Файл: УМКД-Токс.химия-2012-2013-рус.docx

На догоспитальном этапе бригада скорой помощи проводит сбор вещественных доказательств отравления. Для транспортировки жидко­сти переливают в чистую емкость и тщательно закупоривают. Для проведения ХТА у живых лиц берут пробы мочи и промывных вод желудка при отравлении нераспознанным ядом (первая порция 200 мл). При поступлении пострадавшего в стационар до начала инфузионной терапии берут пробы крови и мочи. В стационаре врач-токсиколог на основании клинических симптомов и результатов предварительных ис­пытаний биожидкостей и вещественных доказательств определяет на­правление поиска токсиканта. При химико-токсикологическом исследовании сначала анализиру­ют пробы мочи, осуществляя некоторые частные капельные химиче­ские реакции, хроматографический скрининг щелочных, нейтральных и кислых извлечений (при определении лекарственных токсикантов), летучих веществ (при определении алкоголя и его суррогатов).

На начальном этапе ХТА изолируют токсичное вещество из биоло­гического материала. Это достигается экстракцией органическими рас­творителями при различных рН, реэкстракцией, дистилляцией, сорбцией или минерализацией органической матрицы (при определении металлических ядов). Далее проводится качественное определение токсиканта химиче­скими реакциями или инструментальными методами. Окончательный диагноз отравления ставит врач-токсиколог на основа­нии результатов ХТА в комплексе с данными клинического обследования.

2. АЛГОРИТМ РЕШЕНИЯ СИТУАЦИОННОЙ ЗАДАЧИ

В протоколе выполнения ситуационной задачи должны быть отражены следующие вопросы.

1. Правила направления и приема объектов исследования.

1.1 Взятие и направление объектов исследования.

1.2 Прием вещественных доказательств. Регистрация.

1.3 Документация, сопровождающая вещественные доказательства; документ, служащий основанием для проведения ХТА (в частнос­ти, судебно-химической экспертизы).

1.4 Наружный осмотр упаковки, объектов исследования.

1.5 Установление наличия консервирования объектов.

1.6 Документация при проведении ХТА.

1.7 Хранение вещественных доказательств, документации.

2. Физико-химические характеристики, токсикокинетика и метаболизм анализируемых вешеств-токсикантов.

2.1. Перечень веществ, подлежащих судебно-химическому исследо­ванию.

2.2. Природа и физико-химические характеристики токсиканта(ов)

2.3. Пути введения токсиканта(ов).

2.4. Механизмы токсичности. Уровни повреждений: молекулярный, биохимический, клеточный, тканевой, организменный.

2.5. Токсикокинетические параметры

2.6. Метаболизм.

2.7. Способы элиминирования.

НЕОХОДИМО принять решение о выборе методов анализа и спо­собах пробоподготовки, организовать работу лаборатории, основываясь на принципах GLP.

3. Стадии пробоподготовки и составление схемы изолирования.

---

3.1. Предварительная обработка.

3.2. Гидролиз конъюгированных метаболитов (при необходимости).

3.3. Экстракция.

3.4. Очистка.

3.5. Дериватизация (при необходимости).

4. Методы химико-токсикологического анализа.

Таблица предусматривает методы анализа для различных групп ток­сикантов. Однако при необходимости проводить исследование на элемент­ный сослав токсикантов, следует добавить в категорию «А» методы элемен­тного анализа: ИСП-МС, АЭС-ИСП, РФА, ААС, НАА.

Категория А	Категория В	Категория С
Масс спектрометрия	Тонкослойная хроматография	Цветные тесты
ИК спектроскопия	Микрокристаллические тесты	Иммунные методы
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса	Газовая хроматография	Точка плавления
	Жидкостная хроматография	Уф спектроскопия
	Спектрометрия ионной подвижности	Флуоресценция
	Капиллярньй электрофорез
	Только для конопли: ботаническое исследование (макро и микро)

Варианты использования

• А + (А или В или С).

• В + В + (В или С).

• Комбинированные методы (ГМ-МС) рассматриваются как два раздельных метода

4.1. Мегод тонкослойной хроматографии. Исследование в общих и частных системах растворил елей (КАТЕГОРИЯ В).

4.1.1. Достоинства метода. Чувствительность. Предел обнаружении.

4.1.2. Условия хромагографирования, выбор сорбента, систем рас­твори гелей, стандарты «метчиков», длина пробега раствори­теля, время насыщения камеры парами растворителя.

4.1.3. Обнаружение веществ на хромалографической пластинке.

