Файл: Лекция 5 Возбудители коклюша, дифтерии и туберкулеза. Методы их микробиологической диагностики. Таксономия.pptx

Лекция №5 Возбудители коклюша, дифтерии и туберкулеза. Методы их микробиологической диагностики.

Таксономия

Семейство – Corynebacteriaceae

• Род – Corynebacterium (coryne – булава, bacterium – палочка)

• Вид – C. diphtheriae (пленка, перепонка), дифтероиды:

C. pseudodiphthericum (палочка Хофманна),

С. xerosis ,

C. ulcerans.

Морфологические и тинкториальные свойства

Культуральные свойства

Факультативный анаэроб.

Температурный оптимум для роста 35-37°С (границы роста 15-40 °С), оптимальная рН 7,6-7,8.

Растет на специальных питательных средах с кровью и сывороткой (кровяной теллуритовый агар), на которой дифтерийная палочка по способности продуцировать гемолизин даёт колонии 3 типов:

а) биовар gravis;. б) биовара mitis; в) биовар intermedius.

Биовар gravis

•Ферментирует глюкозу, мальтозу, крахмал, гликоген и декстрин;

• Восстанавливает нитраты;

•На средах с теллуритом – крупные сухие матовые плоские серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);

• На жидкой среде – пленка, помутнение и крупнозернистый осадок;

• На кровяных средах – гемолиза ±;

•Обладает выраженными токсигенными свойствами;

•Выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.

Биовар mitis

•Ферментирует глюкозу, мальтозу, не сбраживает сахарозу, крахмал, гликоген и декстрин;

• Восстанавливает нитраты;

•На средах с теллуритом – мелкие гладкие блестящие полупрозрачные черные колонии с ровным краем;

•На жидкой среде – равномерное помутнение и порошкообразный осадок;

• На кровяных средах – зоны гемолиза;

• Малотоксичен;

•Вызывает легкую спорадическую заболеваемость.

Биовар intermedius

• По биохимическим и культуральным свойствам сходен с биоваром gravis;

• на средах с теллуритом – мелкие сухие матовые серо-черные колонии с неровным краем;

• на жидкой среде – помутнение с последующим образованием мелко-зернистого осадка;

• гемолиз на кровяных средах отсутствует.

Факторы патогенности

• Пили и микрокапсула обеспечивают адгезию к эпителиоцитам миндалин, реже гортани, трахеи, полости носа, конъюнктивы глаза, вульвы;
• колонизация эпителиоцитов сопровождается развитием воспалительного процесса;
• гиалуронидаза, фибринолизин, нейраминидаза, гемолизин – факторы инвазии;
• микрокапсула – антифагоцитарный фактор;
• корд-фактор – нарушает дыхание в митохондриях и обладает антфагоцитарной активностью;
• дифтерийный гистотоксин – экзотоксин, главный фактор патогенности, обладает дермонекротическими и гемолитическими свойствами (синтезируют только C. diphtheriae, лизогенные tox -профагом).

Методы обнаружения токсигенности дифтерийной палочки

• Метод преципитации в геле. Полоску стерильной фильтровальной бумаги смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой и наносят на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 15-20 минут. Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от полоски фильтровальной бумаги. Чашки с посевами инкубируют при 37°С, результаты учитывают через 24-48 часов. Результатом взаимодействия токсина и антитоксина (антитоксических антител) является образование в геле четкой линии преципитации.
• Биологические пробы на животных. Внутрикожное заражение морских свинок фильтратом бульонной культуры дифтерийных бактерий вызывает у них некроз в месте введения. Наиболее характерным проявлением действия токсина является поражение надпочечников.
• Заражение куриных эмбрионов - дифтерийный токсин вызывает их гибель.
• Заражение культур клеток - дифтерийный токсин вызывает отчетливый цитопатический эффект.
• Метод твердофазного иммуноферментного анализа с использованием меченных пероксидазой антитоксинов.
• Использование ДНК-зонда для непосредственного обнаружения tox-оперона в хромосоме дифтерийных бактерий.

Дифтерия

• это острое инфекционное заболевание преимущественно детского возраста, которое проявляется глубокой интоксикацией организма дифтерийным токсином и характерным фибринозным воспалением в месте локализации возбудителя. Название болезни происходит от греческого слова diphtheria — кожа, пленка, так как в месте размножения возбудителя образуется плотная, серовато-белого цвета пленка.

Эпидемиология

• Источник инфекции – больной человек или бактерионоситель.
• Механизмы и пути передачи инфекции:

1. Аэрогенный (пути – воздушно-капельный и воздушно-пылевой);

2. Контактный (путь – непрямой контактный);

3. Фекально-оральный (путь – алиментарный).

• Входные ворота: слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюктивы, наружных половых органов, раневая поверхность. Инкубационный период – 2 -10 дней.

Патогенез

• Бактериоскопический метод.

2. Бактериологический метод (основной).

Определение токсигенности C. diphtheriae:

- биологическая проба на животных – внутрикожное введение морским свинкам культуры дифтерийной палочки – некроз в месте введения, последующая гибель животного;

- заражение куриных эмбрионов (гибель);

• внесение в культуру клеток (ЦПД);
• ИФА;

- ДНК-зонды для обнаружения tox -оперона в геноме;

- РП в агаре.

3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, проба Шика.

4. Экспресс-диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.

5. Молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox -гена).

• АД – адсорбированный дифтерийный анатоксин
• АДС – адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин
• АДС-М анатоксин -вакцина для профилактики дифтерии и столбняка с уменьшенным содержанием антигенов
• АД-М анатоксин вакцина для профилактики дифтерии с
• уменьшенным содержанием антигенов
• Имовакс Д.Т. Адюльт вакцина для профилактики дифтерии и столбняка, аналог АДС-М (Aventis Pasteur, Франция)
• ДТ Вакс вакцина для профилактики дифтерии и столбняка, аналог АДС

Таксономия

Морфология

Культуральные и биохимические свойства

Антигенная структура бордетелл

Факторы патогенности

Факторы патогенности

Эпидемиология

• В естественных условиях к коклюшу восприимчив только человек.
• Источник инфекции при коклюше и паракоклюше –больной человек типичной или стертой формой, особенно в период до появления спазматического кашля или бактерионоситель.
• Путь передачи возбудителя - воздушно-капельный. Бордетеллы обладают специфическим тропизмом к реснитчатому эпителию респираторного тракта хозяина. К инфекции восприимчивы люди всех возрастов, но более всего дети от 1 года до 10 лет.
• Наиболее тяжело коклюш протекает у детей первого года жизни.

Патогенез

• Входные ворота - слизистые оболочки гортани, трахеи, бронхов. Бордетеллы не проникают внутрь клетки (неинвазивные микробы) и не поступают в кровь.
• Первая стадия – адгезия возбудителя на поверхности клеток.
• Вторая стадия – местное повреждение тканей токсинами микроба. Возбудитель размножается на поверхности клеток эпителия, обусловливая развитие воспалительных катаральных явлений и возникновение очагов некроза. В более низкие отделы (мелкие бронхи, бронхиолы, альвеолы) возбудитель распространяется бронхогенным путем. Бактериемии при коклюше не бывает.
• Третья стадия – стадия системных проявлений. Следствием некротических поражений является постоянное раздражение рецепторов афферентных волокон блуждающего нерва; возбуждение передается в область кашлевого центра, где формируется стационарный очаг возбуждения. В результате развивается основной симптомокомплекс коклюша – приступы судорожного кашля.