ВУЗ: Не указан
Категория: Не указан
Дисциплина: Не указана
Добавлен: 03.11.2019
Просмотров: 3821
Скачиваний: 1
как описано в табл. 9.4.
достигается
путем
полученного гибридизационного сигнала с
интенсивностью контрольных сигналов гибридизации
(разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на
фильтр.
ДНК-зонды, можно оценить концентрацию
индивидуальых компонентов в
определить,
содержит
ли
вирус
интересующие
нас
последоват
Многие из описанных здесь
диагностических целей тем не менее они вполне применимы и для
одного и того же вируса,
, как
правило, неодинаковы. Обычно максимальный титр получают при
внутримозговом
иногда невозможно использовать без дополнительной многостадийной
очистки.
Рабдовирусы, обладающие цитопатогенным
действием на
, дают бляшки, число которых пропорционально
бляшек, образующихся в результате дегенерации
зараженных клеток, лежит в основе наиболее
бляшек
(х),
сформировавшихся
при
нанесении
на
вируса (у) в объеме V, можно использовать
для
(п)
в
БОЕ/мл
по
уравнению
бляшек
Титрование
вируса
методом
бляшек
Использовагтие фрагментов эмбрионов, т. е. кусочков скорлупы 11-дневных
оплодотворенных яиц с присоединенной к ним хорионаллантоисной оболочкой,
вместо
целых
эмбрионов
лежит
в
основе
весьма
препаратов, содержащих
, предложенный для
введения в практику культур клеток [14], и теперь весьма полезен для титрования
щтаммов вирусов, не размножающихся в культуре клеток или при отсутствии
подходящей
культуры.
При
использовании
особенно
важен
. Как правило, инфицирование монослоя
клеток ВПК приводит к образованию мелких бляшек. Кроме того, частота их
возникновения, как свидетельствует наш опыт, также небольшая. При титровании
вируса
на
Авторы рекомендовали при
полиомиелита методом
бляшек в однослойных культурах, выращенных в чаш ках
мм, использовать только те чашки, в которых
Однако и при
около 10% бляшек не могут быть учтены в
результате
слияния.
Нередко при работе с малоизученными штаммами или при
пробирок
с
экспериментатору
не
удается
до дозы, дающей 100 /о эффект, В данном случае, как
уже упоминалось, оригинальный метод Кербера не может
Однако ряд авторов на основании весьма сложного
пришел к выводу, что в этих условиях может быть применена
Кербера.
ошибки. Однако это осуществимо только для тех опытов, в которых
испытываются дозы с равными интервалами между ними. Обычно при
в
соблюдается.
гемадсорбции у вирусов, активно размножающихся
, но не вызывающих при этом или вызывающих незначительную
дегенерацию, позволило разработать простые методы титрования вирусов и
антител.
описали Роу и сотр. (Rowe et al., 1970). Для
-помощника
в
комплексе
Эбелсона
мож-
Некоторые
бешенства тоже образуют четкие бляшки на
монослое клеток хомячка ER в
для размножения и
[17]. Метод бляшек с использованием клеток ER особенно чувствителен
при
этим
, выращиваемые в
шестилуночных планшетах (диаметр лунки составляет 35 мм).
— это содержащие однонитевую РНК оболочечные вирусы,
вызывающие серьезные эпидемические
, в частности лошадей, свиней, тюленей и домашней птицы. Известны
три типа данных вирусов, выделенные на
сидами в
реакции связывания комплемента
биохимическим и
резким изменениямантигенных свойств
), являются
поэтому они исследованы наиболее
подробно. Большинство
, очистки и
разработаны именно для вирусов этого типа.
способны к
, по всем остальным биохимическим
и
правило, можно выращивать и титровать, пользуясь теми же методами. С другой
стороны,
С по своим
А и В соответственно они имеют и другие ростовые свойства.
Поскольку вирусы этого
настоящей
внимание уделено методам, разработанным
для
А и В, в особенности тем, с которыми авторы знакомы по
собственному опыту. Тем не менее большинство этих
, и
, как правило, не рассматриваются.
