ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3818
Скачиваний: 1
1. Предмет, объект и задачи клинической лабораторной микробиологии.
Клиническая микробиология - раздел медицинской микробиологии, изучающий
взаимоотношения, складывающиеся между организмом и микробами в норме, при
патологии, в динамике воспалительного процесса с учетом проводимой терапии
до констатации клиницистом состояния клинического или полного
выздоровления.
Задачи клинической микробиологии близки к задачам медицинской
микробиологии. Специфика определяется тем, что кли- ническая микробиология
исследует одну группу микробов - УПМ, одну группу заболеваний -
оппортунистические инфекции и одну антропогенную экосистему - больничные
учреждения.
Поэтому задачи клинической микробиологии следующие.
• Изучение биологии и роли УПМ в этиологии и патогенезе гнойно-
воспалительных заболеваний человека.
• Разработка и использование методов микробиологической диагностики,
специфической терапии и профилактики заболеваний, вызванных микробами,
встречающихся в неинфекционных стационарах.
• Исследование микробиологических аспектов проблем ВБИ, дисбактериоза,
лекарственной устойчивости микробов.
• Микробиологическое обоснование и контроль за антимикробными
мероприятиями в больничных стационарах.
2. Общие принципы диагностики инфекционных болезней.
Существует 5 основных методов диагностики:
1) микроскопический — позволяет обнаружить возбудителя непосредственно в
материале, взятом от больного. Для этого мазок окрашивают различными
способами. Этот метод
решающую роль при диагностике многих
инфекционных заболеваний: туберкулеза, малярии, гонореи и др.;
2) бактериологический — заключается в посеве исследуемого материала на
питательные среды. Этот метод позволяет выделить возбудителя в чистом виде и
изучить его морфологические признаки, ферментативную активность и
идентифицировать его;
3) биологический метод — осуществляют путем выделения возбудителя при
заражении лабораторных животных, которые восприимчивы к данному
заболеванию. Этот метод дорогостоящий, поэтому применяется ограниченно;
4) серологические методы исследования — основаны на выявлении
специфических иммунных антител в сыворотке крови больного. Для этого
используют
различные
иммунологические
реакции:
реакция
Видаля
(используется для выявления брюшного тифа);
5) аллергический метод — ставятся кожно-аллергические пробы, введение
аллергена накожно или внутрикожно; используются для диагностики туберкулеза,
туляремии, лепры и т. д.
3. Документы, регламентирующие деятельность лаборатории клинической
микробиологии. Штатная структура. Номенклатура микробиологических
исследований. Порядок проведения исследований. Регистрация результатов.
При проведении работ в микробиологической лаборатории обязательным
является ведение следующих журналов:1. Форма 1 – журнал регистрации
биологического материала (культур), поступающих для исследования. 2. Форма
2 – журнал выделенных культур и их уничтожения. 3. Форма 3 – журнал (для
лабораторий, работающих с возбудителями I и II групп) движения микробных
культур и материалов, подозрительных на зараженность.
В
клинико-диагностических
лабораториях
специалисты
со
средним
профессиональным образованием могут занимать должности медицинского
технолога
(разряды
9—12),
фельдшера-лаборанта
или
медицинского
лабораторного техника (разряды 8—11), лаборанта (разряды 6—10) в
соответствии постановлением Министерства труда и социального развития № 43
от 27.08.1997 г.
Номенклатура исследований микробиологической лаборатории ФБУЗ Центр
гигиены и эпидемиологии
Микробиологические исследования клинического материала
Микробиологические исследования пищевых продуктов
Микробиологические исследования почвы
Микробиологические исследования воды
Точность бактериологического исследования зависит от правильности взятия
материала и своевременной доставки его в лабораторию. В зависимости от
характера патологического процесса, места максимальной (избирательной)
локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду могут
исследовать следующий биологический материал:
−
мокроту (при заболеваниях органов дыхания);
−
испражнения (при желудочно-
кишечных инфекциях);
−
мочу (при поражении почек и мочевыводящих путей);
−
гнойное отделяемое (из гнойных очагов);
−
кровь (при кровяных инфекциях).
Материал необходимо брать в стерильную посуду с соблюдением правил,
обеспечивающих стерильность. На каждый стеклянный сосуд с биологическим
материалом необходимо наклеить этикетку, где указывается ФИО пациента и
дата взятия. К материалу, отправляемому в лабораторию, должно прилагаться
направление, в котором указывается: 1. Вид биологического материала. 2.