• Выбор детектирующих реагентов.

• Значения величин КГанализируемых веществ.

• Способы проведения ТСХ-анализа.

4.1.4. Интерпретация результатов.

4.2. Иммунохимичеекие методы анализа (КАТЕГОРИЯ С).

4.2.1. Выбор метода (например, гегерогенный иммунофермент-ный метод или гомогенный анализ и т.д.).

4.2.2. Принципы обнаружения веществ.

4.2.3. Ложноположителылые, ложноотринагельные результаты.

4.2.4. Отбор образцов и хранение.

4.2.5. Мелодика проведения анализа.

4.2.6. Интерпретация результатов. Достоинства, недостал ки мето­да (чувсл ви гельносл ь, специфичность и т. п.).

5. Спектрометрия в УФ и видимой областях спектра (КАТЕГОРИЯ С).

• Определить, к какой группе относится анализируемое ве­щество — имеет или не имеет специфическое поглощение, изменяющееся в зависимости от рН среды.

• Привести спектральные характеристики.

• Подготовка пробы к анализу.

• Интерпретация результатов. Достоинства, недостатки мето­да (чувствительность, специфичность и т. п.).

6. ВЭЖХ анализ, ГХ анализ и др. методы КАТЕГОРИИ «В».

• Выбор условий разделения и (или) определения веществ.

• Определение градуировочной характеристики хроматографа (или других приборов) и пределов обнаружения анализиру­емых веществ.

---

• Подголовка биологического объекта к анализу.

• Качественный анализ биопробы.

• Количественное определение (способы расчета количест­венного определения).

• Интерпретация результатов. Достоинства, недостатки мето­да (чувствительность, специфичность и г. п.).

7. ГХМС, ИКС, ЯМР (ПМР)и др. методы КАТЕГОРИИ «А».

• Подготовка биологического обьекта к анализу.

• Качественный анализ биопробы (например, библиотека масс-спектров, ПМР спектров и др.).

• Количественное определение (способы расчета количест­венного определения).

• Интерпретация результатов.

8. Микрокристаллоскоиические методы (КАТЕГОРИЯ В).

9. Химические методы анализа (КАТЕГОРИЯ С).

10. Морфологические методы (КАТЕГОРИЯ В).

11. Фармакологические методы (КАТЕГОРИЯ В).

НЕОБХОДИМО обобщить и сопоставить результаты анализа, ин­формацию о токсикокинетических и физико-химических параметрах ток­сиканта, клинических или патологоанагомических признаках отравления и приступить к интерпретации результатов ХТА.

12. Интерпретация результатов анализа.

13. Заключение об обнаружении и количественном содержании токси­кантов в биообъектах (и вещественных доказательствах).

Подпись, число.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ЗАНЯТИЙ

(практические, семинарские, лабораторные)

Тема 4 - Завершение решения многоуровневой ситуационной задачи. Написание заключения аналитической диагностики.

Цель: усвоение студентами схемы химико-токсикологического экспертизы при острых отравлениях и написание заключения аналитической диагностики.

Задачи обучения: научиться составлению схемы химико-токсикологической экспертизы и написанию заключения аналитической диагностики.

Форма проведения: групповое обсуждение теоретического материала и выполнение заданий парами студентов.

Задания по теме:

Задание 1 (групповое обсуждение теоретических вопросов по теме занятия)

1. Методология анализа. Направленность анализа в зависимости от клинических данных.

2. Принцип рационального сочетания методов.

3. Особенности проведения направленного анализа. Скрининг-анализ.

4. Воспроизводимость методов применительно к анализу биологических жидкостей.

5. Количественный анализ.

6. Документация химико-токсикологического анализа. Составление заключения.

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. - М.,"Медицина", 1994. –189с.

4. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272с.

Контрольные вопросы:

1. Особенности клинико-токсикологического анализа.

2. Требования к химико-токсикологическому анализу при острых отравлениях лекарственными веществами.

3. Методология анализа.

4. Принцип рационального сочетания методов.

5. Составление заключения химико-токсикологического анализа.

---

Тема 5

Семинар на тему: Состояние и перспективы развития химико-токсикологической экспертизы (исследования)

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. Требования, предъявляемые к выполнению и оформлению ситуационных задач

В химико-токсикологической лаборатории ведется журнал регистра­ции анализов. Это юридический

документ. Журнал должен быть прош­нурован и содержать пронумерованные страницы. В журнал вносят:

• название отделения, дату, номер анализа, фамилию и инициалы пострадавшего, номер истории болезни, диагноз (предварительный и окончательный);

• объект исследования (кровь, моча, волосы);

• время отбора и доставки биологической пробы;

• выбранный метод исследования и результат проведенного анализа. Регистрацию завершает подпись специалиста клинической лабора­тории, выполнявшего анализ.