При необходимости упоминаются
и даются ссылки на соответствующую литературу однако
в недавно опубликованных подробных
обзорах
[1—3].
Множество
попыток
было
предпринято
для
разработки
титрования медленно растущих вирусов. В боль- шинстве лабораторий
методе определения конечной точки
проблемы заключается в сохранении клеточного монослоя в течение времени,
необходимого для формирования бляшек. В нашей лаборатории используют
следующую
бляшек, рекомендованную Вентвесом и
Френчем
[28]
Впервые однослойные культуры почечных клеток обезьян для
полиомиелита были предложены Янгнером (1954). Вскоре было
показано, что использование однослойных культур позволяет обнаружить
цитопатогенные свойства у вирусов E HO и Коксаки, группы осповакцины, у
герпетических вирусов, у многих трансмиссивных вирусов, аденовирусов, кори и
др.
Гош и Янгнер (Gaush, Jonngner, 1959) предложили применять
активности
гриппозных
сывороток,
почек обезьян. Они показали, что титр,
вычисленный по результатам
, обычно на 0,56 единицы логарифма
ниже по сравнению с
во вращающихся
пробирках.
пробы позволил обнаружить четкие
показана пригодность этого метода для серодиагностики гриппа по нарастанию
титра вируснейтрализующих антител в парных сыворотках больных.
Отмечена
корре-
задержки гемадсорбции. Первым очень важным моментом
является удаление неспецифических ингибиторов гемагглютинации с помощью
каолина. Затем сыворотку разводят 1 10 в
разведения приготавливают последующие.
разведения сыворотки смешивают с 100 тканевыми гемадсорбирующими
. На 5-й день
гемадсорбции. При
исследуемой сывороткой гемагглютинины не образовывались и
отрицательной.
Для выращивания однослойных культур
. При закрывании флаконов
, содержащего Oj. Как показали авторы
в специальных опытах, культивирование клеток в герметически закрытых
вируса полиомиелита методом
бляшек в сравнении с результатами, полученными при использовании клеток,
выращенных в атмосфере СОг. В случае отсутствия небольших стеклянных
флаконов, удобных для культивирования клеток, можно использовать чашки
Петри, как это предлагают С. Г. Дзагуров и К- Т.
они применяли чашки, края которых были склеены лейкопластырем, что
создавало достаточную герметичность. По сообщению Гендерсона и Тейлора
(1959), удобными для получения бляшек оказались также культуры, выращенные
в пробирках. Правда, использование таких культур не может найти применение
при
крупные колонии, так как
в
пробирке
весьма
по
площади.
Эти наблюдения побудили
лимфоцитарного хориоме-нингита по методу бляшек. В
10 см вносят 10 мл клеточной взвеси, содержащей 1,2—
1,5X10 клеток и 1 мл. После формирования монослоя в каждую чашку вносили 0,5
мл соответствующего разведения вируса.
составлял Vi часа.
Затем в чашки наливали по 4 мл покрытия, состоящего из 15%
триптозофосфатного бульона, 1% агара и 84% среды 199- На 2-, 6- и 10-й день в
чашки вносили дополнительно по 3 мл покрытия, причем в последний
раз
содержала
Были
проведены
опыты,
чтобы
выяснить
вирусов методом бляшек. Во всех опытах при использова НИИ препаратов фирмы
Дифко и образцов, изготовляемых нашими заводами, получались одинаковые
результаты.