Учреждение, направившее материал. 3. ФИО пациента. 4. Его возраст. 5. Дата
взятия материала. 6. Клинический диагноз.7. Цель исследования. 8. Подпись
направляющего врача. Взятый исследуемый материал должен быть доставлен
влабораторию в кратчайший срок. Если этот срок удлиняется, материал
необходимо хранить в холодильнике. Материал,содержащий вирусы, должен и
при транспортировке находиться в условиях низкой температуры (например в
термосе со льдом). Доставку инфицированного материала в лабораторию следует
производить с соблюдением мер предосторожности: в закрытой посуде, в
специальных металлических биксах, пеналах, чемоданах. Доставка особо
опасного материала (от пациентов с холерой, чумой, натуральной оспой и др.)
осуществляется в соответствии со специальными инструкциями. Исследуемый
материал помещают в плотно закрывающиеся сосуды, обвязывают пергаментом
или другим водонепроницаемым материалом, после чего их обертывают
салфетками, смоченными 5% раствором фенола или лизола. После этого сосуды
помещают в жестяные коробки с крышкой или металлические биксы.
Поступивший в лабораторию биологический материал регистрируют в
специальном журнале. Исследуемый материал в лаборатории можно хранить:
неконсервированный – при температуре 4°С не более 1–2 суток,
консервированный в 50% глицерине, например кусочки органов и тканей, в
течение недель.
4. Система обеспечения качества микробиологических исследований.
Требования к качеству исследований.
Обеспечивает правильность надёжность воспроизводимость всех тестов
Внешняя оценка качества работы бак лаб по 2м показателям: идентификация
микроорганизмов до рода вида и определение оборудования, питательных сред,
реактивов, самого процесса выполнения анализа, выдача результатов.
В
качестве
контрольных
материалов
используются
референтные
микроорганизмы.
Контроль качества: оборудования - аппаратов, приборов; чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам диск-диффузным методом; питательных сред,
дисков с антибиотиками тестирующих контрольных штамов.
5, контроль качества питательных сред. Контрольные штамы
1. Белковые основы (пептоны, гидролизаты и т.п.), стимуляторы роста
(дрожжевые и другие экстракты).
2. Среды для контроля качества препаратов (стерильность).
Принципы контроля качества питательных сред.
2. Эффективность - по выходу микробных тел с 1 мл питательной среды (в
млрд./мл) - для группы I/5 и II/1.
3. Показатель стабильности основных свойств микроорганизма - по отношению
числа
атипичных
по
морфологии,
биохимическим,
серологическим,фаголизабельным и др. свойствам колоний к общему числу
колоний на чашках с испытуемой средой (в %) - для всех групп, кроме II/2.
4. Дифференцирующие свойства - по выраженности отличительных признаков
патогенных микробов от непатогенных видов и естественных ассоциантов (по
структурным особенностям колоний, их окраске, изменению цвета и др.
признакам) - для групп I/3, I/4.
5. Показатель ингибиции - по степени подавляющего воздействия на
постороннюю микрофлору. Выражается либо кратностью того минимального
разведения, при котором полностью отсутствует рост посторонней микрофлоры,
либо величиной отношения числа сформировавшихся клеток тест-штамма к
расчетному количеству посеянных при соответствующем разведении клеток - для
всех сред I группы, кроме I/1, I/4.
6. Скорость роста - по минимальному времени инкубации после посева культур,
достаточному для их выявления (выражается в часах), - для всех групп
питательных сред.
Тест-штаммы культур, порядок хранения и подготовка для контроля
Рекомендуемые для контроля свежевыделенные штаммы с момента выделения и
получения их в виде чистых культур не должны проходить более 3 - 5-ти
последовательных пересевов на питательных средах с последующим
(обязательным) лиофильным высушиванием в большом количестве ампул и
представлением в ГИСК для хранения в качестве производственных штаммов.
Используемые
для
контроля
музейные
тест-штаммы
получают
в лиофилизированном состоянии из ГИСК им. Тарасевича.
Лиофилизированные музейные и свежевыделенные культуры хранят при Т 4 - 6
°C. Диагностикумы - это взвеси убитых микробов, чаще всего в физиологическом
растворе,
применяемые
в качестве
антигенов
для
серологических
реакций. Диагностикумы, используемые для распознавания инфекционных
заболеваний, делятся на бактерийные, риккетсиозные и вирусные. С их помощью
в сыворотке больных можно определить наличие антител по отношению
к определенному виду микроба-возбудителя.
Бактерийные антигены применяются в реакциях преципитации, пассивной
гемагглютинации с диагностическими целями и для изучения антигенного
аппарата микробов и их типизации.
Вирусные диагностикумы представляют собой антигены, используемые для
серологических реакций. В зависимости от цели применения их подразделяют на
антигены для реакции связывания комплемента и антигены для реакции
торможения гемагглютинации.
