Интерактивное занятие №9. Часть 1

Надо сделать: Пройти лекцию до конца

К настоящему времени Вы заработали баллов: 0 из 0 возможных.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

В настоящее время существует 4 группы методов лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, направленных на выявление:

• 
  Вируса в биологических субстратах (кровь, пунктаты лимфатических узлов и др.) инфицированных людей с помощью вирусологических методов (ВИЧ-культура)
  
• 
  Вирусных антигенов (конкурентный ИФА, реакция им- муннофлуоресценции и др.)
  
• 
  Антител к ВИЧ: ИФА, иммуноблотинг (вестерн-блотинг), радиоиммуннопреципитация, метод агглютинации с использованием различных носителей, метод иммуннофлуоресценции и др.;
  
• 
  Генетического материала ВИЧ: молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция.
  

Наиболее широко используются методы, направленные на обнаружение антител к ВИЧ. Серологическая диагностика осуществляется в специализированных лабораториях в два этапа: на первом этапе выявляют антитела против антигенов ВИЧ с помощью твердофазного иммунноферментного анализа (ИФА). На втором этапе в качестве подтверждающего теста используют метод вестерн- блотинга/иммуноблотинга, который позволяет определить антитела к отдельным вирусным белкам.

Для того, чтобы сделать диагностическое заключение, необходимо учитывать данные эпидемиологического анамнеза, иммунологических тестов и результатов клинического обследования.

Порядок освидетельствования на антитела к ВИЧ определен Федеральным законом

В соответствии с указанными документами освидетельствование на ВИЧ-инфекцию делится на обязательное и добровольное:

Обязательное тестирование на антитела к ВИЧ

Обязательному тестированию на антитела к ВИЧ подлежат:

1.     Доноры крови и гемокомпонентов, спермы и других биологических жидкостей, тканей и органов при каждом взятии донорского материала.

2.     Врачи, средний и младший медицинский персонал центров по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями.

3.     Врачи, средний и младший медицинский персонал лабораторий по диагностике СПИДа лечебно-профилактических учреждений, которые осуществляют скрининг (обследование) населения на ВИЧ-инфекцию и исследование крови и биологических материалов, полученных от инфицированных ВИЧ.

---

4.     Врачи, средний и младший медицинский персонал, привлекаемый к непосредственному обследованию, диагностике, лечению, обслуживанию и к другой работе с инфицированными ВИЧ, имеющие с ними непосредственный контакт.

Добровольное медицинское освидетельствование

Процедура добровольного консультирования и тестирования на ВИЧ (ДКТ) должна быть стандартизована и предлагаться пациентам в следующих ситуациях:

• 
  при желании пациента получить помощь, касающуюся профилактики передачи или заражения ВИЧ;
  
• 
  при наличии медицинских показаний, выявленных при обследовании и лечении пациента;
  
• 
  для профилактики передачи ВИЧ от матери ребенку.
  

В то время как предложение пройти тестирование на антитела к ВИЧ при определенных обстоятельствах должно стать обязательным, само тестирование должно проводиться только после получения информированного согласия пациента и в условиях строгой конфиденциальности.

Процедура получения информированного согласия в различных медицинских учреждениях неизбежно будет отличаться, но ее основные компоненты неизменны:

• 
  предоставление пациенту достаточной информации о ВИЧ-инфекции;
  
• 
  осознание им положительных и отрицательных последствий определения своего ВИЧ-статуса;
  
• 
  его свободный выбор в отношении тестирования на антитела к ВИЧ.
  

В соответствии с Федеральным законом от 30 марта 1995 г. N 38-ФЗ «О предупреждении распространения в Российской Федерации заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции)», приказом министерства здравоохранения Российской Федерации от 30 октября 1995 г. № 295 «О введении в действие правил проведения обязательного медицинского освидетельствования на ВИЧ и перечня работников отдельных профессий, производств, предприятий, учреждений и организаций, которые проходят обязательное медицинское освидетельствование на ВИЧ», СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ- инфекции», постановлением Госкомстата России от 05.05.99 № 30 «Сведения о результатах исследования крови на антитела к ВИЧ» обязательному медицинскому освидетельствованию подлежат :

1.     Доноры крови, биологических жидкостей, органов и тканей.

