Файл: Вирусы папилломы человека и их роль в образовании опухолей.doc

В-третьих, каждый иммобилизированный энзим щелочной фосфатазы реагирует с множеством молекул хемилюминесцента диоксетана за 1 минуту и вызывает постоянный поток фотонов, которые подсчитываются фотомультиплейерной трубкой люминометра.

В-четвертых, система генной ловушки имеет преимущества перед естественной амплификацией, т.к. вовлекает большой объем (10-20%) клинического материала в реакцию. Интенсивность испускаемого света пропорциональна количеству ДНК мишени и выражается как отношение сигнала к положительному контролю. На рис. 5 приводим схему опыта по выявлению ДНК ВПЧ по Lorincz А. и Davies P.

Рис. 5. Детекция ВПЧ с помощью HCS II (по Lorincz А. и Davies P.О)

В "гибридной системе ловушки" — HCS II используются РНК-пробы, комплементарные к полной геномной последовательности 13 канцерогенных типов ВПЧ и 5 типов ВПЧ низкого риска. Составляются смеси - "коктейли" высокого и низкого риска соответственно. Каждый "коктейль" раздельно инкубируется с денатурированной (одноцепочечной) ДНК из клинического образца. Образующийся РНК-ДНК гибрид переносится в лунки микропанели, на которых иммобилизованы моноклональные антитела к РНК-ДНК гибри ду. Антитела специфически распознают гибрид, который прикрепляется к лунке панели. Уловленные таким образом РНК-ДНК гибриды затем вступают в реакцию с моноклональными антителами к гибриду, меченными щелочной фосфатазой. Избыток антител и негибридизированных молекул удаляют промыванием. В лунки добавляют люминесцирующий субстрат диоксетан. Если субстрат присоединяется к меченному щелочной фосфатазой конъюгату, то происходит испускание света. Эмиссию света можно измерить с помощью люминометра. Количество света генерируется в пропорции к числу мишеней ДНК в образце. HCS II может определить и различить канцерогенные типы ВПЧ (16,18,31,33,39,45,51,52,56,58,59 и 68) и типы низкого риска (6,11,42,43 и 44). Аналитическая чувствительность системы – 0,2 пикаграмма/мл (1000 копий генома ВПЧ). Учитывая клиническую необходимость обследования женщин с низкой степенью клеточной атипии, прибор установлен на определение 5000 копий ДНК/мл, т.е. на определение 1.0 пикаграмма/мл.

В комплексе с цитологическим исследованием, определение ВПЧ с использованием HCS II достигает 95% обнаружения ЦИН-1 и ЦИН-2, т.е. может служить эффективным дополнением к цервикальной цитологии и может помочь снизить заболеваемость и смертность от цервикального рака.

ЛЕЧЕНИЕ

Поскольку полного излечения от ВПЧ-инфекции в настоящее время достичь невозможно, целью терапии является удаление экзофитных кондилом, а не элиминация возбудителя. Эффективность лечения экзофитных кондилом составляет 50-94%, уровень рецидивирования исчисляется 25% в течение трех месяцев после лечения. Рецидивы по большей части связаны с реактивацией, а не реинфекцией.

При отсутствии лечения генитальные кондиломы могут разрушаться сами собой, оставаться без изменения или прогрессировать. Возможно персистирование инфекции без каких-либо клинических проявлений При выборе терапии следует избегать дорогих, токсичных схем лечения.

Основные методы лечения

1. Применение цитотоксических препаратов — подофиллина, подофилотоксина, 5-фторурацила.

2. Деструктивные методы — физические (криодеструкция, лазеротерапия, диатермокоагуляция, электрохирургическое иссечение), химические (трихлоруксусная кислота, ферезол, солкодерм).

3. Иммунологические методы: -, - и - интерфероны.

4. Комбинированные методы - сочетание различных методов лечения (криотерапия, лазерное иссечение, электрокоагуляция, диатермокоагуляция, озонотерапия).

Если кондиломы реагируют на лечение, в последующем наблюдении нет необходимости. Для женщин с генитальными кондиломами рекомендуется ежегодный гистологический скрининг.

Лечение половых партнеров

При лечении генитальных кондилом рекомендуется осмотр половых партнеров. Партнеров с экзофитными аногенитальными кондиломами следует предупредить, что они являются контагиозными по отношению к неинфицированным партнерам. Однако подавляющее большинство партнеров уже инфицировано вирусом в субклинической форме, даже если у них нет видимых кондилом.

Лечение беременных и детей

Во время беременности видимые кондиломы часто рецидивируют, имеют тенденцию к разрастанию и становятся рыхлыми.

Лечение беременных желательно проводить на ранних сроках беременности, соблюдая особую осторожность. Рекомендуется применять только физические деструктивные методы (криотерапию, СО₂-лазер). Цитологические препараты — подофиллин, подофиллотоксин и 5-фторурацил противопоказаны для лечения беременных.

Аналогичные подходы должны соблюдаться и при выборе метода лечения детей.

ВПЧ 6 и 11 могут вызывать ларингеальный папилломатоз у детей. Путь передачи инфекции (трансплацентарный, при прохождении плода по родовому каналу или постнатальный) в каждом конкретном случае трудно или невозможно установить. Описаны случаи ларингеального папилломатоза у детей, рожденных с помощью кесарева сечения, поэтому кесарево сечение не должно выполняться с единственной целью - предупредить заражение ВПЧ новорожденного.

Сопутствующие состояния и их лечение

У больных с папилломавирусной инфекцией часто наблюдается нарушение микробиоценоза влагалища - резкий дефицит лактобацилл, избыток условно патогенной микрофлоры. Отмечается значительная обсемененность дрожжеподобными грибами. В большом проценте случаев имеет место инфицированность микроорганизмами, передающимися половым путем — хламидиями, генитальными микоплазмами, вирусом простого герпеса 2-го типа. Необходимо назначение этиотропной терапии, а также коррекция микробиоценоза влагалища назначением биопрепаратов — эубиотиков — лактобактерина и бифидобактерина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сейчас фактически установлено, что папилломавирусная инфекция является главной причиной цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки. Вдумчивое обследование женщин на ВПЧ предотвращает лечение легких и пограничных поражений путем выяснения, какие именно следует считать действительно предраковыми.

Цервикальная интраэпителиальная неоплазия представляет собой обычную и раннюю манифестацию цервикальной инфекции, вызванной ВПЧ, наиболее часто типами 16 и 18 ВПЧ. Помимо ВПЧ в патогенезе плоскоклеточного рака и аденокарциномы имеют значение и другие факторы риска, в частности стероидные половые гормоны. Поэтому к факторам риска относят число родов более 3, длительное применение оральных контрацептивов (более 10 лет), а также курение, хотя механизм действия курения остается неясным.

Необходимо сказать, что аденокарцинома in situ кольпоскопически не выявляется, между тем она предшествует инвазивной аденокарциноме. Доминирующим типов ВПЧ при этой патологии является 18 тип. При отсутствии клинической симптоматики определение ВПЧ, в особенности 18 типа, весьма полезно для диагностики аденокарциномы in situ и инвазивной аденокарциномы.

Разработанные современные методы определения ДНК папилломавирусов с разграничением типов высокого и низкого онкогенного риска могут использоваться в любой клинической лаборатории, т.к. вся аппаратура Digene Hybrid Capture System II умещается на одном столе, а сам опыт не требует тех предосторожностей, которые необходимы при использовании ПЦР-диагностики, тем более, что для ПЦР-диагностики ВПЧ во всем мире нет стандартных реактивов.