Файл: Лекция 5 Возбудители коклюша, дифтерии и туберкулеза. Методы их микробиологической диагностики. Таксономия.pptx

Клинические проявления коклюша

• Катаральная стадия (1 – 2 недели):
• гриппоподобное состояние
• слабый, но упорный кашель
• Пароксизмальная стадия (2 – 4 недели):
• спастический кашель
• частая рвота
• угнетение сознания
• Стадия выздоровления (4 – 6 недель):
• постепенное исчезновение симптомов коклюша

В настоящее время преобладают (95%) умеренно выраженные и стертые формы заболевания

Лабораторная диагностика

• Основной метод - бактериологический. Для выделения чистой культуры в качестве материала используют слизь с задней стенки глотки, которую высевают на КУА или среду Борде-Жангу. Материал берут с помощью клювовидного (через рот) или прямого (через нос) тампона с задней стенки глотки. Посев также может быть сделан методом “кашлевых пластинок” (во время кашля ко рту больного на расстоянии 8-10 см подносят открытую чашку с питательной средой). Выросшую культуру идентифицируют по культуральным, биохимическим и антигенным свойствам.
• В качестве ускоренного применяют иммунофлуоресцентный метод – РИФ с материалом из зева больного и флюоресцентной сывороткой (позволяет получить ответ через 4-5 часов после взятия материала).
• Серологические методы (реакция агглютинации, непрямой гемагглютинации, связывания комплемента) используют как вспомогательные при выявлении атипичных форм, а также для ретроспективной диагностики, поскольку антитела к возбудителю появляются не ранее третьей недели заболевания.

Специфическая профилактика и лечение

• Для специфической профилактики коклюша используют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС), где коклюшный компонент представлен убитыми коклюшными бактериями.
• Для лечения применяют антибиотики (гентамицин, ампициллин, эритромицин, тетрациклин), которые эффективны в катаральном периоде и не эффективны в судорожном периоде заболевания.

МИКОБАКТЕРИИ. ВОЗБУДИТЕЛИ ТУБЕРКУЛЕЗА

Из истории:

Таксономия микобактерий

• Отдел Firmicutes
• Порядок: Actinomycetales
• Семейство Mycobacteriaceae
• Род Mycobacterium
• Виды: M. tuberculosis (tuberculum – бугорок)
• М. bovis
• M. leprae
• M. kansassii
• M. xenopi
• M. ulcerans

Морфология и тинкториальные свойства

• Палочки, слегка изогнутые, размером 0,3-0,6 * 1,0-4,0 мкм. Грамположительные. Окрашиваются по методу Циля-Нильсена в красный цвет. Характерен выраженный полиморфизм. В основном они имеют форму длинных тонких (М. tuberculosis, М. africanum) или коротких и толстых (М. bovis) палочек с зернистой цитоплазмой, содержащей от 2 до 12 зерен различной величины (зерна метафосфатов – зерна Муха). Иногда они образуют нитевидные структуры, напоминающие мицелий грибов, что и послужило основанием для их названия (mykes - гриб и bacterium - бактерия). Неподвижные. Спор не образуют. Имеют микрокапсулу.

Культуральные свойства

• Облигатные аэробы. Оптимальная температура роста 37-38ºС. Оптимальное значение рН=6,8-7,2.
• Размножение их происходит очень медленно, время генерации – 14–16 ч. Это связано с выраженной гидрофобностью, которая обусловлена высоким содержанием липидов. Это затрудняет поставку питательных веществ в клетку, что снижает метаболическую активность клетки. Видимый рост на средах – 21–28 дней.
• Микобактерии требовательны к питательным средам. Факторы роста – глицерин, аминокислоты. Растут на картофельно-глицериновых, яично-глицериновых и синтетических средах. Во все эти среды добавляют вещества, которые ингибируют рост контаминирующей флоры - красители (малахитовый зеленый) и антибиотики, не действующие на микобактерии.
• На плотных питательных средах образуются характерные колонии: морщинистые, сухие, с неровными краями, не сливаются друг с другом (напоминают цветную капусту).
• В жидких средах растут в виде пленки. Пленка сначала нежная, сухая, со временем утолщается, становится бугристо-морщинистой с желтоватым оттенком. Среда при этом непрозрачная.

Электронограмма ультратонкого среза клетки M. tuberculosis, делящейся путём формирования перегородки деления c последующим расхождением клеток.

