ее образование происходит при определенных условиях среды. Патогенные бактерии образуют капсулу внутри организма хозяина (например, пневмококки, бациллы сибирской язвы)

иутрачивают это свойство при культивировании на питательных средах. Бактерии кишечно-тифозной группы образуют капсулу при низкой температуре

(10-20° С) и при наличии сбраживаемых углеводов.

Для некоторых бактерий образование капсулы является постоянным признаком (группа "капсульных бактерий").

8.Капсулы для бактерий являются полезным образованием. Они предо- храняют от повреждений, высыхания, т.к. гидрофильны и хорошо связывают воду. Благодаря своей гидрофильности капсула препятствует фагоцитозупатогенных бактерий в макроорганизме. Образование капсулы – есть признак вирулентности этих бактерий.

Капсулы бактерий не нарушают их обмена веществ, т.к. капсульный слой не препятствует проникновению веществ из внешней среды и обратно.

9.Капсулы выявляются при специальных методах окраски. Для этого используются методы Бурри и Бурри-Гинса, создающие негативное контрастирование вещества капсулы. На край предметного стекла помещают каплю разбавленного водой (1:1) карболового фуксина Циля, в которую вносят петлей исследуемую культуру. Через 2-3 мин. к ней добавляют каплю туши, тщательно перемешивают и готовят препарат "мазка крови". Мазок полностью высушивают на воздухе и микроскопируют в иммерсионной системе. Клетки окрашиваются в красный цвет, капсулы бесцветные, тушь создает темный фон.

10.Обнаружение капсулы у бактерий используется как для их дифференциации, так и для определения их вирулентности.

ЗАНЯТИЕ № 3.

СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. СТРОЕНИЕ И ЗНАЧЕНИЕ НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫХ СТРУКТУР БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. СУЩНОСТЬ И ТЕХНИКА ОКРАСКИ ПО МЕТОДУ ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА И ОЖЕШКО. ВЫЯВЛЕНИЕ ЖГУТИКОВ И ВКЛЮЧЕНИЙ. ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВИТАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ «РАЗДАВЛЕННАЯ» И «ВИСЯЧАЯ» КАПЛЯ И ИХ ФАЗОВО-КОНТРАСТНАЯ МИКРОСКОПИЯ.

Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения.

Задача 1. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ СТРОЕНИЕ И ЗНАЧЕНИЕ ЖГУТИ-

КОВ.

Для этого надо знать:

15

1.Жгутики – тончайшие, иногда спирально извитые эластические нити (канаты), отходящие от тела бактерий. Длина их во много раз превышает размеры тела (3-12 мкм), а диаметр равен 10-30 нм. Жгутики берут начало от цитоплазматической мембраны и прикрепляются к ней и клеточной стенке специальными дисками (базальное тело).

2.Жгутики являются органоидами движения. Жгутики – необязательные структуры клетки. Жгутики имеют спириллы, вибрионы, многие палочковидные формы. Кокки не имеют жгутиков, за исключением единичных видов.

3.Жгутики состоят из продольных нитей– фибрилл, покрытых чехлом. Фибриллы построены из сократительного белка флагеллина. Субъединицы флагеллина уложены по спирали. Импульсы, возникающие в базальном теле, вызывают сокращение этого белка. Сократительная волна движется как в сторону клетки, так и от нее, в результате чего происходит поступательное движение микроба. Жгутики совершают вращательные движения.

4.По числу и расположению жгутиков бактерии делят на следующие

группы:

-монотрихи – имеют один жгутик на одном из полюсов(холерный виб-

рион);

-перитрихи – имеют 20-30 жгутиков по всему телу (кишечная, брюшнотифозная, столбнячная палочки);

-лофотрихи – имеют пучок жгутиков на одном полюсе (синегнойная па-

лочка);

-амфитрихи – имеют один или пучок жгутиков на обоих полюсах(спириллы).

5.Характер движения и его интенсивность у микробов различны, что определяется особенностями расположения жгутиков и физико-химическими

свойствами среды (t°, рН, вязкость, осмотическое давление).

Наиболее быстрые и прямолинейные движения совершают монотрихи (холерный вибрион) и лофотрихи. Перитрихам присущи менее энергичные и более беспорядочные движения. Молодые клетки более подвижны, чем старые.

Передвигаются бактерии беспорядочно или путем направленного движения – таксиса. Хемотаксис – движение по разнице концентраций веществ. Аэротаксис – по разнице концентраций кислорода. Фототаксис – по разности в освещенности.

Под влиянием неблагоприятных факторов(высокая или низкая температура, действие ядов или наркотиков) бактерии могут терять свою подвижность.

6. Для обнаружения жгутиков применяют:

а) специальный метод окраски – серебрение по Морозову: жгутики пропитывают азотнокислым серебром с последующим его восстановлением, что способствует искусственному увеличению их поперечного сечения, в результате чего жгутики удается обнаружить под микроскопом при увеличении в10001200 раз;

б) микроскопическое исследование в затемненном поле зрения со специальным темно-польным конденсором, создающим сильное боковое освещение; при этом видны светящиеся на темном фоне тонкие жгутики;

16

в) исследования с помощью электронного микроскопа; г) наблюдение бактерий в живом состоянии в препаратах"раздавленная"

или "висячая" капля (витальные препараты); при этом вывод о наличии жгутиков делают косвенно – по подвижности микробов.