2.     Работники отдельных профессий, производств, предприятий, учреждений и организаций (медицинские работники, военнослужащие, сотрудники лабораторий, работающие с кровью и ее компонентами)

---

3.     Иностранные граждане и лица без гражданства

4.     Лица, находящиеся в местах лишения свободы

5.     Больные по клиническим показаниям:

6.     Больные с подозрением или подтвержденным диагнозом наркомания (с парентеральным путем введения наркотиков);

7.     Больные с подозрением или подтвержденным диагнозом заболевания, передающиеся половым путем;

8.     Беременные

9.     Лица, обследованные при проведении эпидемиологического обследования

10.  Мужчины, имеющие секс с мужчинами.

Любой гражданин Российской Федерации может обследоваться на предмет наличия у него антител к ВИЧ:

• 
  добровольно;
  
• 
  бесплатно в учреждениях государственной и муниципальной систем здравоохранения;
  
• 
  анонимно по желанию;
  

с предварительным и последующим консультированием по вопросам профилактики ВИЧ-инфекции

Граждане Российской Федерации, отказавшиеся от обязательного медицинского освидетельствования, или в случае выявления у них ВИЧ- инфекции, не могут быть донорами крови, биологических жидкостей, органов и тканей.

Обязательные требования к процедуре тестирования на антитела.

Обязательные требования к процедуре консультирования и тестирования на антитела к ВИЧ:

1.     Основным методом выявления ВИЧ-инфекции является проведение тестирования на антитела к ВИЧ с обязательным до- и послетестовым консультированием. Присутствие антител к ВИЧ является доказательством наличия ВИЧ-инфекции. Отрицательный результат тестирования на антитела к ВИЧ не всегда означает, что человек не инфицирован, поскольку существует период "серонегативного окна" (время между заражением ВИЧ и появлением антител, который обычно составляет около 3-х месяцев).

2.     Тестирование и консультирование должно быть добровольным.

3.     Пациент должен дать информированное согласие на проведение тестирования. Это означает, что

• 
  ему предоставлено достаточное количество информации;
  
• 
  он осознает положительные и отрицательные последствия определения своего ВИЧ-статуса;
  
• 
  дал свое согласие в обстановке, исключающей принуждение.
  

---

4.     При проведении дотестового консультирования необходимо заполнить форму информированного согласия на проведение освидетельствования на ВИЧ-инфекцию в двух экземплярах, одна форма выдается на руки обследуемому, другая сохраняется в ЛПУ (приложение №1).

5.     При дотестовом консультировании пациенту нужно рассказать о целях и процедуре тестирования, а также о возможностях лечения ВИЧ-инфекции и доступности различных видов социальной поддержки.

6.     Результаты тестирования на ВИЧ освидетельствуемому сообщает консультант в ходе послетестового консультирования.

7.     По возможности до- и послетестовое консультирование пациента проводит один и тот же специалист.

8.     О результатах тестирования нужно сообщать конфиденциально, эта информация должна быть доступна только медицинским работникам, имеющим непосредственное отношение к оказанию помощи пациентам.

9.     Пациенты с положительным результатом тестирования должны пройти консультирование и получить направления в службы медицинской и психосоциальной помощи.

10.  Консультирование должно проводиться обученным специалистом (желательно врачом-инфекционистом, врачом-эпидемиологом и психологом).

11.  При конфиденциальном тестировании персональные данные на пациента приводятся без сокращений (по паспорту или заменяющему его документу, удостоверяющему личность обследуемого): полные Ф.И.О., полная дата рождения, гражданство, адрес места жительства, код контингента.

12.  При анонимном тестировании (без паспорта) указывается только цифровой код, включающий порядковый номер освидетельствуемого, год рождения, место жительства (субъект Российской Федерации). Фамилия, имя, отчество освидетельствуемого не указывается.

13.  Результаты исследования по телефону не сообщаются.

14.  Оказание психологического давления, принуждение, запугивание, осуждение и пренебрежительное отношение должны быть исключены из взаимодействия медицинских работников с пациентами, т.к. использование таких приемов является барьером получению медицинской помощи.