Формы сохранения жизнеспособности в макроорганизме

• Микобактерии туберкулеза, поглощённые макрофагами в процессе фагоцитоза, сохраняют свою жизнеспособность длительное время и могут вызывать заболевание после нескольких лет бессимптомного существования.
• Микобактерии туберкулеза могут образовывать L-формы, имеющие сниженный уровень метаболизма и ослабленную вирулентность. L-формы могут длительное время персистировать (сохраняться) в организме и индуцировать (вызывать) противотуберкулёзный (нестерильный) иммунитет.
• Микобактерии туберкулеза могут существовать в виде очень мелких фильтрующихся форм, которые выделяются у больных, длительно принимавших противотуберкулёзные препараты.

Биохимическая активность

• M. tuberculosis обладает каталазной активностью, уреазой, никотинаминидазой, восстанавливает нитраты, накапливает в среде ниацин (ниациновый тест Конно – среда желтеет).

• M. bovis тоже обладает уреазой,

но не восстанавливает нитраты,

не продуцирует

никотинаминидазу и не

накапливает в среде ниацин.

Факторы патогенности

Токсины. Токсическими свойствами обладают химические компоненты клетки: туберкулопротеин, липидные фракции, корд-фактор (высокотоксичен).

Ферменты: лецитиназа, каталаза, пероксидаза.

Структурные и химические компоненты клетки:

• Миколовая кислота – склеивает микобактерии, образует клетки Пирогова-Лангханса;
• Корд-фактор – токсическое действие на ткани, блокирует окислительное фосфорилирование на митохондриях, защищает от фагоцитоза, подавляет миграциюлейкоцитов;
• Липиды (фосфатидный фактор, фтионовая кислота, мураминдипептид, воск Д) и полисахариды - образование эпителиоидных клеток, специфические гранулематозные изменения в тканях;
• Туберкулопротеин – развитие ГЗТ.

Метод микрокультур Прайса

• Для экспресс-диагностики используют метод микрокультивирования на стеклах в жидкой среде (метод микрокультур Прайса), при котором через 48-72 часа отмечается рост микобактерий в виде переплетенных девичьих “кос” или “жгутов” благодаря корд-фактору (англ. cord - жгут, веревка).

Эпидемиология

Инфекционная аллергия при туберкулёзе

• Всегда сопутствует инфицированию туберкулезной палочкой.
• Выявляется туберкулиновыми пробами (в большинстве стран предпочтение отдается внутрикожному тесту - реакции Манту)
• В качестве аллергена используется туберкулин - фильтрат автоклавированной бульонной культуры M. tuberculosis.
• Для пробы Манту используется очищенный белковый препарат туберкулина (ППД) (PPD= Purified Protein Derivative)
• вызывает у инфицированных микобактериями людей местную воспалительную реакцию в виде инфильтрата и покраснения (реакция ГЗТ).
• Неинфицированные люди никакой реакции на введение туберкулина не дают. Эту пробу применяют для выявления инфицированных, сенсибилизированных людей

Цели постановки туберкулиновой пробы

• Определение инфицированности
• Отбор контингента для ревакцинации
• Контроль эффективности вакцинации
• Оценка течения туберкулезного процесса

• положительный результат нельзя рассматривать как признак активного процесса
• отрицательная реакция Манту не всегда указывает на отсутствие процесса, т.к. у больных с иммунодефицитами и анергией реакция обычно также отрицательна.

• В настоящее время по степени эффективности противотуберкулезные препараты делятся на 3 группы:
• Группа А – изониазид, рифампицин
• Группа В – стрептомицин, канамицин, этионамид, циклосерин, фторхинолоны и др.
• Группа С – ПАСК и тиоацетозон
• курс лечения не менее года

• Бактериоскопический метод: микроскопия мазков (окраска по Цилю—Нильсену) из патологического материала, в том числе из мокроты, обогащенной гомогенизацией или флотацией.
• Бактериологический метод: посев на среду Левенштейна—Йенсена, Финн 2 и др., микрокультивирование по Прайсу (рост микроколоний при помещении мазка в жидкую питательную среду.
• Биологическая проба: заражение морских свинок и кроликов.
• Серологический метод: РНГА, ИФА; определяют антитела против комплекса антигенов клеточной стенки, липоарабиноманнана, гликолипидов, фибронектинсвязывающего антигена.
• Кожно-аллергические пробы: внутрикожное введение туберкулина (проба Манту).
• Молекулярно-генетический метод: ПЦР; метод генной дактилоскопии возбудителя — Саузерн-блот-гибридизация с использованием инсерционного элемента (IS) в качестве зонда.