6. Организация и проведение внешнего контроля качества работы
микробиологической лаборатории. Меры по совершенствованию системы
качества.
Внутренний контроль качества (ВКК) представляет собой процесс, направленный
на гарантию в разумных пределах достижения целей в следующих ситуациях:
эффективности и результативности операционных действий;
уверенности в отчетах любого типа (в том числе финансовых);
соответствие действующим правилам и законам.
При рассмотрении принципов внутреннего качества необходимо учитывать
следующее:
Работники любого уровня организации влияют на внутренний контроль.
Внутренний контроль является, в некоторой степени, ответственностью каждого
работника за совершаемую им работу.
Эффективный внутренний контроль помогает организации выполнению
типичных видов действий для обеспечения соответствия поставленным целям и
задачам.
Внутренний контроль может обеспечить только гарантии в разумных пределах, но
не дает абсолютную гарантию достижения поставленных целей.
Задачи внедрения и понимания внутреннего контроля включают:
Установление путем менеджмента процедуры внутреннего контроля, ведения
надлежащей документации, поддержания и осуществления их в каждом
департаменте.
Гарантию того, что каждый сотрудник несет ответственность за выполняемую им
часть работы.
Гарантию исправной работы инструментов, необходимых для создания,
соответствующего документирования, внедрения и поддержания внутреннего
контроля.
Внутренний контроль состоит из нескольких сопряженных компонентов:
Контроля условий деятельности.
Оценки рисков, связанных с поставленными целями и задачами.
Контроля деятельности, организации и процедур.
Информационной системы, связанной с передачей и способом сообщения данных.
Деятельности по мониторингу результатов.
7. методы микробиологической диагностики
Микробиология
оперирует
4-мя
базовыми
методами
диагностики:
микроскопическим, культуральным, биологическим и иммунологическим.
а) микроскопическая диагностика базируется на микроскопии мазка, который
приготавливается из патологического материала (крови, мочи, раневого
отделяемого и др.) с целью обнаружения в нём тех или иных микроорганизмов.
б) культуральный метод предполагает выделение из материала чистой культуры
микроорганизма и ее дальнейшую идентификацию.
в) биологическая или экспериментальная диагностика основывается на введении
патологического биоматериала в организм лабораторного животного. В случае,
когда в материале присутствует патогенный микроорганизм, лабораторное
животное заболевает. При необходимости аспекты биологической диагностики
сочетаются с другими методами.
г) совокупностью способов изучения объекта исследования отличается
иммунологический метод, основывающийся на анализе серологических реакций.
для постановки диагноза используют от 1 до 5 методов диагностики так, чтобы
выбранный набор методов гарантировал правильный ответ. Особое значение
приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют поставить
микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от
нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого
материала в лабораторию. К этим методам относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР,
газовая хроматография и др. В вирусологии методы лабораторной диагностики
вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии
вирусов. Используют 3 метода лабораторной диагностики: вирусоскопический,
вирусологический и серологический. Виру-соскопический метод заключается в
обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего
используют электронный микроскоп, реже люминесцентный.
8.
Бактериоскопию
нативного
материала
проводят
при
подозрении
на
кандидоз
методом
«раздавленной
капли».
Исследуемый
материал
помещают
на
предметное
стекло
в
каплю
физиологического
раствора
и
покровным
стеклом
осторожно накрывают так, чтобы жидкость была без пузырьков
воздуха.
Правильно
сделанная
капля
заполняет
все
пространство
между покровным и предметным стеклом, но при этом жидкость
не выступает за края покровного стекла. Грама метод окраски —
дифференциальная сложная окраска микроорганизмов, при которой все бактерии
разделяются на две группы: окрашивающиеся по Граму — грамположительные и
не
окрашивающиеся
—
грамотрицательные.
Грамположительные
микроорганизмы образуют прочные соединения с фиолетовой краской
(генцианвиолет,
метилвиолет,
кристаллвиолет)
и
с
йодом.
Техника окраски. На фиксированный препарат накладывают фильтровальную
бумагу и обливают ее карболовым раствором генцианвиолета. Через 1—2 мин.
краску сливают и наливают раствор Люголя (на 1 мин.). Слив раствор Люголя,
помещают препарат в 96° спирт на 20—30 сек., после чего спирт смывают водой.
Препарат докрашивают разведенным фуксином в течение 30—60 сек. Затем
препарат
промывают
водой,
высушивают
и
микроскопируют.
Грамположительные микроорганизмы имеют темно-фиолетовый цвет, а
грамотрицательные — красный.