Приоритетным направлением противодействия эпидемии ВИЧ/СПИДа является активное привлечение к обследованию на ВИЧ-инфекцию групп повышенного риска заражения.

Выявление ВИЧ-инфекции среди различных категорий населения, прошедших обследование, неодинакова. Наибольшая выявляемость ВИЧ-инфекции регистрируется среди потребителей инъекционных наркотиков, лиц, находящихся в местах лишения свободы. Известно, что лица употребляющие наркотики, имеющие опыт пребывания в пенитенциарных учреждениях, являются наиболее социально неадаптированными, и наиболее труднодоступными для обследования и медицинского обеспечения, следовательно данная категория граждан и в дальнейшем будет служить резервуаром для развития эпидемии ВИЧ- инфекции.

---

Диагностика ВИЧ-инфекции в начальных стадиях болезни до развития СПИДа проводится на основании лабораторных исследований (выявление специфических антител или антигенов). Традиционным материалом для определения антител к ВИЧ продолжает оставаться сыворотка или плазма крови, хотя в настоящее время спектр биологических материалов расширен.

Диагностика ВИЧ-инфекции включает два этапа: установление инфицирования ВИЧ и определение стадии заболевания. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции осуществляется по четырем направлениям:

• 
  индикация ВИЧ и его АГ
  
• 
  обнаружение специфических АТ к АГ вируса
  
• 
  выявление провирусной ДНК и РНК ВИЧ
  
• 
  выделение вируса
  

Иммуноферментный анализ в диагностике ВИЧ-инфекции

Иммуноферментный анализ (ИФА, enzyme immunoassay) - является основным, наиболее широко применяемым методом определения общих антител к вирусам. Для определения АГ и АТ методом ИФА используется твердофазный вариант с иммобилизацией одного из компонентов реакции на твердой фазе (пластиковых планшетах). В частности, АГ ВИЧ зафиксированы на дне лунок планшетов; при наличии АТ к ВИЧ в сыворотке крови происходит образование комплекса АГ-АТ. Эффективность иммобилизации АГ на пластике в лунках во многом зависит от качества этого материала, учитывая, что при проведении анализа дважды осуществляется отмывка планшетов. Прочность связывания АГ ВИЧ с пластиком влияет на чувствительность ИФА (важно, чтобы при промывке сохранялась прочная фиксация комплекса АГ-АТ на стенках лунок).

Принцип метода заключается в том, что исследуемый образец сыворотки крови инкубируется одновременно с сорбированной на твердой фазе смесью АГ ВИЧ-1, ВИЧ I (О), ВИЧ-2 и ATк ВИЧ-1 АГ и с конъюгатом (та же смесь ВИЧ антигенов/антител, меченых пероксидазой хрена). При наличии в образце ATк ВИЧ-1 и /или к ВИЧ-2 формируется твердофазный комплекс АГ + AT+ меченый АГ, если в сыворотке присутствует ВИЧ-1 АГ (р 24), то образуется комплекс AT+ АГ + меченое ферментом AT. После отмывки комплекса проводится инкубация с ТМБ - субстратом. При наличии в образце анти-ВИЧ- I, анти-ВИЧ 1 группы О, антиВИЧ-2 антител и/или ВИЧ-1 антигена, развивается интенсивная окраска, при отсуютвии их окрашивания не происходит.

При постановке ИФА в случае получения положительного результата анализ проводят еще 2 раза (с той же сывороткой от больного). При получении хотя бы еще одного позитивною результата диагностика ВИЧ- инфекции продолжается более специфичным методом иммунного блотинга (ИБ), позволяющего выявить антитела к отдельным белкам ретровируса. Только после положительного результата в ИБ возможно заключение об инфицированности лица ВИЧ.

---

Смотрите также файлы

• П п Имя.docx

• .docx

• Понятие научной, религиозной, профессиональной этики.docx

• Правила не распространяются на проведение экскурсионных мероприятий и организованных походов.docx

• Вариант 1 Приведите основные физические свойства жидкости.docx