7.Препарат "раздавленная" капля готовится следующим образом: на обезжиренное стекло наносят каплю воды или0,9 % раствора NaCl и в нее вносят петлей небольшое количество материала(если культура выращена в жидкой питательной среде, то каплю культуры наносят на предметное стекло пастеровской пипеткой). Затем на каплю накладывают покровное стекло так, чтобы не было пузырьков воздуха и жидкость не выступала за края покровного стекла (избыток удаляют фильтровальной бумагой).

8.Препарат "висячая" капля готовят аналогичным образом, но каплю культуры наносят на покровное стекло, которое затем накладывают на предметное стекло с луночкой, края которой смазаны вазелином. Покровное стекло слегка прижимают к предметному и получается герметически закрытая камера,

вкоторой капля долго не высыхает.

Препараты рассматривают в сухой системе микроскопа(объективы 58, 510, 540) при опущенном конденсоре и прикрытой диафрагме, т.к. неокрашенные клетки лучше видны не в проходящем, а в отраженном свете.

Для просмотра витальных препаратов можно также использовать фазовоконтрастную и темно-польную микроскопию.

9. Жгутики являются принадлежностью определенных видов бактерий. В связи с этим данный признак приобрел важное значение для отличия бактериальных видов: дизентерийные и брюшнотифозные палочки внешне похожи, но тифозные палочки подвижны, а дизентерийные неподвижны, и это позволяет отличать их друг от друга.

При встряхивании и других механических воздействиях, при обработке химическими веществами без ущерба для жизнедеятельности клетки легко может происходить утрата жгутиков и образование безжгутиковых вариантов.

ЗАДАЧА 2. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ СТРОЕНИЕ И ЗНАЧЕНИЕ ВОРСИНОК И ВКЛЮЧЕНИЙ.

Для этого надо знать:

1.Ворсинки или фимбрии (пили) – нитевидные поверхностные образования белковой природы, более тонкие и короткие, чем жгутики (3-20 нм х 0,3-10 мкм). Они состоят из белка пилина.

2.Выделяют фимбрии разного типа. Фимбрии общего типа многочисленны (100-200) и покрывают всю поверхность клетки; они ответственны за адгезию, т.е. прикрепление бактерий к субстрату, в том числе к поражаемым клеткам человека и животных, что имеет значение в проявлении патогенного действия. Имеются фимбрии, ответственные за питание, водно-солевой обмен. Термин "пили" применяется чаще для обозначения особых фимбрий – половых или конъюгационных пилей (F-пилей). Эти пили образуются у мужских половых клеток-доноров, которые содержат трансмиссивные плазмиды(F-плазмиды) и участвуют в конъюгации.

17

3.В цитоплазме бактериальной клетки могут быть различныевключения: полисахариды (гликоген, гранулеза), поли-b-оксимасляная кислота, полифосфаты (волютин), кристаллы солей щавелевой кислоты, углекислой извести;

усеробактерий обнаруживаются капельки серы. Включения накапливаются при избытке питательных веществ в окружающей среде и выполняют роль запасных веществ для питания и энергетических потребностей.

Включения имеют отличающийся от цитоплазмы химический состав и окрашиваются в иную окраску. Благодаря разнице в плотности они видны и при микроскопии неокрашенных клеток: жир виден в клетках в виде блестящих ярких капелек.

4.Волютин –полиметафосфат, запасное питательное вещество азотистого обмена. Содержится в виде зерен или капель(в дисперсном состоянии). Волютин встречается в клетках многих бактерий и большинства дрожжей.

Зерна волютина окрашиваются темнее цитоплазмы или избирательно принимают иную окраску, чем цитоплазма (явление метахромазии). Выявление зерен волютина, расположенных на концах клетки у дифтерийных палочек, используется как важный дифференциально-диагностический признак. Они выявляются при окраске по методу Нейссера. Зерна имеют щелочную реакцию, избирательно воспринимают уксусно-кислый метиленовый синий и окрашиваются в темно-синий, почти черный цвет, а цитоплазма, имеющая кислую реакцию, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет.

5.Гликоген (полимер глюкозы) и гранулеза (крахмалоподобный полисахарид) являются резервом углеводного питания клетки, энергетическим материалом для его развития. Включения гликогена чаще всего обнаруживаются в клетках дрожжей и спорообразующих бактерий, а гранулеза – в клетках маслянокислых бактерий. "Глыбки" гликогена окрашиваются раствором Люголя в красно-бурый цвет, а гранулеза – серо-синий цвет.

6.Химический состав липидов и их комплексов весьма сложный и многообразный, широко варьирует в зависимости от видовой специфичности, условий питания и возраста микробной культуры. Обилие жировых веществ характерно для старых форм, для культур, поврежденных различными физикохимическими факторами или развивающихся в неблагоприятных условиях.

Свободные жиры содержатся в клетке в виде жировых капель или липид-

ных гранул из нейтральных жиров и поли-b-оксимасляной кислоты. Они окрашиваются растворами судана III в красно-оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный цвет, цитоплазма остается бесцветной.

Задача 3. ОБЪЯСНИТЬ СУЩНОСТЬ, ЗНАЧЕНИЕ И ТЕХНИКУ ОКРАСКИ ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ.

Для этого надо знать:

1. Бактерии, содержащие большое количество жиро- и воскоподобных веществ, а также миколовую кислоту в клеточной стенке и цитоплазме(туберкулезные и лепрозные палочки), являются кислотоустойчивыми и не могут быть окрашены простыми методами. Их окрашивают по методу Циля-

18