бляшек вируса лолиомиелита типа I (штамм 54—1342)
в
культуре
почечного
эпителия
обезьян
бляшек вируса полиомиелита типа I (штамм Брундеи) в
разных
культурах
ткани
ТТрежде чем изложить
остановимся на тех условиях, соблюдение которых обязательно при
. Принцип кумуляции предполагает,, Дчто, ЛНтервалы между всеми
исследуемыми
дозами
представляют
одинаковую
величину
(обычно
при
вирусологических исследованиях
важно, чтобы каждым
исследуемым разведением вируса заражалось равное число жи-" вотных, к
сожалению, это требование не всегда выполняется. Беренс (1929)
не менее 6 особей для испытания одной дозы, однако, в
последующем стали ограничиваться 4 животными. Попытки некоторых авторов
ограничиться
по
и
Менча
Сообщение Д Эрреля вызвало сенсацию среди
поскольку он высказал идеи о роли фагов в
об их использовании в борьбе с
. Несмотря на такие
весьма ошибочные заявления, Д Эррель довольно близко подошел к
о фагах. С самого начала своих исследований Д Эррель считал,
что фаги — это особые невидимые фильтрующиеся, самовоспроизводящиеся
вирусы, облигатно паразитирующие на бактериях. В течение
-трех лет со
точного подсчета, или титрования,
фагов, а к 1923 г. он описал их
жизненный циклследующим образом
прикрепляются к
и затем проникают в клетки, где
они размножаются, образуя потомство многих
, или лизиса, клетки эти
готовыми
к
новому
заражению.
Пуэ [20] и Перлманн с сотр. [19] показали, что
ГТХ человека нейраминидазой их
электрофоретическая подвижность
приблизительно от —8,4-10" до —6,7-10 см сек в при pH 7. Это может
происходить в результате уменьшения отрицательного или (по
) увеличения
ГТХ. При pH 7
не заряжена и не может обусловливать такое изменение в
[45] нашли, что
ГТХ, определенное по
, увеличивается после
пропорционально количеству отщепленной NANA. Благодаря
этому факту становится понятным
, о котором было сказано ранее. В противоположность необычному
поведению тирозина в ГТХ человека
аргинина
наблюдается в каждом из четырех исследованных гликопротеинов, оказывающих
тормозящее действие на
. В
гликопротеипе, не оказывающем тормозящего действия (например, в
94 классификация ротавирусов
Ротавирусная инфекция
Ротавирусная инфекция (кишечный грипп)
– заболевание инфекционной
природы, которое вызывает ротавирусы. Для данного заболевания характерно
острое начало, клиническая картина схожа с энтеритами и гастроэнтеритами,
а также в начальном периоде заболевания наблюдается сочетание
респираторного и кишечного синдрома.
Виды ротавирусной инфекции
Существует 9 видов ротавирусов в природе. Из них 5 паразитируют в организме
человека. Различают такие виды ротаровирусной инфекции: А, В, С, Д, Е. Чаще
всего именно ротавирус А вызывает признаки энтероколита. Одновременно
может происходить инфицирование другими ротавирусами (например, С и В).
Симптомы
Симптомы ротавирусной инфекции зависят от степени тяжести заболевания.
Симптомы легкой стадии заболевания:
частота испражнений не превышает 5 раз в день;
испражнения кашицеобразные;
однократная или может вообще отсутствовать;
температура нормальная (чаще всего);
интоксикация либо отсутствует, либо слабо выраженная.
Симптомы среднетяжелой стадии заболевания:
частота испражнений до десяти раз в сутки;
характерна тошнота и рвота;
рвота до 4 раз в день;
рвота заканчивается в течение суток;
возможно кратковременное увеличение температуры тела;
умеренные симптомы интоксикации организма;
эксикоз (возможен).
Симптомы тяжелой стадии заболевания:
частота испражнений превышает десять раз в стуки;
характерно увеличение температуры тела;
частая рвота;
тяжелая интоксикация организма.
Симптомы ротавирусной инфекции, характерные в той или иной степени всем
стадиям заболевания:
стул водянистый, пенистого вида;
чаще всего стул имеет желтый цвет;
дефекация сопровождается резким запахом;
боли в животе;
урчание и дискомфорт в кишечнике;
катар верхних дыхательных путей (в 20 % случаях);
гиперемия и зернистость слизистой мягкого неба, глотки и ее
задней стенки и небных радужек;