Форма представления самостоятельной работы

На титульном листе следует написать:

ТОКСИКОЛОГИЯ

ЦИКЛ №

Задача №

Выполнил студент (ка) ____________________________________

курса Фармацевтического факультета КазНМУ им. С.Д.Асфендиярова, (Фамилия, Имя, Отчество)

Дата выполнения работы __________

Опенка преподавателя __________

ФИО преподавателя_________________

Работа должна быть подписана студентом.

Форма представления решения задачи

I. Информационный блок

Физико-химические характеристики, фармакокинетические и фармакодинамические параметры токсикантов	ТОКСИКАНТЫ
	1 Химическая формула	2 Химическая формула
1	2	3
Растворимость в Н,0
Коэф.распределения
рКа
Период полувыведения
Связывание с белками (%)
Клиренс
Vd
Поглощение в УФ области
Поглощение в ИК области
Основные и характеристические ионы в масс спектрах
Диапазон концентраций в крови: терапевтическая; токсическая; летальная
Диапазон концентраций в моче; терапевтическая; токсическая; летальная
Диапазон концентраций в печени и других органах (указать, каких): терапевтическая; токсическая; летальная
Диапазон концентраций в нетрадиционных объектах (указать, каких): терапевтическая; токсическая; летальная
Токсикокинетические особенности пероральных, ингаляционных, инъекционных, транедермальных и других способов поступления токсикантов

Пояснительная записка к информационному блоку

• Выделить фрагменты молекулы токсиканта, обеспечивающих высо­кую (низкую) растворимость в воде и органических растворителях.

---

• Указать механизмы токсичности. Уровни повреждений: молекуляр­ный, клеточный, биохимический, тканевой, организменный. Рецеп­торы токсичности. Молекулярные механизмы межклеточной комму­никации. Молекулярные мишени — рецепторные комплексы.

• Указать механизмы транспорта токсиканта через мембрану (пассивная диффузия, активный транспорт и т.д.).

• Определить характер токсикантов (кислотный, основной, нейтраль­ный); написать схемы ионизации данных соединений при рН = 1,0; 7,4; 10,0 и рассчитать степень ионизации (а.%) при данных значени­ях рН. Указать, на каком участке ЖКТ при пероралыюм употреблении будет наблюдаться наиболее значительное всасывание.

• Объяснить изменение (отсутствие изменений) в УФ-спектре при 3 зна­чениях рН (1,0; 7,4; 10,0).

• Написать формулы возможных метаболитов (фазы 1 и 11) для анали­зируемых соединений.

II. Аналитический блок: этапы решения задачи

Этапы проведения ХТА	ТОКСИКАНТЫ
	1 Химическая формула	2 Химическая формула
1. Правовые основы проведения экспертизы
2. Составление схемы проведения экспертизы*
3. Адекватный выбор биообъектов
4. Адекватный выбор способа пробоподготовки
5. Описание процедуры пробоподготовки
6. Адекватный выбор предварительных методов анализа
7. Краткая методика выполнения анализа
8. Адекватный выбор подтверждающих методов анализа
9. Адекватный выбор условий проведе­ния анализа указанными методами
10. Адекватный выбор способа расчета количественного определения токси­кантов
11. Интерпретация полученных результатов*
12. Заключение*. Порядок выдачи заключения
13. Представление заключения «учебной» экспертизы'
14. Список используемой литературы по форме*

' Материалы указанных пунктов должны быть представлены в виде приложений к таблице.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ЗАНЯТИЙ

(практические, семинарские, лабораторные)

Кредит № 4

1. Тема 1 – Аналитическая диагностика наркоманий и токсикоманий. Опиаты. Каннабиноиды. Фенилалкиламины. ЛСД. Физико-химические свойства. Фармакокинетика и метаболизм. Доказательство наличия наркотиков в различных биообъектах.

2. Цель: Студенты должны знать аналитическую диагностику наркоманий и токсикоманий и уметь проводить освидетельствование живых лиц на предмет потребления наркотических и одурманивающих веществ.

3. Задачи обучения: студенты должны научиться на основе знания физико-химических свойств и метаболизма опиатов, каннабиноидов, фенилалкиламинов, ЛСД проводить аналитическую диагностику наркоманий и токсикоманий.

---